本文選題：中國　切入點：東北地區(qū)　出處：《吉林大學》2016年博士論文

【摘要】：一、背景冠心病(CHD)和其他心血管疾病(CVDs)是工業(yè)化國家和發(fā)展中國家所面臨的一個巨大挑戰(zhàn)。與其他疾病相比,每年死于心血管疾病的人數(shù)較多。據(jù)估計,2012年心血管疾病的死亡人數(shù)約為1750萬(占非傳染性疾病死亡總人數(shù)的46%),其中死于冠心病的人數(shù)有740萬,死于中風的人數(shù)有670萬。全球非傳染性疾病(NCD)和可持續(xù)性發(fā)展目標(SDG)的關注的焦點是：約三分之一冠心病死亡者為30-70歲之間的成年人。據(jù)估計,1990-2020年全球冠心病所造成的傷殘調(diào)整壽命年(DALYs)將由4700萬上升到8200萬。因此,冠心病應該引起人們足夠的重視,達到完全預防和控制該疾病的目的。事實上,冠心病等非傳染性疾病不僅能影響人群的健康狀況和死亡率,還能對經(jīng)濟產(chǎn)生巨大影響,是導致貧困發(fā)生的主要原因。目前,專業(yè)化醫(yī)療服務正日益完善,心血管疾病等慢性病需要負擔更為昂貴的治療方案和長期的個人護理費用。與西方國家相比,中國人群冠心病的死亡率相對較低,但中國人群的冠心病人數(shù)正逐年增加。中國城市和農(nóng)村地區(qū)冠心病死亡人數(shù)分別占心血管疾病死亡人數(shù)的22%和13%,冠心病已成為造成心血管疾病死亡的第二個主要原因。隨著中國經(jīng)濟的增長和人口壽命的延長,冠心病的醫(yī)療保健、發(fā)病和死亡所造成的費用支出將大部分由國家衛(wèi)生部門承擔。冠狀動脈粥樣硬化通常被認為是導致冠心病發(fā)生的病理基礎,但該病的確切病因和病理生理學機制仍然未知。許多研究顯示,冠心病是一種由多種因素所造成的復雜疾病,包括環(huán)境因素、生活方式和遺傳易感性,以及這些因素之間的交互作用。與冠心病和其他心血管疾病遺傳學方面有關的資料在學術文獻中均有據(jù)可查。某些基因、基因簇以及基因的多態(tài)性都能參與冠心病的發(fā)生和發(fā)展。環(huán)境因素等非遺傳因素也可影響冠心病的發(fā)展,研究提示一些環(huán)境因素與冠心病的病因有關。流行病學研究和家系研究均表明,冠心病發(fā)病風險的40%-60%可由遺傳易感性來解釋,因此,對冠心病采取全方位的治療和預防也應該改變遺傳危險因素的影響。此外,由遺傳因素和環(huán)境因素共同作用導致的高膽固醇血癥的治療過程中也應該考慮改變遺傳因素的影響。常見基因變異包括單核苷酸多態(tài)性(SNPs),許多有關常見基因變異與某些疾病易感性的關聯(lián)研究結果表明,常見基因變異能影響常見病的易感性。目前認為AdipoQ基因及其編碼的脂聯(lián)素蛋白與冠心病有關聯(lián)。已有研究報道AdipoQ基因上的一些單核苷酸多態(tài)性位點(如rs3774261、rs1063537和rs2082940)與許多疾病有關,包括冠心病、肥胖、糖尿病、類風濕關節(jié)炎、高血壓和心肌梗死等。許多學術文獻報道,AdipoQ基因單核苷酸變異與脂聯(lián)素水平之間的關聯(lián)較強。許多研究已證明脂聯(lián)素具有抗動脈粥樣硬化、保護心臟、抗炎和抗血栓的作用。一些研究結果顯示,脂聯(lián)素水平降低(低脂聯(lián)素血癥)與冠心病風險升高有關,而脂聯(lián)素水平增加可防止冠心病的發(fā)生。然而,另有一些研究結果表明脂聯(lián)素血癥與心血管疾病之間的關聯(lián)程度較弱或無關聯(lián),尤其是婦女和老年人群。Luc等的研究認為在外表健康的男性人群中,循環(huán)中脂聯(lián)素總體水平不是冠心病事件的獨立預測因子。許多研究顯示,遺傳因素和環(huán)境因素在多因素疾病(也稱復雜性疾病,如冠心病)的發(fā)生發(fā)展過程中均發(fā)揮重要作用。非遺傳因素對心血管疾病發(fā)生和發(fā)展過程的影響也已被識別。吸煙、飲酒、久坐、缺乏體育鍛煉、飲食習慣和許多其他社交活動等日常生活方式均能影響冠心病的發(fā)生。雖然全基因組關聯(lián)研究(GWAS)已識別出許多與疾病狀態(tài)有關的各種基因單核苷酸多態(tài)性位點,但要發(fā)現(xiàn)由這些疾病相關遺傳變異所導致相應疾病病因的確切分子或細胞機制仍然很困難。實際上,現(xiàn)有的基因變異與疾病或性狀的關聯(lián)研究速度和這些關聯(lián)的功能機制研究速度并不同步�？梢試L試通過預測小RNA (miRNA)結合位點來研究基因單核苷酸多態(tài)性導致異常性狀或疾病的機制。miRNA屬于小RNA基因產(chǎn)物,它以堿基互補配對的方式來調(diào)節(jié)信使RNAs (mRNAs)的活性。在動物體內(nèi),miRNA能調(diào)節(jié)基因的翻譯表達,它還能與成熟目標mRNA的3'非翻譯區(qū)(3'UTR)位點互補結合,miRNA主要調(diào)控(抑制)目標mRNA翻譯過程,但其機制仍然有待進一步研究。