本文選題：心肌纖維化 + 轉(zhuǎn)化生長因子-β1��； 參考：《山東大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：背景心肌纖維化嚴重影響心臟的正常功能,在外界因素刺激下,細胞外基質(zhì)中成分的異常是導(dǎo)致纖維化的最主要因素,而延緩或阻止纖維化的發(fā)生和進展可明顯改善心肌功能。隨著研究的不斷深入,通過調(diào)控細胞活性來影響心肌纖維化已成為治療該類疾病的主要目標。因此,了解心肌纖維化的發(fā)生機制及調(diào)節(jié)途徑顯得非常重要。當(dāng)心肌細胞接受外界不良刺激后,會通過一系列步驟將信號傳導(dǎo)入心肌細胞內(nèi)部,從而影響細胞的功能和活性。SH2B3屬于SH2B接頭蛋白家族成員之一,影響細胞內(nèi)分子的定位,可影響許多由Janus激酶和受體酪氨酸激酶介導(dǎo)的信號通路活性。研究表明,SH283參與造血細胞的分化,并與心肌梗死、代謝綜合征、多發(fā)性硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病關(guān)系相當(dāng)密切。在小鼠心肌梗死模型中,敲除了SH283表達后,其纖維化程度隨之升高,在當(dāng)前的研究成果中,已提示在心肌梗死后纖維化過程中SH2B3發(fā)揮了一定的作用,但到目前為止,關(guān)于該分子在心肌纖維化過程中的表達調(diào)控機制還不清楚。microRN A(miRNA)是一類含21-25個堿基的非編碼單鏈核苷酸,近年來被認為是一種新的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)子,可通過與靶基因的3’非翻譯區(qū)(3’untranslated region,3'UTR)相互作用來調(diào)節(jié)靶基因的表達,最終影響細胞活性。該分子的作用特點是同-miRNA可對多個靶基因進行同時調(diào)控。越來越多的證據(jù)表明,miRNA在心血管疾病,特別是心肌纖維化過程中發(fā)揮重要作用。最新有關(guān)研究已表明,在心肌梗死模型中miR-34a參與了心肌細胞收縮功能的調(diào)控,抑制其表達可提高心肌的收縮功能。目前Flister等研究均已發(fā)現(xiàn),IniR-34a通過靶向調(diào)控Smad4、促進分泌纖維化相關(guān)膠原,使其在心肌梗死后纖維化區(qū)域中的表達顯然上調(diào),并最終影響了心肌纖維化過程。研究目的(1)觀察轉(zhuǎn)化生長因子-β1對miR-34a和SH2B3表達的作用；(2)明確miR-34a對SH2B3的調(diào)控作用。方法為了證明miR-34a可能調(diào)控SH283的表達,本課題首先體外培養(yǎng)心肌細胞,分別在接受轉(zhuǎn)化生長因子-β1和缺氧處理后,提取總蛋白和RNA后,采用Western blot和qRT-PCR法檢測SH2B3在蛋白水平和mRNA水平的表達量變化；采用qRT-PCR法檢測接受以上刺激后,miR-34a的表達；在心肌細胞中轉(zhuǎn)染miR-34a mimics和miR-34a inhibitor后,采用Western blot和qRT-PCR法檢測SH283在蛋白水平和mRNA水平的表達量變化；構(gòu)建針對miR-34a作用位點的SH283熒光素酶報告基因載體,采用熒光素酶報告基因法檢測miR-34a對SH283基因3’UTR區(qū)活性的影響。結(jié)果實驗結(jié)果表明,在轉(zhuǎn)化生長因子-β1誘導(dǎo)心肌細胞作用過程中,SH2B3在mRNA和蛋白水平的表達均降低；miR-34a的表達水平升高；α-SMA蛋白的表達升高。Western blot和qRT-PCR結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-34a模擬物后,SH283的表達降低；轉(zhuǎn)染miR-34a抑制物后SH283的表達升高。熒光素酶報告檢測發(fā)現(xiàn),miR-34a可通過影響SH2B33'UTR活性,調(diào)控其表達。另外,在心肌細胞接受缺氧刺激后,SH283的表達量隨著刺激時間的延長而降低,miR-34a的表達則升高,這種表達的相反趨勢進一步證明兩者的相互調(diào)控關(guān)系。結(jié)論1.發(fā)現(xiàn)miR-34a可作用于SH2B3的3'UTR區(qū),從而調(diào)控其在心肌細胞中的表達。2.在TGF-β1及缺氧條件下,miR-34a與SH2B3表現(xiàn)出相反的表達趨勢,提示miR-34a/SH2B3參與TGF-β1及缺氧對心肌細胞的作用過程。
[Abstract]:Background myocardial fibrosis seriously affect the normal function of the heart, in the external factors under the stimulation of extracellular matrix components abnormalities are the main factors leading to the occurrence and progression of fibrosis, and delay or prevent fibrosis can significantly improve myocardial function. With the continuous deepening of research, influence of myocardial fibrosis by regulating cell activity has become the main the target for treating the diseases. Therefore, understanding the mechanism of myocardial fibrosis and regulation is very important. When the myocardial cells accept adverse external stimulation, through a series of steps to internal import myocardial cell signals, which affect cell function and activity of.SH2B3 is one of the SH2B adaptor protein family members influence intracellular localization molecules that can affect many by Janus kinase and receptor tyrosine kinase mediated signal pathway activity. The results show that SH283 is involved in hematopoiesis Cell differentiation, and myocardial infarction, metabolic syndrome, multiple sclerosis, systemic lupus erythematosus disease, rheumatoid arthritis and other diseases quite close. The mouse model of myocardial infarction, knocking down SH283 expression, the degree of fibrosis