本文選題：高密度脂蛋白模擬肽Reverse-D-4F + 高脂飲食小鼠�。� 參考：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)是危害人類健康最嚴(yán)重的心腦血管疾病之一,故阻止AS的進(jìn)展已成為基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)的熱點(diǎn)課題。人類飲食情況已被證明在心血管疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用。已有報道發(fā)現(xiàn),無論在健康人群還是在心血管患者中,高脂飲食均可誘導(dǎo)其血管功能障礙,降低外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞(endoth elial progenitor cells,EPCs)水平,同時增加白細(xì)胞數(shù)量;最近zhang等研究發(fā)現(xiàn),Apo A-I模擬肽D-4F會通過內(nèi)皮一氧化氮合酶(endothelial nitricoxide synthase,eNOS)/一氧化氮(nitric oxide,NO)信號通路促進(jìn)EPCs的增殖、遷移和粘附。近期發(fā)現(xiàn)Apo A-I模擬肽reverse-D-4F,按照D-4F氨基酸順序反向排列,通過抑制血管壁內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥和氧化反應(yīng),進(jìn)一步降低主動脈竇AS斑塊的面積及斑塊巨噬細(xì)胞的數(shù)量,同時reve rse-D-4F還具有提高HDL(high density lipoprotein,HDL)功能的作用。然而reverse-D-4F對高脂飲食小鼠外周血細(xì)胞亞群的影響,和對體內(nèi)和體外EPCs的保護(hù)作用尚不清楚。本研究通過觀察各組小鼠外周血EPCs、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞各亞群的數(shù)量,動脈壁炎癥因子水平和祖細(xì)胞的數(shù)量,各組小鼠骨髓源EPCs功能,來研究A poA-I模擬肽reverse-D-4F對高脂飲食小鼠EPCs數(shù)量和功能的影響及其機(jī)制。1.小鼠骨髓單個核細(xì)胞誘導(dǎo)分化為EPCs的生物學(xué)特性研究比較差速貼壁方法分離的不同時間點(diǎn)貼壁的小鼠骨髓單個核細(xì)胞(mononuclear cells,MNCs)誘導(dǎo)分化為EPCs的生物學(xué)特性,探討最適宜貼壁時間。Ficoll密度梯度離心分離小鼠骨髓MNCs,接種于預(yù)先鋪有纖維連接蛋白的培養(yǎng)板上,定義為1 d貼壁細(xì)胞組,取1 d非貼壁細(xì)胞再接種為3 d貼壁細(xì)胞組,繼續(xù)培養(yǎng)2 d取非貼壁細(xì)胞再接種為3 d非貼壁細(xì)胞組,繼續(xù)培養(yǎng)20 d后,分別檢測3組誘導(dǎo)分化EPCs亞群表面標(biāo)志、粘附能力和成血管能力。結(jié)果顯示,1 d貼壁細(xì)胞中CD34+、FLK-1+、CD34+/FLK-1+細(xì)胞數(shù)明顯多于3 d貼壁細(xì)胞和3 d非貼壁細(xì)胞(P0.01);1 d貼壁細(xì)胞粘附能力、成血管能力均顯著高于3 d貼壁細(xì)胞和3 d非貼壁細(xì)胞;1 d貼壁細(xì)胞和3 d貼壁細(xì)胞eNOS表達(dá)量無顯著差異,但均顯著高于3 d非貼壁細(xì)胞(P0.01);3 d貼壁細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表達(dá)水平顯著高于1 d貼壁細(xì)胞和3 d非貼壁細(xì)胞(P0.01)。以上結(jié)果提示,1d貼壁小鼠骨髓MNCs誘導(dǎo)分化的EPCs生物學(xué)功能顯著高于3 d貼壁細(xì)胞和3 d非貼壁細(xì)胞;3 d貼壁細(xì)胞較1 d貼壁細(xì)胞和3 d非貼壁細(xì)胞表達(dá)較多的VEGF,1 d貼壁細(xì)胞和3 d貼壁細(xì)胞eNOS表達(dá)高于3 d非貼壁細(xì)胞。小鼠骨髓EPCs誘導(dǎo)分化培養(yǎng)最適宜貼壁時間為1~3 d。2.Reverse-D-4F提高EPCs功能及其機(jī)制研究載脂蛋白A-I模擬肽抑制apo E敲除小鼠AS的發(fā)展;EPCs可以修復(fù)致AS的因素誘導(dǎo)的受損內(nèi)皮細(xì)胞。本研究探明了apo A-I模擬肽reverse-D-4F對小鼠骨髓來源晚期EPCs的增殖、遷移和體外成血管功能的影響,發(fā)現(xiàn)reverse-D-4F(10 100 mg/ml)提高了EPCs的增殖、遷移和體外成血管功能,激活了AKT和eNOS,并呈劑量依賴性。LY294002(PI3激酶抑制劑)和L-NAME(一氧化氮合酶抑制劑)明顯抑制reverse-D-4F介導(dǎo)的EPCs增殖、遷移和體外成血管生物學(xué)功能的提高,并且LY294002明顯抑制reverse-D-4F誘導(dǎo)的AKT和eNOS的激活。結(jié)果表明,reverse-D-4F部分通過PI3K/AKT/eNOS信號通路,提高EPCs增殖、遷移和體外成血管功能。3.Reverse-D-4F增加高脂飲食小鼠EPCs數(shù)量和功能及其機(jī)制研究盡管HDL具有改善EPCs的功能,但HDL載脂蛋白AI模擬肽reverse-D-4F對EPCs的動員和損傷修復(fù)仍有待進(jìn)一步研究。本研究觀察了reverse-D-4F對高脂飲食C57BL/6J小鼠外周血細(xì)胞亞群的影響和reverse-D-4F對腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)誘導(dǎo)EPCs功能受損的改善。發(fā)現(xiàn)高脂飲食顯著降低了EPCs的數(shù)量、遷移和淋巴細(xì)胞在白細(xì)胞中的百分比;然而,也顯著增加了外周血中白細(xì)胞數(shù)量、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞占白細(xì)胞的百分比,和血漿中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和TNF-α的水平。reverse-D-4F明顯抑制高脂飲食對外周血細(xì)胞亞群及細(xì)胞因子水平的影響,增加血漿中基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1α(stromal cell derived factor 1α,SDF-1α)水平。體外研究證明,TNF-α通過抑制AKT和eNOS的活性來抑制EPCs增殖、遷移和體外成血管形成,reverse-D-4F能恢復(fù)上述TNF-α誘導(dǎo)的EPCs的損傷、AKT和eNOS的激活。PI3激酶(PI3K)抑制劑(LY294002)和AKT抑制劑(perifosine)明顯抑制reverse D-4F對TNF-α誘導(dǎo)EPCs功能損傷的修復(fù)作用。我們的研究結(jié)果表明,reverse D-4F可能是通過增加外周血中SDF-1α水平,降低TNF-α水平來恢復(fù)高脂飲食小鼠EPCs的數(shù)量,并且能夠部分通過PI3K/AKT信號通路修復(fù)TNF-α誘導(dǎo)的EPCs的功能障礙。
[Abstract]:鍔ㄨ剦綺ユ牱紜寲(Atherosclerosis,AS)鏄嵄瀹充漢綾誨仴搴鋒渶涓ラ噸鐨勫績鑴戣綆＄柧鐥呬箣涓，

本文編號：1776175