許多已經(jīng)發(fā)表數(shù)據(jù)表明,AdipoQ基因與某些疾病有關聯(lián),如糖尿病、高血壓、冠心病和代謝綜合征等。既往有關AdipoQ基因多態(tài)性與冠心病及其他心血管疾病之間的關聯(lián)研究結果并不一致,而且大多數(shù)都是在動物模型、歐洲或其他西方國家的人群中開展的研究。由于已報道的AdipoQ基因單核苷酸變異與心血管疾病的關聯(lián)研究結果存在不一致性,因此需要采用meta分析法綜合分析現(xiàn)有的研究結果,并最終得出定量性結論。1976年,Gene Glass,創(chuàng)造了一個術語"meta分析”來指代一種將大量個人的研究分析結果收集起來進行統(tǒng)計分析,以達到整合調(diào)查結果的目的。Meta分析是使用統(tǒng)計方法將不同研究的結果相結合的過程。Meta分析歷來被用于整合臨床隨機試驗,其中樣本量小,導致不穩(wěn)定的估計結果,但meta分析可以將每個研究進行標準化。在生物醫(yī)學科學中,meta分析有著悠久的歷史,它通過利用一些獨立研究的信息對感興趣的問題進行系統(tǒng),有組織,有結構化的評價。流行病學研究的meta分析的主要目標是：1)綜合各個研究的估計到一個綜合的估計,在探索低關聯(lián)的原因上起至關重要的作用；2)為了深入了解研究具體估計之間的關系和研究具體特點,可以通過meta分析在進一步的研究中回答相同或類似的問題。對于有矛盾和爭議的研究問題,就像AdipoQ基因單核苷酸多態(tài)性和冠心病之間的關聯(lián)研究的meta分析一樣,不僅僅是要解決結論不一致的問題,而且還可以給出更正確的結論。如果在面對具有挑戰(zhàn)性的問題,特別是醫(yī)療行業(yè)無法利用系統(tǒng)綜述和meta分析的原則和技術,將會導致資源丟失。一個典型的常被引用的失敗的例子是,在20世紀50年代到70年代,由于聽了醫(yī)生錯誤的指導,以趴著的姿勢睡覺,而引起超過10萬的嬰兒突然嬰兒死亡綜合癥,經(jīng)過大約半個世紀以后,研究的證據(jù)表明這很可能是有害的。今天,meta分析是解決醫(yī)學界許多問題的非常重要的工具。據(jù)資料可知,在中國北方漢族人群中開展冠心病風險與AdipoQ基因變異(rs3774261、rs1063537和rs2082940)的關聯(lián)研究尚未見報道。在本文的研究人群中需要調(diào)查脂聯(lián)素水平及該水平是否與冠心病和其他變量有關。此外,有關AdipoQ基因活性的單一研究也未見報道,如meta分析、關聯(lián)研究、環(huán)境因素交互作用、脂聯(lián)素蛋白相關性和功能性研究。本研究的主要研究目的如下。研究目的：為進一步了解冠心病/心血管疾病與AdipoQ基因變異之間的關聯(lián),本研究設計了以下具體研究目標：1.根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的數(shù)據(jù)結果,總結有關AdipoQ基因變異與CVD關聯(lián)的最新完整信息。這部分研究主要是在數(shù)據(jù)庫中廣泛搜索CVD與AdipoQ基因SNPs之間關聯(lián)的相關研究。2.在中國東北地區(qū)漢族人群中研究冠心病與AdipoQ基因上3個SNPs位點之間的關聯(lián)(rs3774261、rs1063537和rs2082940)。這部分為流行病學研究,所有研究對象為中國東北地區(qū)漢族人群,收集DNA樣本并分析人口學數(shù)據(jù)和生物化學數(shù)據(jù)。3.在本研究人群中探索AdipoQ基因變異與環(huán)境因素之間的可能交互作用對冠心病的影響。這部分研究包括分析冠心病和環(huán)境因素(飲酒、吸煙、TG、LDL-C、HDL-C口FBG水平)之間的關聯(lián),AdipoQ基因SNPs與以上環(huán)境因素之間的交互作用對冠心病的影響。4.在中國東北地區(qū)漢族人群中研究血液中脂聯(lián)素水平分別與AdipoQ基因SNPs及冠心病之間的關聯(lián)。測量血漿脂聯(lián)素水平,探討其與冠心病、年齡、性別和AdipoQ基因變異之間的相關性。5.應用生物信息學技術預測AdipoQ基因上3個SNPs位點(rs3774261、rs1063537和rs2082940)的1niRNA結合靶點。運用不同的生物信息學數(shù)據(jù)庫來預測能與本研究3個SNPs位點的：mRNA靶點相結合的：miRNA。二、材料與方法1. Meta分析1.1檢索策略、文獻納入和排除標準：檢索PubMed、EMBASE、中國知網(wǎng)(CNKI)、中國生物醫(yī)學文獻數(shù)據(jù)庫網(wǎng)絡版(CBMDisc)、維普、萬方數(shù)據(jù)庫中2015年12月31日前發(fā)表的關于AdipoQ基因多態(tài)性與冠心病的關聯(lián)研究的文獻。