發(fā)布時(shí)間：2018-03-27 22:07

  本文選題：中國　切入點(diǎn)：東北地區(qū)　出處：《吉林大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：一、背景冠心病(CHD)和其他心血管疾病(CVDs)是工業(yè)化國家和發(fā)展中國家所面臨的一個(gè)巨大挑戰(zhàn)。與其他疾病相比,每年死于心血管疾病的人數(shù)較多。據(jù)估計(jì),2012年心血管疾病的死亡人數(shù)約為1750萬(占非傳染性疾病死亡總?cè)藬?shù)的46%),其中死于冠心病的人數(shù)有740萬,死于中風(fēng)的人數(shù)有670萬。全球非傳染性疾病(NCD)和可持續(xù)性發(fā)展目標(biāo)(SDG)的關(guān)注的焦點(diǎn)是：約三分之一冠心病死亡者為30-70歲之間的成年人。據(jù)估計(jì),1990-2020年全球冠心病所造成的傷殘調(diào)整壽命年(DALYs)將由4700萬上升到8200萬。因此,冠心病應(yīng)該引起人們足夠的重視,達(dá)到完全預(yù)防和控制該疾病的目的。事實(shí)上,冠心病等非傳染性疾病不僅能影響人群的健康狀況和死亡率,還能對經(jīng)濟(jì)產(chǎn)生巨大影響,是導(dǎo)致貧困發(fā)生的主要原因。目前,專業(yè)化醫(yī)療服務(wù)正日益完善,心血管疾病等慢性病需要負(fù)擔(dān)更為昂貴的治療方案和長期的個(gè)人護(hù)理費(fèi)用。與西方國家相比,中國人群冠心病的死亡率相對較低,但中國人群的冠心病人數(shù)正逐年增加。中國城市和農(nóng)村地區(qū)冠心病死亡人數(shù)分別占心血管疾病死亡人數(shù)的22%和13%,冠心病已成為造成心血管疾病死亡的第二個(gè)主要原因。隨著中國經(jīng)濟(jì)的增長和人口壽命的延長,冠心病的醫(yī)療保健、發(fā)病和死亡所造成的費(fèi)用支出將大部分由國家衛(wèi)生部門承擔(dān)。冠狀動(dòng)脈粥樣硬化通常被認(rèn)為是導(dǎo)致冠心病發(fā)生的病理基礎(chǔ),但該病的確切病因和病理生理學(xué)機(jī)制仍然未知。許多研究顯示,冠心病是一種由多種因素所造成的復(fù)雜疾病,包括環(huán)境因素、生活方式和遺傳易感性,以及這些因素之間的交互作用。與冠心病和其他心血管疾病遺傳學(xué)方面有關(guān)的資料在學(xué)術(shù)文獻(xiàn)中均有據(jù)可查。某些基因、基因簇以及基因的多態(tài)性都能參與冠心病的發(fā)生和發(fā)展。環(huán)境因素等非遺傳因素也可影響冠心病的發(fā)展,研究提示一些環(huán)境因素與冠心病的病因有關(guān)。流行病學(xué)研究和家系研究均表明,冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的40%-60%可由遺傳易感性來解釋,因此,對冠心病采取全方位的治療和預(yù)防也應(yīng)該改變遺傳危險(xiǎn)因素的影響。此外,由遺傳因素和環(huán)境因素共同作用導(dǎo)致的高膽固醇血癥的治療過程中也應(yīng)該考慮改變遺傳因素的影響。常見基因變異包括單核苷酸多態(tài)性(SNPs),許多有關(guān)常見基因變異與某些疾病易感性的關(guān)聯(lián)研究結(jié)果表明,常見基因變異能影響常見病的易感性。目前認(rèn)為AdipoQ基因及其編碼的脂聯(lián)素蛋白與冠心病有關(guān)聯(lián)。已有研究報(bào)道AdipoQ基因上的一些單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(如rs3774261、rs1063537和rs2082940)與許多疾病有關(guān),包括冠心病、肥胖、糖尿病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、高血壓和心肌梗死等。許多學(xué)術(shù)文獻(xiàn)報(bào)道,AdipoQ基因單核苷酸變異與脂聯(lián)素水平之間的關(guān)聯(lián)較強(qiáng)。許多研究已證明脂聯(lián)素具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、保護(hù)心臟、抗炎和抗血栓的作用。一些研究結(jié)果顯示,脂聯(lián)素水平降低(低脂聯(lián)素血癥)與冠心病風(fēng)險(xiǎn)升高有關(guān),而脂聯(lián)素水平增加可防止冠心病的發(fā)生。然而,另有一些研究結(jié)果表明脂聯(lián)素血癥與心血管疾病之間的關(guān)聯(lián)程度較弱或無關(guān)聯(lián),尤其是婦女和老年人群。Luc等的研究認(rèn)為在外表健康的男性人群中,循環(huán)中脂聯(lián)素總體水平不是冠心病事件的獨(dú)立預(yù)測因子。許多研究顯示,遺傳因素和環(huán)境因素在多因素疾病(也稱復(fù)雜性疾病,如冠心病)的發(fā)生發(fā)展過程中均發(fā)揮重要作用。非遺傳因素對心血管疾病發(fā)生和發(fā)展過程的影響也已被識(shí)別。