increased, in the current research, has suggested that SH2B3 to play a certain role in the process of fibrosis after myocardial infarction, but so far, the molecular process of myocardial fibrosis in the expression regulation mechanism is not clear.MicroRN A (miRNA) is a kind of non encoding single nucleotide containing 21-25 bases, in recent years is considered a new post transcriptional regulator with the target gene, 3 'untranslated region (3' untranslated region, 3'UTR) interact to regulate expression of target genes and ultimately affect the activity of cells. The molecular characteristics of the same -miRNA can be carried on the multiple target genes At the same time regulation. More and more evidence that miRNA in cardiovascular disease, especially play an important role in the process of myocardial fibrosis. The latest research has indicated that, in the model of myocardial infarction in miR-34a involved in the regulation of myocardial contractile function, inhibition of its expression can improve the systolic function of heart muscle. At present Flister research have been found IniR-34a Smad4, controlled by the target to promote the secretion of collagen, fibrosis, the expression of fibrosis after myocardial infarction in the region increased obviously, and ultimately affect the myocardial fibrosis process. The purpose of the study (1) to observe the expression of transforming growth factor beta 1 on miR-34a and SH2B3; (2) regulation clear miR-34a the SH2B3 method. In order to prove that miR-34a can regulate the expression of SH283, the first issue of myocardial cells in vitro, respectively in transforming growth factor beta 1 and after hypoxia treatment, extraction of total eggs White and RNA, expression of blot and qRT-PCR was detected by Western SH2B3 on mRNA and protein level were detected by qRT-PCR; accept the stimulation, the expression of miR-34a in myocardial cells; transfection of miR-34a mimics and miR-34a inhibitor, expression of blot and qRT-PCR were detected by Western and SH283 at protein level the level of mRNA; to construct the SH283 luciferase reporter vector miR-34a loci, effect of luciferase assay was used to detect miR-34a of SH283 gene 3 'UTR activity. The experimental results show that the transforming growth factor beta 1 induced myocardial cell process, the expression of SH2B3 at mRNA and protein levels were decreased; increase the expression level of miR-34a increased; the expression of a -SMA protein of.Western blot and qRT-PCR results showed that the transfection of miR-34a mimics, decreased the expression of SH283 ; the expression of SH283 increased transfection of miR-34a inhibitor. Luciferase reporter assay showed that miR-34a could affect the activity of SH2B33'UTR and the regulation of its expression. In addition, accept the hypoxia stimulation in myocardial cells, the expression of SH283 was decreased with time of stimulation, the expression of miR-34a was increased, the expression of the opposite trend further proved both the regulation of relationship. Conclusion 1. miR-34a can be found in the SH2B3 3'UTR area, so as to regulate the expression of.2. in myocardial cells in TGF- beta 1 and under hypoxic conditions, miR-34a and SH2B3 showed the opposite trend of expression, suggesting that miR-34a/SH2B3 in TGF- beta 1 and the effect of hypoxia on myocardial cells.