運用多種檢索詞結合進行檢索,例如：“冠心病”或“冠狀動脈疾病”或“心血管疾病”或“缺血性心臟病”或“心絞痛”或“中心肌梗死”或“中風”或“動脈粥樣硬化”或“動脈硬化”或“冠狀動脈狹窄”結合"ADIPOQ'或‘'APM1'或“ACDC'”或“脂聯(lián)素基因”并結合“多態(tài)性”或“突變”或“基因關聯(lián)研究”。文獻納入標準如下：1)具有足夠的數(shù)據(jù)評估疾病(冠心病/冠狀動脈疾病/心血管疾病/心肌梗死)與ApdipoQ基因單核甘酸多態(tài)性之間的關聯(lián)；2)有原始數(shù)據(jù)；3)對于AdipoQ基因多態(tài)性位點rs266729、s2241766、rs1501299,納入的文獻必須至少包括上述三個位點之一與冠心病發(fā)病風險關聯(lián)的數(shù)據(jù)：4)語言為英語或漢語。文獻排除標準為：1)文獻中有重復數(shù)據(jù)；2)文獻的語言不是英語或者漢語；3)文獻一些信息缺失(基因型分布),尤其是在聯(lián)系通訊作者后,未能提供所需的信息。對于有重復病例或?qū)φ盏奈墨I,最新發(fā)表或者能提取數(shù)據(jù)量最大者納入meta分析�；蚪M掃描文獻不納入meta分析。文獻質(zhì)量評價和數(shù)據(jù)提�。杭{入meta分析的每篇文獻質(zhì)量均經(jīng)過評估,并由兩名研究人員提取數(shù)據(jù)�？偨Y提取的信息并整理成表格,以備meta分析。1.2統(tǒng)計學分析：運用等位基因計數(shù)法從納入文獻中獲得等位基因頻率。通過對比AdipoQ次要等位基因與常見等位基因,評估等位基因的作用。利用比值比(OR)及其95%可信區(qū)間(95%CI)衡量AdipoQ基因多態(tài)性與冠狀動脈疾病的易感性之間的關聯(lián)。采用Q檢驗中的卡方檢驗進行異質(zhì)性檢驗,I2衡量異質(zhì)性大小。運用反變量隨機效應模型合并所有的OR,并采用Z統(tǒng)計量分析合并的OR的統(tǒng)計學顯著性。基于研究的結局(冠心病和所有其他的結局指標)、基因分型技術(PCR-RFLP, TaqMan或者其他)、研究對象(對照組與病例組)、人種(歐洲人、東亞人、西亞人和非洲人)、樣本量(1000和≥1000)、質(zhì)量評分(10和≥10)進行亞組分析。采用敏感性分析評估每篇文獻對于合并OR的作用。此外,還進行累積性meta分析并檢驗發(fā)表偏倚。運用遺傳模型(顯性模型、隱性模型、共顯性模型)分析基因與冠心病之間的關聯(lián)性。對于納入meta分析的3個SNPS進行單獨分析。本研究運用STATA 12進行統(tǒng)計學分析。除特殊說明外,P0.05則認為有統(tǒng)計學意義。2.關聯(lián)研究(AdipoQ突變-冠心病關聯(lián)；基因-環(huán)境交互作用；脂聯(lián)素水平與冠心病/AdipoQ突變/其他研究的變量)2.1研究對象：采用病例-對照研究的設計,招募冠心病患者754例,對照760例,共1514名研究對象。病例來源于吉林大學第一醫(yī)院和吉化總醫(yī)院。對照與病例年齡、性別相匹配,且與病例同期。本文研究對象為相互間無血緣關系的中國北方漢族人。數(shù)據(jù)從2011年9月份開始收集,直至2012年11月。本研究獲得吉林大學公共衛(wèi)生學院倫理委員會的審查與批準。所有研究對象均簽署《知情同意書》。2.2流行病學調(diào)查和生化檢查：運用標準化信息檢索工具(調(diào)查問卷)收集研究對象的人口學資料和臨床資料。吸煙定義為在過去的一個月內(nèi)每天至少吸煙一支,或者既往吸煙,即使至少一個月內(nèi)完全不吸煙。飲酒定義為飲用各種含酒精成分的飲料,每周至少一次。由兩名有經(jīng)驗的心血管病醫(yī)生診斷冠心病,診斷依據(jù)WHO有關冠心病的診斷標準,且經(jīng)冠脈造影證實(至少有一支主動脈狹窄程度50%)。運用心電圖和臨床表現(xiàn)確定對照不患有冠心病。對照無糖尿病和高血壓病史。抽取研究對象靜脈血至抗凝、有機玻璃管中,并儲存于-20℃。2.3 SNP的選擇,DNA提取和基因型檢測：運用HapMap網(wǎng)站和軟件Haploview4.2選擇AdipoQ基因的3個SNPs (rs3774261、rs1063537和rs2082940)。利用血液基因組提取試劑盒(ClotBlood DNA kit,康為,北京,中國)提取基因組DNA。采用標準聚合酶鏈反應(PCR)擴增基因組DNA樣本。運用Assay Design 31引物設計軟件設計PCR的引物。SNP位點的基因型檢測采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜技術。運用紫外分光光度計,波長取260nm和280nm,檢測DNA的純度和濃度。之后進行電泳、PCR擴增和聚集分析。分別對盲樣本和非盲樣本進行檢測,要求重合率大于99.99%。2.4脂聯(lián)素水平與冠心病/AdipoQ突變／其他研究的變量：本研究共檢測了83例冠心病患者和81例對照者的血漿脂聯(lián)素含量。每個研究對象采集3m1血液樣本,在3500×g離心10分鐘后儲存于-80℃溫度下直至進行測量。