本文選題：線粒體自噬　切入點：焦亡　出處：《安徽醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：背景及目的:細胞焦亡是一種依賴半胱天冬氨酸蛋白酶-1(Cysteine aspartate-specific protease-1,caspase-1)活化的高炎癥性細胞死亡形式,氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)可誘導巨噬細胞發(fā)生caspase-1介導的細胞焦亡,在動脈粥樣硬化進展期不穩(wěn)定斑塊形成中發(fā)揮重要作用。細胞自噬是細胞利用膜結構將需要降解的細胞器或蛋白等進行包裹形成自噬體,隨后與溶酶體結合將其降解。缺乏自噬會導致活性氧簇ROS的產生及NLRP3炎癥小體的活化,引起caspase-1介導的細胞焦亡。BNIP3基因家族是一個獨特的Bcl-2家族BH3-only家族成員,包括BNIP3,NIX(也叫BNIP3L基因)。NIX定位于線粒體外膜,可與自噬相關蛋白(LC3和GABARAP等)結合,誘導線粒體自噬發(fā)生并降解清除多余的線粒體。NIX介導的線粒體自噬途徑在哺乳細胞對損傷線粒體的降解中也發(fā)揮關鍵作用。我們前期研究表明ox-LDL作用于巨噬細胞后,對巨噬細胞自噬及細胞焦亡都產生影響。同時,隨著ox-LDL的作用濃度增加,NIX的表達也隨之增多。表明NIX對巨噬細胞線粒體自噬有一定的調控作用。但NIX介導的線粒體自噬對ox-LDL誘導巨噬細胞焦亡的影響及機制目前尚不清楚。方法:1、ox-LDL作用于巨噬細胞J774A.1,通過RT-PCR檢測NIX mRNA表達水平;western-blot檢測NIX蛋白的表達情況,篩選合適的ox-LDL作用濃度和時間。2、采用western-blot檢測ox-LDL作用后LC3-Ⅱ/Ⅰ及NIX的表達情況。線粒體自噬的檢測用激光共聚焦觀察LC3、NIX、線粒體共定位的情況;采用小干擾RNA沉默NIX表達觀察對ox-LDL誘導線粒體自噬的影響;3、細胞焦亡的檢測。采用LDH釋放試劑盒檢測LDH的釋放,熒光顯微鏡觀察細胞AO/EB的染色情況,western-blot檢測caspase-1 p10、IL-1β的表達情況;以及沉默NIX表達后對ox-LDL誘導巨噬細胞焦亡的影響;4、采用DCFH-DA染色流式細胞儀檢測ox-LDL作用前后細胞內ROS的水平;采用western-blot檢測NLRP3炎癥小體的表達情況,以及沉默NIX表達后對ROS的水平和NLRP3活化的影響;結果:1、本研究顯示ox-LDL處理巨噬細胞J774A.1后,NIX mRNA和蛋白的表達水平隨著ox-LDL作用濃度的增高相應增加,并在100μg/ml增加幅度最大;在確定100μg/ml ox-LDL作用后隨著時間的增加,檢測NIX的表達情況也相應增加,其中6小時的增幅最高。2、ox-LDL作用于巨噬細胞J774A.1后,Western-blot結果表明LC3-П/Ⅰ的表達增多;激光共聚焦顯微鏡檢測結果表明NIX、自噬體LC3、線粒體三者存在共定位關系;運用si RNA干擾技術靶向沉默NIX,抑制NIX的功能后,自噬通路中的自噬體LC3蛋白表達水平均較正常組減少。3、沉默NIX后,應用ox-LDL作用于巨噬細胞中,結果發(fā)現(xiàn),LDH的釋放和AO/EB染色陽性細胞所占百分比較正常組顯著升高;caspase-1 p10和IL-1β蛋白的表達呈增高的趨勢。4、沉默NIX后,應用ox-LDL作用于巨噬細胞中,ROS水平增加(90.5±0.48)%大于J774A.1組(69.3±0.75)%。NLRP3炎癥小體的表達情況增多;結論:ox-LDL可誘導巨噬細胞發(fā)生caspase-1介導的細胞焦亡;NIX可能通過介導巨噬細胞線粒體自噬,從而降低細胞內ROS的水平及NLRP3炎癥小體的活化,對ox-LDL誘導的巨噬細胞焦亡發(fā)揮抑制作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R543.5

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 鄭振群;;關于巨噬細胞的幾個問題[J];山西醫(yī)藥雜志;1974年12期

2 ;豚鼠巨噬細胞經P_(204)處理后的抗石英細胞毒作用[J];國外醫(yī)學參考資料(衛(wèi)生學分冊);1976年04期

3 鄧俠進;;巨噬細胞的抗癌作用[J];遵義醫(yī)學院學報;1979年02期

4 陸天才;;疾病對肺巨噬細胞的影響[J];煤礦醫(yī)學;1982年01期

5 郭瑞清;祝彼得;;一種分離巨噬細胞的簡單方法[J];濱州醫(yī)學院學報;1990年02期

6 謝志堅;巨噬細胞異質性[J];醫(yī)學綜述;2001年06期

7 饒艷;運動及神經內分泌對巨噬細胞功能的調節(jié)[J];體育與科學;2002年05期

8 朱金元;;吸煙對肺巨噬細胞的影響[J];浙江醫(yī)學教育;2003年01期

9 張俊峰;過氧化物酶體增殖物激活受體與單核/巨噬細胞系[J];醫(yī)學綜述;2004年03期

10 韋錦學;顧軍;;巨噬細胞的激活誘導死亡[J];生命科學;2006年02期

相關會議論文 前10條

1 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細胞激活作用的研究[A];中國細胞生物學學會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