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R542.23

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 蔡明清;心肌細胞再生和腔室重塑[J];中國分子心臟病學(xué)雜志;2002年01期

2 李娜;;心肌細胞可以再生[J];科技導(dǎo)報;2009年08期

3 薛惠文;章靜波;;人類心肌細胞的更新[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2009年07期

4 崔曉兵;;人類成年心肌細胞可以更新[J];生理科學(xué)進展;2010年06期

5 蘇倩文;;心肌細胞可以再生[J];心血管病防治知識(科普版);2013年05期

6 周亮 ,曾曉榮,楊艷,劉智飛,李妙齡,裴杰;豚鼠心肌細胞急性酶分離方法[J];四川生理科學(xué)雜志;2000年02期

7 萬朝敏,俞紅吉,吳泰相,高云欽,周密,鄧建軍,王正榮;免疫損傷對離體培養(yǎng)心肌細胞力學(xué)特性的影響[J];中國醫(yī)學(xué)物理學(xué)雜志;2000年02期

8 賈士東,修瑞娟;心肌細胞功能的研究[J];中國微循環(huán);2000年03期

9 何作云,劉健;心肌細胞核鈣信號的研究[J];重慶醫(yī)學(xué);2002年02期

10 張家平;絲裂素活化蛋白激酶與心肌細胞效應(yīng)[J];重慶醫(yī)學(xué);2002年11期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張保國;趙萍;張文杰;;鉬對培養(yǎng)心肌細胞存活的影響[A];中國營養(yǎng)學(xué)會首屆微量元素專題討論會論文摘要匯編[C];1985年

2 房亞東;黃躍生;黨永明;張家平;張東霞;宋華培;張瓊;;上調(diào)微管相關(guān)蛋白4對缺氧早期心肌細胞活力影響的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會燒傷外科學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

3 唐陶;王世騏;莊茁;;基底應(yīng)變對心肌細胞的影響[A];北京力學(xué)會第14屆學(xué)術(shù)年會論文集[C];2008年

4 何作云;劉健;王培勇;;心肌細胞核鈣信號的研究[A];21世紀醫(yī)學(xué)工程學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2001年

5 何作云;劉健;;心肌細胞核鈣信號的研究[A];第九次全國生物物理大會學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2002年

6 滕苗;黃躍生;黨永明;房亞東;張瓊;;微管干預(yù)劑對缺氧心肌細胞糖酵解途徑關(guān)鍵酶的影響[A];第六屆全國燒傷救治專題研討會論文匯編[C];2009年

7 宋新愛;林元喜;樊小力;;心肌細胞的純化[A];中國病理生理學(xué)會第九屆全國代表大會及學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2010年

8 劉興茂;陳昭烈;劉紅;熊福銀;;心肌細胞體外三維培養(yǎng)的初步研究[A];中國生物工程學(xué)會第三次全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2001年

9 熊江輝;李瑩輝;聶捷琳;張曉鈾;丁柏;;槲皮素對回轉(zhuǎn)條件下心肌細胞—氧化氮合成的影響[A];中國宇航學(xué)會航天醫(yī)學(xué)工程專業(yè)委員會、中國空間科學(xué)學(xué)會空間生命專業(yè)委員會聯(lián)合學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2001年

