本文選題：大電導(dǎo)鈣離子激活鉀通道　切入點(diǎn)：β1-亞基　出處：《蘇州大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：背景:糖尿病是冠心病重要的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,國(guó)內(nèi)外指南指出糖尿病是冠心病的等危癥,但糖尿病引起冠心病的內(nèi)在具體機(jī)制尚未完全明確。大電導(dǎo)鈣離子激活鉀通道(BK通道)廣泛分布于平滑肌細(xì)胞上,不僅參與細(xì)胞膜電位的形成,而且可以維持平滑肌細(xì)胞收縮和舒張的動(dòng)態(tài)平衡。糖尿病時(shí)冠狀動(dòng)脈血管收縮功能異常增高,可能與BK通道功能改變有關(guān)。本研究將從BK通道功能改變這一角度來(lái)探討糖尿病與冠心病之間的關(guān)系。目的:本研究擬采用多導(dǎo)微血管張力測(cè)定儀、膜片鉗技術(shù)和Western Blot實(shí)驗(yàn)技術(shù),探討糖尿病對(duì)大鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道的影響,闡明糖尿病冠狀動(dòng)脈損傷的分子機(jī)制。方法:(1)采用鏈脲霉素腹腔內(nèi)注射建立糖尿病大鼠動(dòng)物模型,用酶消化“三步法”分離大鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞。(2)采用全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)技術(shù)記錄正常大鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道電流,通過(guò)觀察加入多種特異性鉀通道阻滯劑后鉀通道電流的變化評(píng)估BK通道的分布。(3)采用多導(dǎo)微血管張力測(cè)定儀測(cè)定正常和糖尿病冠狀動(dòng)脈血管張力的變化,觀察BK通道對(duì)正常和糖尿病大鼠冠狀動(dòng)脈血管調(diào)節(jié)作用。(4)全細(xì)胞膜片鉗以及單通道膜片鉗實(shí)驗(yàn)技術(shù)記錄正常和糖尿病大鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道電流。(5)采用Western blot實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定正常和糖尿病大鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道亞基的蛋白表達(dá)。結(jié)果:(1)成功構(gòu)建糖尿病模型大鼠,測(cè)得正常對(duì)照組和糖尿病組大鼠血糖水平分別為(121.80±3.17)mg/d L和(562.50±13.50)mg/d L,符合造模要求,造模成功率達(dá)90%。分離得到符合實(shí)驗(yàn)要求的大鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,×100鏡下20~30個(gè)/視野。(2)正常冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道電流約占總鉀離子流(65±4)%。(3)當(dāng)加入BK通道特異性阻滯劑iberiotoxin(IBTX)100nmol/L后,冠狀動(dòng)脈血管內(nèi)徑可縮小(65±4)%,而糖尿病冠狀動(dòng)脈內(nèi)徑僅縮小約(15±3)%。當(dāng)加入100mmol/L KCI后,正常和糖尿病冠狀動(dòng)脈血管張力分別為(398±38)mg和(390±35)mg(P0.05),當(dāng)加入100nmol/L IBTX后正常和糖尿病冠狀動(dòng)脈血管張力分別為(395±40)mg和(50±7)mg(P0.05)。(4)全細(xì)胞模式下,與正常組相比,當(dāng)刺激電壓60m V時(shí),糖尿病冠狀動(dòng)脈BK通道電流密度就開(kāi)始降低,在刺激電壓為150 m V時(shí),電流密度分別為(275±40)p A/p F和(70±10)p A/p F(P0.05)。(5)單通道記錄時(shí),在電極外液鈣離子濃度為1μmol/L,刺激電位為0、20、40、60、80、100和120 m V條件下,正常對(duì)照組大鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道總開(kāi)放概率(NP0)分別為0、0.0003±0.0001、0.0023±0.0007、0.0248±0.0043、0.0663±0.0369、0.3445±0.0445、1.2105±0.0481(n=5);糖尿病組大鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道NP0分別為0、0.00002±0.00001、0.0003±0.0001、0.0026±0.0004、0.0257±0.0045、0.1361±0.0325、0.5217±0.1346(n=5)。糖尿病冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道NP0明顯低于正常冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道NP0(P0.05)。(6)經(jīng)過(guò)內(nèi)參GAPDH標(biāo)準(zhǔn)化,Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)與正常對(duì)照組相比,糖尿病組大鼠冠狀動(dòng)脈BK通道α-亞基無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),但BK通道β1-亞基蛋白表達(dá)明顯下降(P0.05)。結(jié)論:(1)BK通道廣泛分布于冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞上,對(duì)冠狀動(dòng)脈血管張力調(diào)節(jié)起重要作用。(2)糖尿病時(shí)冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道功能受損,BK電流降低,血管張力增加。(3)糖尿病冠狀動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞BK通道β1-亞基表達(dá)減少,與冠狀動(dòng)脈BK通道電流降低以及血管張力增加有關(guān),可能是糖尿病引發(fā)冠心病的重要機(jī)制。
[Abstract]:Objective : To study the effect of BK channel on the BK channel of coronary artery smooth muscle cells in normal and diabetic rats . Results : ( 1 ) The BK channel NP0 of diabetic coronary artery smooth muscle cells was 0 , 0.0026 鹵 0.00001 , 0.0003 鹵 0.0045 , 0.0026 鹵 0.0004 , 0.0257 鹵 0.0045 , 0.1361 鹵 0.0325 , 0.5217 鹵 0.1346 ( n = 5 ) .

【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R587.1;R541.4

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 黃波,劉學(xué)政,龐東渤;不同途徑注射鏈脲佐菌素致大鼠糖尿病模型的研究[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年01期

2 黃琛;顧志峰;曹曉蕾;印彤;余江毅;朱曉暉;王粹芳;崔世維;;1型糖尿病大鼠模型建立及穩(wěn)定性研究[J];現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2007年03期

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本文編號(hào)：1675052