2 吳國明;周輝;;巨噬細胞和創(chuàng)傷纖維化[A];2009年浙江省骨科學學術年會論文匯編[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明質酸對于淋巴結巨噬細胞運動的影響[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

4 劉革修;歐大明;劉軍花;黃紅林;廖端芳;;丙丁酚在體外能抑制巨噬細胞脂質氧化介導的低密度脂蛋白氧化并調節(jié)氧化巨噬細胞的分泌功能[A];面向21世紀的科技進步與社會經濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

5 葉金善;楊麗霞;郭瑞威;;環(huán)氧化酶-2/前列腺素E_2在血管緊張素Ⅱ刺激巨噬細胞表達細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子中的作用[A];第十三次全國心血管病學術會議論文集[C];2011年

6 秦帥;陳希;孔德明;;構建由綠色熒光標記巨噬細胞的轉基因斑馬魚系[A];貴州省中西醫(yī)結合內分泌代謝學術會論文匯編[C];2012年

7 武劍華;徐惠綿;;腫瘤相關巨噬細胞在胃癌中的相關研究[A];第9屆全國胃癌學術會議暨第二屆陽光長城腫瘤學術會議論文匯編[C];2014年

8 何軍;;血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體升高巨噬細胞內膽固醇水平[A];中華醫(yī)學會第11次心血管病學術會議論文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢達;;PDT誘導的凋亡細胞對巨噬細胞NO合成的影響[A];第七屆全國光生物學學術會議論文摘要集[C];2010年

10 張磊;朱建華;黃元偉;姚航平;;血管緊張素Ⅱ對巨噬細胞(THP-1重細胞)凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體表達的影響[A];浙江省免疫學會第五次學術研討會論文匯編[C];2004年

相關重要報紙文章 前10條

1 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細胞未必皆“惡人”[N];健康報;2014年

2 蘭克;以嘗試用巨噬細胞治癱瘓[N];科技日報;2000年

3 薛佳;免疫系統(tǒng)——人體的“衛(wèi)士”[N];保健時報;2009年

4 記者 胡德榮;鐵泵蛋白“維穩(wěn)”鐵代謝作用首次闡明[N];健康報;2011年

5 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國食品質量報;2003年

6 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細胞泡沫化抑制劑研究快步進行[N];中國醫(yī)藥報;2006年

7 劉元江;新發(fā)現(xiàn)解釋腫瘤為何易成“漏網(wǎng)之魚”[N];醫(yī)藥經濟報;2007年

8 本報記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補硒了嗎[N];醫(yī)藥經濟報;2003年

9 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2007年

10 記者 許琦敏;“鐵泵”蛋白幫助回收鐵元素[N];文匯報;2011年

相關博士學位論文 前10條

1 周赤燕;巨噬細胞MsrA對動脈粥樣硬化的干預研究[D];武漢大學;2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白調控細胞增殖和炎癥的機制研究[D];山東大學;2015年

3 張瑜;DKK1抑制巨噬細胞內脂質沉積及其相關分子機制[D];山東大學;2015年

4 孟濤;異丙酚對心臟收縮功能的抑制作用及其對巨噬細胞分泌功能調節(jié)的機制研究[D];山東大學;2015年

5 周興;基于酵母微囊構建新型口服巨噬細胞靶向遞送系統(tǒng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

6 蔣興偉;Tim-3對巨噬細胞極化的調控機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2015年

7 劉伯玉;清道夫受體A介導小鼠巨噬細胞吞噬鉤端螺旋體研究[D];上海交通大學;2013年

8 楊紹俊;miRNA-155介導ESAT-6誘導巨噬細胞凋亡的分子機制及其在結核診斷中的作用[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

9 翟光耀;單核/巨噬細胞Ly6C~(low)亞群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

10 韓露;TRB3介導的脂肪組織巨噬細胞極化與糖尿病冠狀動脈病變關系的研究[D];山東大學;2015年

相關碩士學位論文 前10條

1 馬春梅;AP0E~(-/-)小鼠TLR9介導巨噬細胞極化效應對動脈粥樣硬化作用的研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 張譯丹;鹽皮質激素受體拮抗劑調控巨噬細胞表型對實驗性矽肺的作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

3 盧文冉;HCV core蛋白作用的巨噬細胞培養(yǎng)上清對肝細胞生物學性狀的影響[D];河北醫(yī)科大學;2015年

4 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細胞因子表達及分型的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

5 曹爽;高糖對巨噬細胞TLR4信號轉導的調節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

6 寧程程;腫瘤相關巨噬細胞在子宮內膜癌雌激素敏感性中的作用及機制研究[D];復旦大學;2014年

7 高龍;PLD4在腫瘤相關巨噬細胞抑制結腸癌增殖中的作用研究[D];成都醫(yī)學院;2015年

8 任虹;感染期子宮頸癌U14細胞荷瘤小鼠抑制巨噬細胞CCL5分泌的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

9 李美玲;雙酚A對小鼠腹腔巨噬細胞極化影響的體外研究[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

10 劉瓊;黃芪多糖影響巨噬細胞向脂肪細胞趨化的作用及機制研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學院;2015年

，

本文編號：1702120