血漿脂聯(lián)素水平檢測使用Abeam貿(mào)易有限公司生產(chǎn)的人類脂聯(lián)素ELISA試劑盒,且所有實驗步驟均依據(jù)該試劑盒說明書進行操作。2.5統(tǒng)計學分析：計量資料采用均數(shù)和標準差描述,組間比較運用t檢驗；計數(shù)資料采用頻數(shù)和構成比描述,組間比較則采用卡方檢驗。年齡的界值為60歲,脂聯(lián)素水平的界值為6μg/ml。根據(jù)規(guī)定的界值生成虛擬變量,變量值小于等于界值,則定義為0,變量值高于界值,定義為1。AdipoQ基因多態(tài)性與冠心病之間的關聯(lián)研究運用多因素logistic回歸分析。采用協(xié)方差分析法(analysis of covariance)分析每個SNP位點的不同基因型之間脂聯(lián)素水平的差異。采用軟件SPSS 21.0和在線軟件SNPStats (http://bioinfo.iconcologia.net/SNPStats)進行統(tǒng)計分析。除特殊說明外,P0.05則認為有統(tǒng)計學意義。3. MicroRNA巴基因預測本研究利用AdipoQ基因及其3個SNP位點(rs3774261.rs1063537和rs2082940)的序列信息,檢索了3個生物信息學數(shù)據(jù)庫(miRGator、miRDB和RegRNA 2.0),進而預測能與AdipoQ基因及其3個SNP位點靶向結合的miRNAs。根據(jù)相應的步驟在3個數(shù)據(jù)庫中檢索所需信息,總結、分析并解釋輸出的結果。三、結果1.Meta分析在本文第一部分中,廣泛在PubMed、EMBASE、中國知網(wǎng)(CNKI)、中國生物醫(yī)學文獻數(shù)據(jù)庫網(wǎng)絡版(CBMDisc)、維普、萬方數(shù)據(jù)庫中,檢索2015年12月31日前已發(fā)表的AdipoQ單核苷酸多態(tài)性與冠心病關聯(lián)研究的文獻。利用meta分析,總結并提供AdipoQ單核苷酸多態(tài)性與冠心病關聯(lián)研究的全面、最新信息。在此次meta分析中,經(jīng)過文獻檢索和嚴格的文獻篩查后,納入了63篇文獻,共66個研究。研究對象共49108例,其中,病例組18250例,平均年齡為60.00歲,BMI的平均值為26.27；對照組30,858例,平均年齡為57.22歲,BMI的平均值為25.88。本研究納入了AdipoQ的三種突變,分別為rs266729 [-13770G]、rs2241766 [+45 TG]、rs1501299 [+276 GT]。位點rs266729[-1377CG]納入的文獻數(shù)量是30,對照組中rs266729 [-1377CG]的MAF平均值為0.26；位點rs2241766 [+45 TG]納入的文獻數(shù)量是40,對照組中rs2241766 [+45 TG]的MAF平均值為0.21；位點rs1501299[+276 GT]納入的文獻數(shù)量是45,對照組中rs1501299[+276 GT]的MAF平均值為0.32。在位點rs266729突變研究中,36.7%的研究結果顯示AdipoQ突變與心血管疾病存在關聯(lián)(P0.05),其中,30.0%的研究結果表明AdipoQ突變是心血管疾病的危險因素,6.7%的研究結果表明AdipoQ突變是心血管疾病的保護因素。在rs2241766突變研究中,有50.0%的研究顯示AdipoQ突變與心血管疾病存在關聯(lián)(P0.05),其中,45.0%的研究結果表明AdipoQ突變是心血管疾病的危險因素,5.0%的研究結果表明AdipoQ突變是心血管疾病的保護因素。在位點rs1501299突變研究中,35.6%的研究結果顯示AdipoQ突變與心血管疾病存在關聯(lián)(P0.05),其中,24.4%的研究結果表明AdipoQ突變是心血管疾病的危險因素,11.1%的研究結果表明AdipoQ突變是心血管疾病的保護因素。在rs266729突變的meta分析中,共納入28487例,包括病例組10249例,對照組18238例。研究結果表明rs266729突變與心血管疾病存在關聯(lián)(OR=1.142,95%CI：1.037-1.259,P=0.007),研究存在異質(zhì)性(,=78.1%,P0.001)。在rs2241766突變的meta分析中,共納入25876例,包括病例組10347例,對照組15529例。研究結果表明rs2241766突變與心血管疾病存在關聯(lián)(OR=1.198,95%CI：1.087-1.319,P0.001),研究存在異質(zhì)性(I2=69.4%,P0.001)。在rs1501299突變的meta分析中,共納入37598例,包括病例組13054例,對照組24544例。研究結果表明rs1501299突變與心血管疾病不存在關聯(lián)((OR=0.936,95%CI:0.943-1.122,P=0.050),研究存在異質(zhì)性(I2=63.3%,P0.001)。