本文選題：慢性間歇性低壓低氧 + 腎血管性高血壓��； 參考：《河北醫(yī)科大學》2015年博士論文

【摘要】：有關高血壓病發(fā)病機制、治療策略的研究及開發(fā)一直是基礎和臨床醫(yī)學所共同關注的熱點。流行病學資料顯示：高原居民的高血壓發(fā)病率明顯低于平原人群,提示高原低氧適應具有抗高血壓作用。慢性間歇性低壓低氧(Chronic intermittent hypobaric hypoxia, CIHH)是指在一定時間內間斷的暴露于低壓低氧環(huán)境內(模擬高原環(huán)境低氧),而其余時間暴露于常氧環(huán)境。有研究報道,CIHH對原發(fā)性高血壓病人和自發(fā)性高血壓大鼠具有降壓作用。近來,我們利用兩腎一夾方法(2K1C)制備大鼠腎血管性高血壓模型(Renal vascular hypertension, RVH),結果表明CIHH可明顯降低RVH大鼠動脈血壓,證實CIHH具有抗腎血管性高血壓作用,但其機制尚未闡明。大電導鈣激活鉀通道(Large-conductance calcium-activiated potassium channel, BKca),作為血管平滑肌上主要的鉀通道,在調節(jié)血管,特別是沮力血管張力中發(fā)揮著重要作用。高血壓主要表現為外周阻力血管包括小動脈和微動脈張力持續(xù)增加,以及血管對縮血管物質反應性增強或是對舒血管物質反應性減弱。有證據表明,高血壓的發(fā)生發(fā)展過程伴隨BKCa通道功能的改變。我們以往研究顯示,CIHH處理可使大鼠胸主動脈舒張增強。因此,我們猜想,CIHH可能通過調控BKCa通道,增強阻力血管舒張或減弱收縮,降低RVH大鼠阻力血管張力,發(fā)揮抗高血壓作用。腸系膜動脈在全身的動脈中所占比例最大,是形成全身外周阻力的主要血管,是影響動脈血壓的重要因素。本研究旨在應用腎血管性高血壓大鼠,以大鼠腸系膜動脈上BKCa通道為研究靶點,通過微血管張力測定western-blot和全細胞膜片鉗等方法從整體、組織和細胞分子水平探討CIHH抗腎血管性高血壓的血管源性機制。本研究分為三部分：(1)通過鼠尾動脈血壓測定法確定CIHH對腎血管性高血壓大鼠的降壓作用；通過微血管張力測定法明確CIHH對大鼠腸系膜動脈舒縮活動的影響。(2)通過微血管張力測定法探討B(tài)KCa通道在CIHH血管舒縮活動調節(jié)中的作用；利用全細胞膜片鉗牙western-blot方法檢測CIHH對血管平滑機BKCa通道電流和蛋白表達的影響。(3)通過全細胞膜片鉗和、estern-blot方法探討CIHH調控BKCa通道的分子機制或NO-cGMP-PKG信號通路。第一部分慢性間歇性低壓低氧對腎血管性高大鼠腸系膜動脈舒縮活動的影響目的：明確CIHH對腎血管性高血壓大鼠的降壓作用以及CIHH對高血壓大鼠腸系膜動脈收縮和舒張的影響。方法：大鼠隨機分為四組：假手術組(SHAM)、間歇性低壓低氧處理組(CIHH)、腎血管性高血壓組(RVH)、腎血管性高血壓+間歇性低壓低氧處理組(RVH+CIHH)。 CIHH組大鼠置于低壓氧艙中,接受相當于海拔5000m高度、28天、每天6小時的低壓低氧處理,其余時間置于常氧不境。RVH組大鼠通過兩腎一夾方法,利用Q形銀夾縮窄一側腎動脈,造成腎血管性高血壓。SHAM組大鼠只接受手術,而不縮窄腎動脈。RVH+CIHH組大鼠在產生腎血管性高血壓后接受28天CIHH處理。每周定時測量各組動物的體重和血壓。利用微血管環(huán)張力測定法分別觀察PE和AngⅡ誘導的動脈環(huán)收縮、ACh誘導的動脈內皮依賴性舒張和SNP誘導的非內皮依賴性舒張。結果：1 CIHH處理對正常大鼠基礎血壓和體重無影響(P0.05),但可顯著對抗RVH大鼠血壓的升高和體重的降低(P0.05)。2與SHAM大鼠相比較,RVH大鼠腸系膜動脈環(huán)對AngⅡ和PE反應性提高、收縮增強(P0.05)；CIHH大鼠腸系膜動脈環(huán)對AngⅡ, PE收縮反應性降低、收縮減弱(P0.05),并可對抗RVH大鼠動脈環(huán)收縮的增強(P0.05)。