吸煙、飲酒、久坐、缺乏體育鍛煉、飲食習(xí)慣和許多其他社交活動(dòng)等日常生活方式均能影響冠心病的發(fā)生。雖然全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)已識(shí)別出許多與疾病狀態(tài)有關(guān)的各種基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn),但要發(fā)現(xiàn)由這些疾病相關(guān)遺傳變異所導(dǎo)致相應(yīng)疾病病因的確切分子或細(xì)胞機(jī)制仍然很困難。實(shí)際上,現(xiàn)有的基因變異與疾病或性狀的關(guān)聯(lián)研究速度和這些關(guān)聯(lián)的功能機(jī)制研究速度并不同步�？梢試L試通過預(yù)測小RNA (miRNA)結(jié)合位點(diǎn)來研究基因單核苷酸多態(tài)性導(dǎo)致異常性狀或疾病的機(jī)制。miRNA屬于小RNA基因產(chǎn)物,它以堿基互補(bǔ)配對的方式來調(diào)節(jié)信使RNAs (mRNAs)的活性。在動(dòng)物體內(nèi),miRNA能調(diào)節(jié)基因的翻譯表達(dá),它還能與成熟目標(biāo)mRNA的3'非翻譯區(qū)(3'UTR)位點(diǎn)互補(bǔ)結(jié)合,miRNA主要調(diào)控(抑制)目標(biāo)mRNA翻譯過程,但其機(jī)制仍然有待進(jìn)一步研究。許多已經(jīng)發(fā)表數(shù)據(jù)表明,AdipoQ基因與某些疾病有關(guān)聯(lián),如糖尿病、高血壓、冠心病和代謝綜合征等。既往有關(guān)AdipoQ基因多態(tài)性與冠心病及其他心血管疾病之間的關(guān)聯(lián)研究結(jié)果并不一致,而且大多數(shù)都是在動(dòng)物模型、歐洲或其他西方國家的人群中開展的研究。由于已報(bào)道的AdipoQ基因單核苷酸變異與心血管疾病的關(guān)聯(lián)研究結(jié)果存在不一致性,因此需要采用meta分析法綜合分析現(xiàn)有的研究結(jié)果,并最終得出定量性結(jié)論。1976年,Gene Glass,創(chuàng)造了一個(gè)術(shù)語"meta分析”來指代一種將大量個(gè)人的研究分析結(jié)果收集起來進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以達(dá)到整合調(diào)查結(jié)果的目的。Meta分析是使用統(tǒng)計(jì)方法將不同研究的結(jié)果相結(jié)合的過程。Meta分析歷來被用于整合臨床隨機(jī)試驗(yàn),其中樣本量小,導(dǎo)致不穩(wěn)定的估計(jì)結(jié)果,但meta分析可以將每個(gè)研究進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。在生物醫(yī)學(xué)科學(xué)中,meta分析有著悠久的歷史,它通過利用一些獨(dú)立研究的信息對感興趣的問題進(jìn)行系統(tǒng),有組織,有結(jié)構(gòu)化的評(píng)價(jià)。流行病學(xué)研究的meta分析的主要目標(biāo)是：1)綜合各個(gè)研究的估計(jì)到一個(gè)綜合的估計(jì),在探索低關(guān)聯(lián)的原因上起至關(guān)重要的作用；2)為了深入了解研究具體估計(jì)之間的關(guān)系和研究具體特點(diǎn),可以通過meta分析在進(jìn)一步的研究中回答相同或類似的問題。對于有矛盾和爭議的研究問題,就像AdipoQ基因單核苷酸多態(tài)性和冠心病之間的關(guān)聯(lián)研究的meta分析一樣,不僅僅是要解決結(jié)論不一致的問題,而且還可以給出更正確的結(jié)論。如果在面對具有挑戰(zhàn)性的問題,特別是醫(yī)療行業(yè)無法利用系統(tǒng)綜述和meta分析的原則和技術(shù),將會(huì)導(dǎo)致資源丟失。一個(gè)典型的常被引用的失敗的例子是,在20世紀(jì)50年代到70年代,由于聽了醫(yī)生錯(cuò)誤的指導(dǎo),以趴著的姿勢睡覺,而引起超過10萬的嬰兒突然嬰兒死亡綜合癥,經(jīng)過大約半個(gè)世紀(jì)以后,研究的證據(jù)表明這很可能是有害的。今天,meta分析是解決醫(yī)學(xué)界許多問題的非常重要的工具。據(jù)資料可知,在中國北方漢族人群中開展冠心病風(fēng)險(xiǎn)與AdipoQ基因變異(rs3774261、rs1063537和rs2082940)的關(guān)聯(lián)研究尚未見報(bào)道。在本文的研究人群中需要調(diào)查脂聯(lián)素水平及該水平是否與冠心病和其他變量有關(guān)。此外,有關(guān)AdipoQ基因活性的單一研究也未見報(bào)道,如meta分析、關(guān)聯(lián)研究、環(huán)境因素交互作用、脂聯(lián)素蛋白相關(guān)性和功能性研究。本研究的主要研究目的如下。研究目的：為進(jìn)一步了解冠心病/心血管疾病與AdipoQ基因變異之間的關(guān)聯(lián),本研究設(shè)計(jì)了以下具體研究目標(biāo)：1.