顯性模型下,本研究發(fā)現(xiàn)AdipoQ rs266729突變和rs2241766突變均與心血管疾病有關聯(lián)(OR=1.216,95%CI：1.078-1.372,P=0.002；OR=1.229,95%CI：1.099-1.374,P0.001),但是rs1501299突變與心血管疾病無關聯(lián)(OR=0.948,95%CI：0.874-1.027,P=0.192)。AdipoQ突變與心血管疾病之間的關聯(lián)性可能與AdipoQ突變與血漿脂聯(lián)素水平存在關聯(lián)有關。研究表明AdipoQ突變會在一定程度上影響血漿脂聯(lián)素水平和血漿脂聯(lián)素亞型水平。脂聯(lián)素具有抗動脈粥樣硬化、保護心血管、抗炎、抗血栓的作用,低脂聯(lián)素水平(低脂聯(lián)素血癥)與心血管疾病的發(fā)病風險相關,較高的脂聯(lián)素水平是心血管疾病的保護因素。然而,也有研究發(fā)現(xiàn),脂聯(lián)素血癥與心血管疾病之間僅存在微弱或無顯著關聯(lián)性,尤其是在老年人群和女性中。目前有關AdipoQ單核苷酸多態(tài)性與心血管疾病關聯(lián)研究的meta分析中,得出研究結果并不一致,這可能是由于在不同種族中,遺傳因素和環(huán)境因素存在一定程度的差異,進而影響了AdipoQ多態(tài)性對脂聯(lián)素水平的作用。亞組分析顯示不同的變異情況有不同的結果。敏感性分析沒有發(fā)現(xiàn)任何一篇文章影響整體的OR。本研究發(fā)現(xiàn)在rs2241766變異研究中存在發(fā)表偏倚,但是在rs266729和rs1501299變異研究中沒有發(fā)現(xiàn)發(fā)表偏倚。rs266729亞組分析：對基因型、研究對象、研究人群和文獻質(zhì)量評分進行亞組分析。七個研究明確指出他們的結局是冠心病。這些研究的結果顯示rs266729的G等位基因與冠心病有統(tǒng)計學關聯(lián)(OR=1.554.95%CI:1.056-2.285,P=0.025),而其他研究卻沒有顯示這種關聯(lián)(OR=1.090.95%CI:0.998-1.191,P=0.055)。利用P CR-RFLP基因檢測方法提示rs266729的G等位基因與冠心病存在關聯(lián)(OR=1.462,95%CI:1.117-1.914,P=0.006),而其他檢測方法沒有發(fā)現(xiàn)關聯(lián)(TaqMan:OR=1.031,95%CI:0.935-1.137, P=0.544; OR=1.065,95%CI:0.927-1.223,P=0.374)。本研究結果顯示,在對照組人群中rs266729的G等位基因與冠心病存在關聯(lián)(OR=1.217,95%CI：1.071-1.384,P=0.003),而在病例組不存在關聯(lián)(OR=1.035,95%CI：0.886-1.209,P=0.666)。對rs266729的多態(tài)性meta分析包括了歐洲和東亞人群,研究結果顯示在東亞人群,rs266729的G等位基因與冠心病有明顯關聯(lián)(OR=1.364,95%CI：1.116-1.667,P=0.002),但是在歐洲人群中不存在關聯(lián)(OR=1.022,95%CI：0.948-1.102,P=0.564)。在文獻質(zhì)量評分的亞組分析中,發(fā)現(xiàn)在文獻質(zhì)量評分小于10分組,rs266729的G等位基因與冠心病有明顯關聯(lián)(OR=1.318,95%CI：1.093-1.589,P=0.004),而在評分大于10分組不存在關聯(lián)(OR=1.019,95%CI：0.940-1.105,P=0.646)。rs2241766亞組分析：對基因型、研究對象、研究人群和文獻質(zhì)量評分進行亞組分析。十一個研究明確指出他們的結局是冠心病。這些研究的結果顯示rs2241766的G等位基因與冠心病有統(tǒng)計學關聯(lián)((OR=1.225,95%CI:1.022-1.468,P=0.028)。結果顯示其他研究的rs2241766突變也同樣與冠心病的發(fā)生存在關聯(lián)((OR=1.188,95%CI: 1.057-1.335,P=0.004)。在對基因型檢測方法的亞組分析中,本本文結果顯示,利用PCR-RFLP方法的研究和合并方法的研究均發(fā)現(xiàn)rs2241766的G等位基因與冠心病存在關聯(lián)(OR=0.68,95%CI:0.52-0.90,P=0.006; OR=1.201,95%CI:1.039-1.389, P=0.013),但是利用TaqMan檢測方法的研究中沒有發(fā)現(xiàn)關聯(lián)(OR=1.053,95%CI：0.905-1.225,P=0.504)。在正常人群和患病人群中均發(fā)現(xiàn)rs2241766的G等位基因與冠心病存在關聯(lián)(OR=1.159,95%CI：1.039-1.292, P=0.008; OR=1.336,95%CI:1.095-1.630,P=0.004)。