3 RVH大鼠腸系膜動脈內皮依賴性舒張反應降低(P0.05),CIHH處理可增加腸系膜動脈內皮依賴性舒張反應(P0.05),并對抗RVH大鼠腸系膜動脈內皮依賴性舒張的降低(P0.05)。4與SHAM大鼠相比,L-NAME對RVH大鼠內皮依賴性舒張的阻斷效應顯著降低(P0.05),對CIHH大鼠內皮依賴性舒張的阻斷效應顯著增強(P0.05),并可對抗RVII大鼠對L-NAME阻斷效應的降低(P0.05)。5 RVH大鼠腸系膜動脈非內皮依賴性舒張明顯降低(P0.05),CIHH處理可增加大鼠腸系膜動脈非內皮依賴性舒張反應(P0.05),對可抗RVH大鼠腸系膜動脈非內皮依賴性舒張降低(P0.05)。結論：1 CIHH處理對腎血管性高血壓大鼠具有明顯的降壓作用。2 CIHH的抗腎血管性高血壓的作用可能通過降低腸系膜動脈收縮、增強內皮依賴性和非內皮依賴性舒張所實現。第二部分BKca通道參與CIHH調控腸系膜動脈舒縮活動目的：探討B(tài)KCa通道在CIHH對大鼠腸系膜動脈舒縮活動調控中的作用及其機制。方法：大鼠隨機分為四組：假手術組(SHAM)、間歇性低壓低氧處理組(CIHH)、腎血管性高血壓組(RVH)、腎血管性高血壓+間歇性低壓低氧處理組(RVH+CIHH)。 CIHH組大鼠置于低壓氧倉中,接受相當于每拔5000m高度、28天、每天6小時的低壓低氧處理,其余時間置于常氧環(huán)境。RVH組大鼠通過兩腎一夾方法,利用Q形銀夾縮窄一側腎動脈,造成腎血管性高血壓。SHAM組大鼠只接受手術,而不縮窄腎動脈。VH+CIHH組大鼠在產生腎血管性高血壓后接受CIHH處理。每周定時則量各組動物的體重和血壓。利用微血管環(huán)張力測定法分別觀察BKCa通道開放劑和阻斷劑對大鼠腸系膜動脈收縮和舒張的影響；采用急性酶解法分離大鼠腸系膜動脈平滑肌細胞(VSMC)。利用穿孔全細胞膜片鉗觀察BKCa通道的宏觀電流,利用western-blot方法檢測BKCa通道蛋白表達變化。結果：1 BKCa通道開放劑NS1619可顯著抑制各組動脈環(huán)由PE誘發(fā)的收縮,而CIHH動脈環(huán)的抑制程度顯著增加(P0.05),并可對抗RVH動脈環(huán)抑制程度的降低(P0.05)。2 BKCa通道阻斷劑1BTX可顯著增強各組由PE誘發(fā)的收縮,而CIHH動脈環(huán)的抑制程度顯著增強(P0.05),并可對抗RVH大鼠收縮抑制程度的降低(P0.05)。3 BKCa通道開放劑NS1619可濃度依賴性地誘發(fā)各組動脈環(huán)舒張,而CIHH動脈環(huán)對NS1619反應性明顯增加(P0.05),并可對抗RVH大鼠動脈環(huán)對NS1619反應性的降低(P0.05)。4 BKCa通道阻斷劑]BTX可顯著抑制各組動脈環(huán)由ACh誘導的內皮依賴性舒張,而CIHH動脈環(huán)的抑制程度顯著增加(P0.05),并可對抗RVH動脈環(huán)抑制程度的降低(P0.05)。5與SHAM組相比較,RVH動脈平滑肌細胞BKCa通道電流明顯下降(P0.05),CIHH動脈平滑肌細胞BKCa通道電流明顯增加(P0.05),并可對抗RVH動脈平滑肌細胞BKCa通道電流的降低(P0.05)。6 RVH大鼠腸系膜動脈BKCa通道β1亞單位表達下調(P0.05),CIHH大鼠BKCa通道β1亞單位表達上調(P0.05),并可對抗RVH大鼠BKCa通道β1亞單達下調。BKCa通道α亞單位表達在各組腸系膜動脈間無明顯差異(P0.05)。結論：1 RVH大鼠腸系膜動脈平滑肌細胞BKCa通道電流明顯下降,通道功能降低；CIHH大鼠腸系膜動脈平滑肌細胞BKCa通道電流明顯增加、通道功能增強。2 CIHH可通過開放大鼠腸系膜動脈血管平滑肌細胞BKCa通道,導致動脈環(huán)收縮減弱和舒張增強。3 RVH大鼠腸系膜動脈BKCa通道β1亞基表達下調、通道功能降低,導致腸系膜動脈收縮反應增強、舒張反應降低。