10 陽冬梅;吳才宏;程和平;;鈣調(diào)蛋白對心肌細胞興奮—收縮耦聯(lián)的調(diào)節(jié)作用[A];第九次全國生物物理大會學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2002年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 劉黎;荷蘭培育心肌細胞取得進展[N];中國中醫(yī)藥報;2008年

2 編譯 曉魚;人類心肌細胞可再生[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2009年

3 孫國根;心肌細胞的形成和再生有望被誘導(dǎo)[N];中國醫(yī)藥報;2012年

4 吳偉農(nóng);心肌細胞能自我修復(fù)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2001年

5 陳丹;移植的人體細胞可與豚鼠受體心肌同步跳動[N];科技日報;2012年

6 記者胡德榮;心肌細胞能體外培養(yǎng)[N];健康報;2002年

7 楊洋;骨髓細胞生成心肌細胞[N];衛(wèi)生與生活報;2003年

8 吳理茂 李連達;中藥在心肌細胞移植中的作用[N];中國醫(yī)藥報;2003年

9 ;急性心梗治療獲重要突破 心肌細胞可以再生[N];中國保險報;2003年

10 記者 張曄;基因調(diào)控讓壞死的心肌細胞“復(fù)活”[N];科技日報;2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 吳東棟;硫化氫提高Cu/Zn-SOD和Mn-SOD活性的作用及其機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

2 徐磊;MMI-0100通過對心肌細胞及成纖維細胞中MK2的抑制作用降低心肌纖維化程度的研究[D];山東大學(xué);2015年

3 牟永潮;基于納米材料再造心肌組織生物學(xué)評價與心梗治療研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2015年

4 李娜;PDE5抑制劑Sildenafi1對心梗后心衰線粒體能量代謝保護及機制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 陳亮;miR-199a對大鼠心肌細胞自噬的調(diào)控研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 王曉麗;附子人參配伍對大鼠心肌細胞保護作用的研究[D];長春中醫(yī)藥大學(xué);2015年

7 肖劍鋒;碘化-N-正丁基氟哌啶醇對缺氧心肌細胞鈣穩(wěn)態(tài)的保護作用[D];汕頭大學(xué);2011年

8 張翠翠;MG53調(diào)節(jié)心臟輔助亞基KChIP2表達的分子機制及在心電穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)中的作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

9 張海彬;miR-711在心肌缺血再灌注損傷中的作用機制[D];吉林大學(xué);2016年

10 位庚;心肌微血管內(nèi)皮細胞損傷對心肌細胞的影響及通絡(luò)干預(yù)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 黃玉潔;miR-218調(diào)控小鼠胚胎干細胞體外定向分化心肌細胞研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 李品雅;華蟾毒精對心肌細胞L型鈣電流，鈣瞬變和收縮力的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 劉洋;野薔薇苷對H_2O_2誘導(dǎo)心肌細胞氧化損傷的保護作用及其機制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 朱燕梅;銀杏葉提取物保護心肌細胞抗氧化損傷及其基于Keap1/Nrf2/ARE通路的作用機制[D];成都醫(yī)學(xué)院;2015年

5 劉佳;活性氧誘導(dǎo)心肌細胞基質(zhì)金屬蛋白酶的激活及其分子機理[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

6 郝啟萌;NRG-1在缺血/再灌注冠脈微血管內(nèi)皮細胞—心肌細胞之間的作用及其機制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 王好;心肌細胞促進成纖維細胞膠原蛋白表達在糖尿病心肌病發(fā)生中的作用及分子機制[D];江蘇大學(xué);2016年

8 張婉婉;二甲基甲酰胺對心肌細胞炎性損傷的實驗研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

9 駱曉艷;艾塞那肽對高糖誘導(dǎo)的心肌細胞抗炎作用機制的探討[D];湖北科技學(xué)院;2016年

10 李世玲;糖基化終末產(chǎn)物誘導(dǎo)心肌細胞老化的機制及匹伐他汀的保護作用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號：1756066