在對rs2241766的多態(tài)性研究中包括歐洲、東亞、西亞和非洲人群,本文的研究結果顯示在東亞和西亞人群rs2241766的G等位基因與冠心病存在關聯(lián)(OR=1.203,95%CI：1.044-1.386,P=0.010；OR=1.591,95%CI：1.284-1.970,P=0.000),但是在歐洲和非洲人群不存在關聯(lián)(OR=1.066,95%CI：0.933-1.217,P=0.348；OR=1.757,95%CI：0.907-3.403,P=0.095)。在文獻質(zhì)量評分的亞組分析中,發(fā)現(xiàn)在文獻質(zhì)量評分小于10分組,rs2241766的G等位基因與冠心病存在關聯(lián)(OR=1.385,95%CI：1.182-1.624,P0.001),而在評分大于10分組不存在關聯(lián)(OR=1.028,95%CI：0.943-1.122,P=0.530)。rs1501299亞組分析：對基因型、研究對象、研究人群和文獻質(zhì)量評分進行亞組分析。八個研究明確指出他們的結局是冠心病。這些研究的結果顯示的rs1501299的T等位基因與冠心病有統(tǒng)計學關聯(lián)(OR=0.860,95%CI:0.694-1.065,P=0.166)。結果顯示其他研究rs1501299的突變也同樣與冠心病存在關聯(lián)(OR=0.950,95%CI:0.886-1.017,P=0.142)。在基因型檢測方法的亞組分析中,任何一種測序方法都沒有發(fā)現(xiàn)rs1501299的T等位基因與冠心病存在關聯(lián)：PCR-RFLP(OR=0.913,95%CI:0.795-1.048,P=0.196),TaqMan方法(OR=0.960,95%CI:0.859-1.074,P=0.478)和其他的合并方法(OR=0.933,95%CI：0.838-1.039,P=0.209)。在病例組中,rs1501299的T等位基因與冠心病存在關聯(lián)(OR=0.845,95%CI：0.770-0.927,P0.001),而在對照組中未發(fā)現(xiàn)rs1501299與冠心病存在關聯(lián)(OR=0.976,95%CI:0.901-1.058,P=0.551)。rs1501299多態(tài)性研究的研究人群包括歐洲,東亞,西亞和非洲人群。本文的研究結果顯示,在歐洲,東亞,西亞和非洲人群中rs1501299的T等位基因與冠心病均不存在關聯(lián)(OR=0.944,95%CI:0.889-1.003,P=0.062；OR=0.950,95%CI:0.833-1.083,P=0.440;OR=0.819, 95%CI:0.573-1.171,P=0.275；OR=0.848,95%CI:0.629-1.143,P=0.278)。在文獻質(zhì)量評分的亞組分析中,本研究發(fā)現(xiàn)在文獻質(zhì)量評分小于10分組和評分大于10分組,rs1501299的T等位基因與冠心病均無關聯(lián)(OR=0.930,95%CI：0.831-1.041,P=0.209;OR=0.940,95%CI:0.868-1.018,P=0.130)。(結果圖表請見英文部分)2.AdipoQ單核苷酸多態(tài)性與冠心病之間的關聯(lián)采用病例-對照研究,在中國東北地區(qū)漢族人群中探討AdipoQ單核苷酸多態(tài)性位點(rs3774261、rs1063537和rs2082940)與冠心病的關聯(lián),以及AdipoQ與環(huán)境因素(吸煙、飲酒、血脂等)的交互作用對冠心病的影響。本研究共招募研究對象1514名,為相互間無血緣關系的中國東北地區(qū)漢族人,包括754名冠心病患者和760名對照。病例來源于2011年9月至2012年11月期間吉林大學第一醫(yī)院和吉化總醫(yī)院心內(nèi)科確診的冠心病患者。由至少兩名經(jīng)驗豐富的心血管醫(yī)生完成冠心病的診斷,并通過冠脈造影進一步確定診斷的結果。對照來源于同期吉林大學第一醫(yī)院和吉化總醫(yī)院的體檢者。對照為與病例性別、年齡相匹配的,心電圖正常、無冠心病臨床癥狀和體征者。在病例組中,男性404例,女性350例,對照組中有男性378例,女性382例,兩組間性別分布的差異無統(tǒng)計學意義(P=0.14)；病例組的平均年齡為63.12±8.05,對照組的平均年齡為63.10±8.37,兩組的平均年齡的差異亦無統(tǒng)計學差異(P=0.96),說明病例組與對照組的年齡和性別相匹配。與對照組相比,冠心病組的TC,TG和LDL-C水平較高,HDL-C水平較低。與對照組相比,冠心病組有更多的吸煙和飲酒者(飲酒：14.2% vs.7.2%,吸煙：50.1% vs.11.6%)。本文的結果顯示吸煙和飲酒與冠心病存在關聯(lián),為冠心病的危險因素(OR=7.677,95%CI:5.895-9.997, P0.001; OR=2.120,95%CI:1.505-2.985, P0.001)。