本文選題：小鼠 + 肺高血壓模型��； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：目的右心導(dǎo)管法檢測小鼠右心室血液動力學(xué)指標(biāo),操作時間長,成本高且成功率低。本研究旨在建立一種呼吸機(jī)輔助的開胸直視操作檢測小鼠右心室血液動力學(xué)指標(biāo)的方法,并用以評估小鼠病理生理條件下的血液動力學(xué)狀態(tài)。方法雄性8周齡C57BL/6小鼠16只,采用完全隨機(jī)設(shè)計法將小鼠分為對照組和低氧組,每組8只。低氧組小鼠在模擬海拔5500 m環(huán)境的低壓低氧艙(氧濃度10%)內(nèi)持續(xù)飼養(yǎng),對照組小鼠飼養(yǎng)于常壓常氧環(huán)境中。3周后對兩組小鼠進(jìn)行血液動力學(xué)檢測,氣管插管,開胸,采用0.7 mmx 19mm密閉式留置針,從心尖處進(jìn)針5 mm測量右心室壓力。結(jié)果開胸法檢測小鼠右心室血液動力學(xué)指標(biāo),從氣管插管到獲得右心室血流參數(shù)耗時5-10 min,成功率100%。對照組和低氧組小鼠在麻醉狀態(tài)下心率差異無統(tǒng)計學(xué)意義[(306.4 ±11.5)次/min 比(320.4 ±16.0)次/min,p0.05]。低氧組小鼠右心室收縮壓高于對照組[(22.6±1.0)mmHg比(17.1±1.0)mmHg,p0.01],右心室平均壓高于對照組[(12.4±0.3)mmHg 比(9.6±0.8)mmHg,p0.01)],右心室內(nèi)壓最大上升速度和下降速度的絕對值均顯著大于對照組[(639.7 ± 47.7)mmHg/s 比(421.3 ± 30.6)mmHg/s 比和(-496.5 ± 40.6)mmHg/s 比(-324.3 ± 24.0)mmHg/s,p均0.01]。結(jié)論開胸方法檢測小鼠右心室血液動力學(xué)指標(biāo),操作簡便、成功率高,可以很好地反應(yīng)小鼠在不同病理生理條件下的血液動力學(xué)狀態(tài)。背景:右心衰是肺動脈高壓患者死亡的主要原因。在臨床中及早發(fā)現(xiàn)肺動脈高壓患者右心室變化對于疾病的預(yù)后具有重要作用,但是傳統(tǒng)超聲指標(biāo)不能在早期反應(yīng)右心室重構(gòu)和損傷。超聲二維斑點(diǎn)追蹤技術(shù)是一種新的無創(chuàng)的評估心室功能的手段,它在左心室評價中得到廣泛應(yīng)用,但是在右心室中研究較少。方法:一次性腹腔注射野百合堿(55mg/kg)構(gòu)建肺動脈高壓大鼠模型。在注射藥物后的第0天,第7天,第14天,第28天,第42天等多個時間點(diǎn)上,使用右心導(dǎo)管檢查術(shù)、傳統(tǒng)超聲、超聲二維斑點(diǎn)追蹤技術(shù)、心臟重量、病理染色評估大鼠的肺動脈結(jié)構(gòu)和壓力及右心室結(jié)構(gòu)和功能。結(jié)果:我們采用不同的研究方法經(jīng)過6周的連續(xù)觀察。右心導(dǎo)管結(jié)果顯示肺動脈壓力(mPAP)和傳統(tǒng)超聲測量的肺動脈直徑(PVdiam)在肺動脈高壓模型建模后的第二周顯著升高;但是傳統(tǒng)超聲檢測的右心室的結(jié)構(gòu)和功能在造模后第二周沒有變化,包括右心室及血管的結(jié)構(gòu)指標(biāo):右心室游離壁厚度(RVAW,d)、室間隔厚度(IVSd)、肺動脈直徑(PVdiam);功能指標(biāo):射血分?jǐn)?shù)(EF)、三尖瓣環(huán)位移(TAPSE)、血流加速時間比射血時間(PAAT/PAET)、肺動脈最大射血速度(PVpeakvel)。