本文選題：原發(fā)性高血壓 + microRNA-126　； 參考：《首都醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：【目的】1.通過基因芯片檢測人類多種micro RNA,發(fā)現(xiàn)micro RNA與高血壓病的相關(guān)性;2.通過構(gòu)建micro RNA-126基因敲減慢病毒載體,探討micro RNA-126作為基因靶點治療高血壓病的可行性;3.闡述micro RNA-126在原發(fā)性高血壓中發(fā)生發(fā)展的作用機制�！痉椒ā渴占挲g、性別、體重等相匹配的6例原發(fā)性高血壓病患者和4例健康人血液標(biāo)本,委托上�？党缮锕緈icro RNA芯片檢測兩組樣本micro RNA表達譜。采用人類免疫缺陷病毒-1(HIV-1)為來源的慢病毒載體,構(gòu)建mi R-126基因敲減慢病毒載體(lenti-mi R-126-KD)及干擾對照慢病毒載體(lenti-scramblemir)。自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)分為高劑量組(1*108,n=5)、低劑量組(1*107,n=6)、干擾對照組(5*107,n=6)、空白對照組(PBS 350ul,n=6),經(jīng)尾靜脈注射后,連續(xù)觀察8周應(yīng)用尾袖法采集收縮壓、舒張壓、平均壓及心率,8周后計算心體比值(Hw/Bw),留取心、腎、腦、肝、肺組織標(biāo)本進行冰凍切片,并在熒光顯微鏡下觀察慢病毒載體在體內(nèi)的分布情況,應(yīng)用天狼星紅苦味酸染色及HE染色,觀察高血壓靶器官損害情況;應(yīng)用ELISA法測定大鼠血清一氧化氮(NO)含量及各種重要生化指標(biāo)�！窘Y(jié)果】1.micro RNA-126的3’末端(1.410 vs 0.838,P=0.03)以及5’末端(1.799 vs0.997,P=0.03)在高血壓病患者中呈高表達,在健康人中呈低表達,且兩組間有顯著差異,P0.05;2.慢病毒載體構(gòu)建及表達:慢病毒載體構(gòu)建成功。在給藥后8周,各組織冰凍切片均可觀測到綠色熒光蛋白表達;3.血壓、心率:給藥前,各組無統(tǒng)一學(xué)差異(P0.05),給藥后,每周觀察血壓、心率變化情況,各組間均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);4.心體比值(mg/g):高劑量組(4.39±0.52),低劑量組(3.98±0.31),干擾對照組(3.96±0.19),空白對照組(4.28±0.39),P0.05,無統(tǒng)計學(xué)差異;5.天狼星紅苦味酸染色及HE染色:各組間組織形態(tài)差異不明顯;6.一氧化氮(umol/L):高劑量組(8.30±5.01),低劑量組(8.08±6.35),干擾對照組(13.87±9.56),空白對照組(4.52±2.12),P0.05,無統(tǒng)計學(xué)差異;【結(jié)論】1.在人群中證實,micro RNA-126在高血壓病患者中呈高表達,在健康人中呈低表達,micro RNA-126與原發(fā)性高血壓存在相關(guān)性;2.成功構(gòu)建micro RNA-126基因敲減慢病毒載體;3.micro RNA-126作為基因治療靶點治療原發(fā)性高血壓無明顯降壓效果,對靶器官無明顯保護作用;4.micro RNA-126在高血壓患者中表達增高可能為一種代償機制。
[Abstract]:[objective] 1.The gene microarray was used to detect various micro RNAs in human. The relationship between micro RNA and hypertension was found to be 2. 2%.By constructing micro RNA-126 gene knockdown virus vector, the feasibility of treating hypertension with micro RNA-126 as gene target was discussed.The mechanism of micro RNA-126 in the occurrence and development of essential hypertension was described. [methods] Blood samples from 6 patients with essential hypertension and 4 healthy persons matched by age, sex and body weight were collected.Shanghai Kangcheng Biological Company micro RNA chip was commissioned to detect the micro RNA expression profile in two groups of samples.Using the lentivirus vector of human immunodeficiency virus (HIV-1) as the source, we constructed the vector of mil R-126 gene knockdown virus (Lenti-mi R-126-KDV) and the interfering control lenti-scramblemirin (Lenti-scramblemiririn).Spontaneously hypertensive rats were divided into two groups: high dose group (1: 108), low dose group (n = 10 7), interference control group (n = 5) and blank control group (n = 350). Systolic blood pressure (SBP) and diastolic blood pressure (DBP) were collected by tail cuff method for 8 weeks.After 8 weeks of mean pressure and heart rate, the heart body ratio was calculated and the heart, kidney, brain, liver and lung were taken for frozen sections, and the distribution of lentivirus vector in vivo was observed under fluorescence microscope.Sirius red picric acid staining and HE staining were used to observe the damage of target organs in hypertension.The content of nitric oxide (no) in serum of rats was determined by ELISA method, and various important biochemical indexes were determined. [results] the 3'end of 1.micro RNA-126 was 1.410 vs 0.838% (P0. 03), and the expression of 5 '-terminus was 1. 799 vs 0. 997P0. 03) in patients with hypertension and low expression in healthy persons.There was significant difference between the two groups (P 0.05).Construction and expression of lentivirus vector: lentivirus vector was successfully constructed.After 8 weeks of administration, the expression of green fluorescent protein (GFP) was observed in frozen sections of all tissues.Blood pressure, heart rate: before administration, there was no uniform difference in blood pressure and heart rate. After administration, the changes of blood pressure and heart rate were observed weekly. There was no significant difference in blood pressure and heart rate between each group (P 0.05).The ratio of heart to body was 4.39 鹵0.52g in high dose group, 3.98 鹵0.31 in low dose group, 3.96 鹵0.19 in interfering control group and 4.28 鹵0.39 in blank control group. There was no significant difference between the two groups.Sirius red picric acid staining and HE staining: there was no significant difference in histomorphology among the groups.There was no statistical difference between high dose group (8.30 鹵5.01), low dose group (8.08 鹵6.35), interfering control group (13.87 鹵9.56), blank control group (4.52 鹵2.12) (P 0.05); [conclusion] 1.The high expression of micro RNA-126 in patients with hypertension and the low expression of micro micro RNA-126 in healthy people were confirmed in the population. There was a correlation between micro micro RNA-126 and essential hypertension.Successful construction of micro RNA-126 gene knockdown virus vector 3.micro RNA-126 as a target for gene therapy for essential hypertension has no obvious antihypertensive effect. 4. The increase of micro RNA-126 expression in hypertensive patients may be a compensatory mechanism.
【學(xué)位授予單位】：首都醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R544.1

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本文編號：1745560