CIHH通過上調BKCa通道p1亞基,增強BKCa通道功能、對抗RVH大鼠腸系膜動脈收縮增強和抒張減弱,維持血管正常舒縮反應。第三部分CIHH調控BKCa通道的NO-cGMP-PKG信號通路目的：探討NO-cGMP-PKG信號通路在CIHH調控BKCa通道中的作羽和機制。方法：大鼠隨機分為四組：假手術組(SHAM)、間歇性低壓低氧處理組(CIHH)、腎血管性高血壓組(RVH)、腎血管性高血壓+間歇性低壓低氧處理組(RVH+CIHH)。CIHH組大鼠置于低壓氧倉中,接受相當于每拔5000m高度、28天、每天6小時的低壓低氧處理,其余時間置于常氧環(huán)境。RVH組大鼠通過兩腎一夾方法,利用Q形銀夾縮窄一側腎動脈,造成腎血管性高血壓。SHAM組大鼠只接受手術,而不縮窄腎動脈。RVH+CIHH組大鼠在產生腎血管性高血壓后接受28天CIHH處理。每周定時測量各組動物的體重和血壓。通過急性酶解法獲得大鼠腸系膜動脈VSMCs。利用穿孔全細胞膜片鉗方法記錄NO-cGMP-PKG信號分子對VSMCs上BKCa通道電流的影響。通過western-blot方法檢測腸系膜動脈eNOS蛋白表達變化。結果：1 NO前體L-arg顯著增加大鼠腸系膜動脈VSMCs上BKCa電流；與SHAM細胞相比較,RVH細胞BKCa通道增加程度顯著降低(P0.05),CIHH細胞BKCa通道電流增加程度顯著提高(P0.05),并可對抗RVH細胞BKCa通道電流增加程度的降低(P0.05)。2 NOS拮抗劑L-NAME顯著抑制大鼠腸系膜動脈VSMC上BKCa電流；與SHAM細胞相比較,RVH細胞BKCa通道電流抑制程度顯著降低(P0.05),CIHH細胞BKCa通道電流抑制程度顯著提高(P0.05),并可對抗RVH細胞BKCa通道電流抑制程度的降低(P0.05)。3 NO供體SNP顯著增加大鼠腸系膜動脈VSMC上BKCa電流；與SHAM細胞相比較,RVH細胞BKCa通道電流增加程度顯著降低(P0.05),CIHH細胞BKCa通道增加程度顯著提高(P0.05),并可對抗RVH細胞BKCa通道電流增加程度的降低(P0.05)。4 NO清除劑PTIO顯著抑制大鼠腸系膜動脈VSMC上BKCa電流；與SHAM細胞相比較,RVH細胞BKCa通道電流抑制程度顯著降低(P0.05),CIHH細胞BKCa通道電流抑制程度顯著提高(P0.05),并可對抗RVH細胞BKCa通道電流抑制程度的降低(P0.05)。5 PKG激動齊8-BrcGMP顯著增加大鼠腸系膜動脈VSMC上BKCa電流；與SHAM細胞相比較,RVH細胞BKCa通道電流增加程度顯著降低(P0.05),CIHH細胞BKCa通道電流增加程度顯著提高(P0.05),可對}抗RVH細胞BKCa通道電流增加程度的降低(P0.05)。6 PKG阻斷劑KT5823顯著抑制大鼠腸系膜動脈VSMC上BKCa電流；與SHAM細胞相比較,RVH細胞BKCa通道電流抑制程度顯著降低(P0.05),CIHH細胞BKCa通道電流抑制程度顯著提高(P0.05),并可對抗RVH細胞BKCa通道電流抑制程度的降低(P0.05)。與SHAM大鼠相比較,RVH大鼠腸系膜動脈eNOS表達明顯降低(P0.05),CIHH大鼠腸系膜動脈eNOS表達明顯增加(P0.05),并可對抗RVH大鼠腸系膜動脈eNOS表達的降低(P0.05)。結論：1 CIHH處理可促進內源性和外源性NO對動脈平滑肌細胞BKCa通道功能的增強效應,對抗RVH大鼠NO對BKCa通道作用的減弱。2 CIHH處理可促進PKG激活對動脈平滑肌細胞BKCa通道功能的增強效應,對抗RVH大鼠PKG激活對BKCa通道作用的減弱。3 CIHH處理增強大鼠腸系膜動脈eNOS表達,對抗RVH大鼠腸系膜動脈eNOS表達的下調。4 CIHH處理通過激活NO-cGMP-PKG信號通路發(fā)揮BKCa通道調控作用。
