本文選題：大電導鈣離子激活鉀通道　切入點：β1-亞基　出處：《蘇州大學》2015年博士論文

【摘要】：背景:糖尿病是冠心病重要的獨立危險因素,國內(nèi)外指南指出糖尿病是冠心病的等危癥,但糖尿病引起冠心病的內(nèi)在具體機制尚未完全明確。大電導鈣離子激活鉀通道(BK通道)廣泛分布于平滑肌細胞上,不僅參與細胞膜電位的形成,而且可以維持平滑肌細胞收縮和舒張的動態(tài)平衡。糖尿病時冠狀動脈血管收縮功能異常增高,可能與BK通道功能改變有關(guān)。本研究將從BK通道功能改變這一角度來探討糖尿病與冠心病之間的關(guān)系。目的:本研究擬采用多導微血管張力測定儀、膜片鉗技術(shù)和Western Blot實驗技術(shù),探討糖尿病對大鼠冠狀動脈平滑肌細胞BK通道的影響,闡明糖尿病冠狀動脈損傷的分子機制。方法:(1)采用鏈脲霉素腹腔內(nèi)注射建立糖尿病大鼠動物模型,用酶消化“三步法”分離大鼠冠狀動脈平滑肌細胞。(2)采用全細胞膜片鉗實驗技術(shù)記錄正常大鼠冠狀動脈平滑肌細胞BK通道電流,通過觀察加入多種特異性鉀通道阻滯劑后鉀通道電流的變化評估BK通道的分布。(3)采用多導微血管張力測定儀測定正常和糖尿病冠狀動脈血管張力的變化,觀察BK通道對正常和糖尿病大鼠冠狀動脈血管調(diào)節(jié)作用。(4)全細胞膜片鉗以及單通道膜片鉗實驗技術(shù)記錄正常和糖尿病大鼠冠狀動脈平滑肌細胞BK通道電流。(5)采用Western blot實驗方法測定正常和糖尿病大鼠冠狀動脈平滑肌細胞BK通道亞基的蛋白表達。結(jié)果:(1)成功構(gòu)建糖尿病模型大鼠,測得正常對照組和糖尿病組大鼠血糖水平分別為(121.80±3.17)mg/d L和(562.50±13.50)mg/d L,符合造模要求,造模成功率達90%。分離得到符合實驗要求的大鼠冠狀動脈平滑肌細胞,×100鏡下20~30個/視野。(2)正常冠狀動脈平滑肌細胞BK通道電流約占總鉀離子流(65±4)%。(3)當加入BK通道特異性阻滯劑iberiotoxin(IBTX)100nmol/L后,冠狀動脈血管內(nèi)徑可縮小(65±4)%,而糖尿病冠狀動脈內(nèi)徑僅縮小約(15±3)%。當加入100mmol/L KCI后,正常和糖尿病冠狀動脈血管張力分別為(398±38)mg和(390±35)mg(P0.05),當加入100nmol/L IBTX后正常和糖尿病冠狀動脈血管張力分別為(395±40)mg和(50±7)mg(P0.05)。(4)全細胞模式下,與正常組相比,當刺激電壓60m V時,糖尿病冠狀動脈BK通道電流密度就開始降低,在刺激電壓為150 m V時,電流密度分別為(275±40)p A/p F和(70±10)p A/p F(P0.05)。(5)單通道記錄時,在電極外液鈣離子濃度為1μmol/L,刺激電位為0、20、40、60、80、100和120 m V條件下,正常對照組大鼠冠狀動脈平滑肌細胞BK通道總開放概率(NP0)分別為0、0.0003±0.0001、0.0023±0.0007、0.0248±0.0043、0.0663±0.0369、0.3445±0.0445、1.2105±0.0481(n=5);糖尿病組大鼠冠狀動脈平滑肌細胞BK通道NP0分別為0、0.00002±0.00001、0.0003±0.0001、0.0026±0.0004、0.0257±0.0045、0.1361±0.0325、0.5217±0.1346(n=5)。糖尿病冠狀動脈平滑肌細胞BK通道NP0明顯低于正常冠狀動脈平滑肌細胞BK通道NP0(P0.05)。(6)經(jīng)過內(nèi)參GAPDH標準化,Western Blot實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)與正常對照組相比,糖尿病組大鼠冠狀動脈BK通道α-亞基無統(tǒng)計學差異(P0.05),但BK通道β1-亞基蛋白表達明顯下降(P0.05)。結(jié)論:(1)BK通道廣泛分布于冠狀動脈平滑肌細胞上,對冠狀動脈血管張力調(diào)節(jié)起重要作用。(2)糖尿病時冠狀動脈平滑肌細胞BK通道功能受損,BK電流降低,血管張力增加。(3)糖尿病冠狀動脈血管平滑肌細胞BK通道β1-亞基表達減少,與冠狀動脈BK通道電流降低以及血管張力增加有關(guān),可能是糖尿病引發(fā)冠心病的重要機制。
[Abstract]:Objective : To study the effect of BK channel on the BK channel of coronary artery smooth muscle cells in normal and diabetic rats . Results : ( 1 ) The BK channel NP0 of diabetic coronary artery smooth muscle cells was 0 , 0.0026 鹵 0.00001 , 0.0003 鹵 0.0045 , 0.0026 鹵 0.0004 , 0.0257 鹵 0.0045 , 0.1361 鹵 0.0325 , 0.5217 鹵 0.1346 ( n = 5 ) .

【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1;R541.4

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

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本文編號：1675052