基因型DNA樣本由754例冠心病患者和760例對照組成。位點rs3774261、位點rs1063537和位點rs2082940的檢出率分別是98.88%,99.01%和98.88%。病例組和對照組在rs3774261位點的基因型分布和等位基因頻率上差異均具有統(tǒng)計學意義(χ2=24.75, P0.001; χ2=21.33, P0.001)。在rs2082940位點,病例組與對照組間基因型分布的差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=4.36,P=0.04)；而兩組間等位基因頻率的差異不具有統(tǒng)計學意義(χ2=0.34,P=0.562)。對于rs1063537位點來說,病例組和對照組的基因型分布和等位基因頻率上的差異均不具有統(tǒng)計學意義(χ2=2.60, P=0.27;χ2=2.01, P=0.16)。顯性模型下,攜帶rs3774261位點G等位基因的研究對象患冠心病的風險較高(OR=1.74,95%CI：1.39-2.18,P0.001),攜帶rs2082940位點T等位基因的研究對象患冠心病的風險較低(OR=0.80,95%CI:0.66-0.99, P=0.035), rs1063537位點C等位基因與冠心病的發(fā)病風險無關聯(lián)(OR=0.85,95%CI：0.69-1.04,P=0.110),提示AdipoQ對冠心病可能既存在保護作用,又可能是其危險因素,如在本研究中,rs3774261位點G等位基因可能是冠心病的危險因素,rs2082940位點的T等位基因可能是冠心病的保護因素。Lacquemant等研究表明AdipoQ rs224166突變增加糖尿病病人患冠心病的風險,而Bacci等研究發(fā)現(xiàn)AdipoQ rs1501299突變與冠心病發(fā)病風險降低有關,這些研究也表明AdipoQ在冠心病發(fā)生發(fā)展可能發(fā)揮雙重作用,與本文的研究結果相一致。本研究單體型分析的結果顯示,在冠心病患者中,AdipoQ基因多態(tài)性位點rs3774261、rs1063537、rs2082940組成的單體型共有GCC、ATT、ACC三種；在對照組中,AdiooQ基因多態(tài)性位點rs3774261、rs1063537、rs2082940組成的單體型主要有GCC、ATT、ACC、ACT四種,上述四種單體型頻率之和為99.19%。在本研究中,僅在對照組中發(fā)現(xiàn)ACT單體型,頻率為1.99%。與冠心病組相比,ATT單體型和ACC單體型在對照組中頻率較大。攜帶單體型ATT的研究對象患冠心病的風險是攜帶單體型GCC的0.78倍(OR=0.78,95%CI：0.65-0.93,P=0.0068)；攜帶單體型ACC的研究對象患冠心病的風險是攜帶單體型GCC的0.74倍(OR=0.74,95%CI:0.62-0.88, P0.001)。在對照組中,AdipoQ的4個單核苷酸多態(tài)性位點不同基因型間,TG水平、TC水平、LDL-C水平和HDL-C水平的差異均沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)�；蚝铜h(huán)境因素均影響心血管疾病的發(fā)病風險,此外,研究表明心血管疾病的遺傳風險受到特定環(huán)境因素的調(diào)節(jié),即基因與環(huán)境因素之間存在交互作用。在本研究的基因和環(huán)境的交互作用分析中,結果顯示,HDL-C水平分別與AdipoQ rs1063537位點(P=0.034)和rs2082940位點存在交互作用(P=0.033),未發(fā)現(xiàn)HDL-C水平與rs3774261位點存在交互作用(P=0.708),說明環(huán)境因素在冠心病發(fā)生發(fā)展中的起到重要的作用。在本次研究中,未發(fā)現(xiàn)AdipoQ單核苷酸多態(tài)性與其他環(huán)境因素(吸煙,飲酒,TG, LDL-C和FBG)之間存在交互作用(P0.05)。(結果圖表請見英文部分)3.血漿脂聯(lián)素水平本部分研究對象共包括83例冠心病患者和81例對照者,每人采集3ml的血液樣本。應用Abcam貿(mào)易有限公司生產(chǎn)的人類脂聯(lián)素ELISA試劑盒檢測研究對象血漿脂聯(lián)素水平分析性別、年齡、冠心病和AdipoQ基因多態(tài)性對血漿脂聯(lián)素水平的影響。研究結果顯示,未發(fā)現(xiàn)性別和年齡對血漿脂聯(lián)素水平有影響(性別：P=0.991；年齡：P=0.447),提示在本研究中性別和年齡對血漿脂聯(lián)素水平可能無影響。而既往有研究表明女性血漿脂聯(lián)素水平高于男性,與本研究結果不一致,需要擴大樣本量進一步驗證分析。冠心病患者的血漿脂聯(lián)素水平低于對照者(病例組：7.70±4.96,對照組：12.85±3.98,P0.001),提示在北方漢族人群中,冠心病患者血漿脂聯(lián)素水平與冠心病發(fā)病風險呈負關聯(lián)。