超聲二維斑點(diǎn)追蹤技術(shù)檢測的大鼠右心室壁的向心應(yīng)變力(RS,day0 v.s.day1435.54 ±4.21%v.s.22.14±3.61%,p0.05)和向心應(yīng)變率(RSR,day0 v.s.day14 6.58±0.671/Sv.s.4.19±0.51 1/S,p0.01)在第二周檢測出大鼠的右心室運(yùn)動的變化。使用大鼠第二周的應(yīng)變力(p= 0.08)和應(yīng)變率(p = 0.04)的中位數(shù)值,將這兩個指標(biāo)分為高分組和低分組,使用Kaplan-Meier統(tǒng)計學(xué)方法繪制死亡曲線。兩組均顯示高分組的預(yù)后比低分組的好,存活率高;第二周的應(yīng)變率能夠預(yù)測大鼠的預(yù)后。目的遺傳性肺動脈高壓和特發(fā)性肺動脈高壓是高致死性的罕見疾病,病理機(jī)制還不清楚。BMPR2是目前已知的最主要的肺動脈高壓的致病基因,但是直到目前尚未有理想的動物模型。我們通過回顧文獻(xiàn),確定BMPR2高頻突變位點(diǎn),為構(gòu)建遺傳修飾動物模型奠定基礎(chǔ)。方法首先通過PubMed數(shù)據(jù)庫中的文獻(xiàn)進(jìn)行查找,閱讀篩選;然后采用Excel整合數(shù)據(jù)庫,得到獨(dú)立突變的數(shù)據(jù)庫;再次,將數(shù)據(jù)庫中頻率大于3突變篩選出來,采用SIFT,Polyphen2,MutationTaster數(shù)據(jù)庫,評估突變位點(diǎn)的保守性,進(jìn)一步確認(rèn)該基因突變?yōu)橹虏⌒酝蛔?最后,綜合文獻(xiàn)信息數(shù)據(jù)庫信息篩選出合適構(gòu)架動物模型的突變。結(jié)果我們共得434個獨(dú)立的基因突變,通過Vector NTI軟件和UCSC數(shù)據(jù)庫確定基因的絕對位置;統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)的其中僅一次的突變占78%;突變分布在所有的編碼區(qū),但是主要分布在激酶結(jié)構(gòu)域。二次建庫總結(jié)出突變頻率大于等于3的突變,共26個,主要的突變類型為錯義突變和無義突變。對頻率大于等于3次的突變,采用SIFT數(shù)據(jù)庫進(jìn)行蛋白質(zhì)保守性篩選,得20個突變。突變頻率大于等于10的位點(diǎn)有4個,其中c.2695CT(p.R899X,n=11)已經(jīng)成功的制造了肺動脈高壓小鼠模型;c.C1471T(p.R491 W,n.= 11)在數(shù)據(jù)庫中突變頻次為11次。我們課題組于2004年通過遺傳性肺動脈高壓的研究報道過此基因突變;在SIFT數(shù)據(jù)庫的評分為0分(0.05 代表有害),在 Polyphen2 和 Mutation Taster 中評分均為 1(0.95 有害)。并且該基因突變與其他突變比較,在患者中分布范圍較廣。結(jié)論我們經(jīng)過閱讀文獻(xiàn)搜索和SIFT等數(shù)據(jù)庫等多重篩選,確定使用c.C1471 T(p.R491W)構(gòu)建BMPR2基因突變肺動脈高壓大鼠模型。
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【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R544.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李彥川;李欣欣;;幾種常用的肺動脈高壓動物模型簡述[J];醫(yī)學(xué)綜述;2012年01期

2 袁平;吳文匯;劉崠;張銳;荊志成;;改良心導(dǎo)管測定大鼠肺血管阻力的方法[J];中華心血管病雜志;2011年10期

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本文編號：1758648