[Abstract]:In this study , we have shown that CIHH can significantly decrease the blood pressure of rat thoracic aorta . It is shown that CIHH can significantly decrease the blood pressure of rat thoracic aorta . It is shown that CIHH can decrease the blood pressure of rat thoracic aorta .
The effect of CIHH on vasomotor activity in rat mesenteric artery was determined by means of microcapillary tension measurement .
The effects of CIHH on the current and protein expression of vascular smooth machine BK Ca channel were investigated by full - cell patch clamp and Western - blot . The effects of CIHH on the vasomotor activity of mesenteric artery in rats with renovascular hypertension were studied by using whole cell patch clamp and Western - blot . Results : 1 CIHH treated rats received 28 days of CIHH treatment . Results : 1 CIHH treated rats received 28 days of CIHH treatment after the production of renovascular hypertension . Results : 1 CIHH treated rats received 28 days of CIHH treatment after the production of renovascular hypertension .
The effect of CIHH on endothelium - dependent relaxation of rat mesenteric artery was significantly decreased ( P0.05 ) . The effect of CIHH on endothelium - dependent relaxation of rat mesenteric artery was significantly decreased ( P0.05 ) . The effect of CIHH on endothelium - dependent relaxation of mesenteric artery in rats was significantly decreased ( P0.05 ) . The rats in group CIHH group were placed in low pressure oxygen chamber and received low - pressure hypoxic treatment equivalent to 5000m altitude , 28 days , 6 hours a day . The rest of the rats were treated with CIHH through two - kidney - one clamp method .
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本文編號：1775827