采用協(xié)方差分析方法分別在冠心病組、對照組和所有研究對象中分析AdipoQ基因三個多態(tài)性位點(-3774261、rs1063537和rs2082940)對血漿脂聯(lián)素水平的影響,結果顯示各個基因型間的脂聯(lián)素水平差異不具有統(tǒng)計學意義(P0.05),提示AdipoQ基因多態(tài)性對血漿脂聯(lián)素水平無影響。該結果與Apalasamy等在馬來西亞人群中的研究結果相一致,但另有其他研究顯示AdipoQ基因多態(tài)性可影響血漿脂聯(lián)素水平,與本文的結果不一致,這可能與本研究的樣本量較小有關。4. MicroRNA靶基因預測目前對于AdipoQ基因變異與脂聯(lián)素水平之間的關聯(lián)仍存在爭議,現(xiàn)有研究結果也未能解釋冠心病患者血漿脂聯(lián)素水平降低的原因。由于miRNA能與AdipoQ基因的3'UTR區(qū)域互補結合,調(diào)控基因表達的轉(zhuǎn)錄后過程,進而抑制脂聯(lián)素蛋白的翻譯,因此本研究檢索了3個生物信息學數(shù)據(jù)庫(miRGator、miRDB和 RegRNA 2.0),進而預測能與AdipoQ基因及其3個SNP位點靶向結合的miRNAs。通過檢索miRGator數(shù)據(jù)庫,僅發(fā)現(xiàn)一種miRNA (hsa-miR-199a-star)能與AdipoQ基因靶向結合。進一步檢索顯示,除了AdipoQ基因之外,hsa-miR-199a還能與另外612個基因的mRNA相結合,但hsa-miR-199a與大多數(shù)靶基因mRNA的結合強度較弱。在miRDB數(shù)據(jù)庫中,本研究預測發(fā)現(xiàn)有62個miRNAs能夠靶向結合AdipoQ基因,同時發(fā)現(xiàn)分別有20、36和41個miRNAs能夠靶向結合AdipoQ基因的rs3774261、rs1063537和rs2082940位點,在預測出的41個與AdipoQ基因3'UTR處rs2082940位點靶向結合的miRNAs中,得分最高的2個miRNAs為hsa-miR-4657和hsa-miR-4491。以上結果與L agana等人的研究結論相一致,提示單個miRNA通過與目標mRNA的部分序列互補結合的方式來調(diào)控不同基因的轉(zhuǎn)錄過程,而且多個miRNAs也能共同調(diào)節(jié)單個基因的轉(zhuǎn)錄過程。因此,能與AdipoQ基因靶向結合的miRNAs同時也能調(diào)控其他基因的表達,如本研究中預測的hsa-miR-199a也可靶向調(diào)節(jié)SPARCLl和ACTA2基因,進而影響多種疾病的發(fā)展過程。本研究利用RegNA數(shù)據(jù)庫來識另AdipoQ-miRNA結合的結構模體,將rs3774261、rs1063537和rs2082940位點的序列信息輸入該數(shù)據(jù)庫后進行檢索。檢索結果發(fā)現(xiàn)與AdipoQ基因rs3774261位點互補結合的miRNAs有hsa-miR-4655-3p(caccgtggacctgatgaagaa)和hsa-miR-323b-5p(aatgtactcaccgtggacctgat),沒有檢索到與AdipoQ基因rs1063537和rs2082940位點靶向結合的1niRNAs。(結果圖表請見英文部分)四、結論1.本研究的meta分析結果表明,rs266729和rs2241766的G等位基因是冠心病的易感基因,而rs1501299的T等位基因與冠心病無關聯(lián)。在冠心病與rs2241766的關聯(lián)性研究中存在異質(zhì)性和發(fā)表偏倚。2.在東北地區(qū)漢族人群中,對AdipoQ基因的三種變異(rs3774261、rs1063537和rs2082940)與冠心病的關聯(lián)進行研究,發(fā)現(xiàn)AdipoQ基因的單核苷酸多態(tài)性對冠心病的發(fā)病可能具有雙重作用,即攜帶rs2082940位點的T等位基因是冠心病的保護性因素,攜帶rs3774261位點的G等位基因是冠心病的危險因素。3.在東北地區(qū)漢族人群中冠心病患者血漿脂聯(lián)素水平與冠心病的發(fā)病風險呈負關聯(lián)。4.通過檢索生物信息數(shù)據(jù)庫,針對rs3774261、rs1063537和rs2082940三個位點,預測了多個與AdipoQ結合的miRNAs,識別出AdipoQ-miRNA結合的結構模體,并發(fā)現(xiàn)hsa-miR-4657和hsa-miR-4491可與AdipoQ 3'UTR的rs2082940結合。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R541.4
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本文編號：1673448