根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的數(shù)據(jù)結(jié)果,總結(jié)有關(guān)AdipoQ基因變異與CVD關(guān)聯(lián)的最新完整信息。這部分研究主要是在數(shù)據(jù)庫中廣泛搜索CVD與AdipoQ基因SNPs之間關(guān)聯(lián)的相關(guān)研究。2.在中國東北地區(qū)漢族人群中研究冠心病與AdipoQ基因上3個(gè)SNPs位點(diǎn)之間的關(guān)聯(lián)(rs3774261、rs1063537和rs2082940)。這部分為流行病學(xué)研究,所有研究對象為中國東北地區(qū)漢族人群,收集DNA樣本并分析人口學(xué)數(shù)據(jù)和生物化學(xué)數(shù)據(jù)。3.在本研究人群中探索AdipoQ基因變異與環(huán)境因素之間的可能交互作用對冠心病的影響。這部分研究包括分析冠心病和環(huán)境因素(飲酒、吸煙、TG、LDL-C、HDL-C口FBG水平)之間的關(guān)聯(lián),AdipoQ基因SNPs與以上環(huán)境因素之間的交互作用對冠心病的影響。4.在中國東北地區(qū)漢族人群中研究血液中脂聯(lián)素水平分別與AdipoQ基因SNPs及冠心病之間的關(guān)聯(lián)。測量血漿脂聯(lián)素水平,探討其與冠心病、年齡、性別和AdipoQ基因變異之間的相關(guān)性。5.應(yīng)用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測AdipoQ基因上3個(gè)SNPs位點(diǎn)(rs3774261、rs1063537和rs2082940)的1niRNA結(jié)合靶點(diǎn)。運(yùn)用不同的生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫來預(yù)測能與本研究3個(gè)SNPs位點(diǎn)的：mRNA靶點(diǎn)相結(jié)合的：miRNA。二、材料與方法1. Meta分析1.1檢索策略、文獻(xiàn)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)：檢索PubMed、EMBASE、中國知網(wǎng)(CNKI)、中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫網(wǎng)絡(luò)版(CBMDisc)、維普、萬方數(shù)據(jù)庫中2015年12月31日前發(fā)表的關(guān)于AdipoQ基因多態(tài)性與冠心病的關(guān)聯(lián)研究的文獻(xiàn)。運(yùn)用多種檢索詞結(jié)合進(jìn)行檢索,例如：“冠心病”或“冠狀動(dòng)脈疾病”或“心血管疾病”或“缺血性心臟病”或“心絞痛”或“中心肌梗死”或“中風(fēng)”或“動(dòng)脈粥樣硬化”或“動(dòng)脈硬化”或“冠狀動(dòng)脈狹窄”結(jié)合"ADIPOQ'或‘'APM1'或“ACDC'”或“脂聯(lián)素基因”并結(jié)合“多態(tài)性”或“突變”或“基因關(guān)聯(lián)研究”。文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)如下：1)具有足夠的數(shù)據(jù)評(píng)估疾病(冠心病/冠狀動(dòng)脈疾病/心血管疾病/心肌梗死)與ApdipoQ基因單核甘酸多態(tài)性之間的關(guān)聯(lián)；2)有原始數(shù)據(jù)；3)對于AdipoQ基因多態(tài)性位點(diǎn)rs266729、s2241766、rs1501299,納入的文獻(xiàn)必須至少包括上述三個(gè)位點(diǎn)之一與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)關(guān)聯(lián)的數(shù)據(jù)：4)語言為英語或漢語。文獻(xiàn)排除標(biāo)準(zhǔn)為：1)文獻(xiàn)中有重復(fù)數(shù)據(jù)；2)文獻(xiàn)的語言不是英語或者漢語；3)文獻(xiàn)一些信息缺失(基因型分布),尤其是在聯(lián)系通訊作者后,未能提供所需的信息。對于有重復(fù)病例或?qū)φ盏奈墨I(xiàn),最新發(fā)表或者能提取數(shù)據(jù)量最大者納入meta分析。基因組掃描文獻(xiàn)不納入meta分析。文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)和數(shù)據(jù)提取：納入meta分析的每篇文獻(xiàn)質(zhì)量均經(jīng)過評(píng)估,并由兩名研究人員提取數(shù)據(jù)�？偨Y(jié)提取的信息并整理成表格,以備meta分析。1.2統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：運(yùn)用等位基因計(jì)數(shù)法從納入文獻(xiàn)中獲得等位基因頻率。通過對比AdipoQ次要等位基因與常見等位基因,評(píng)估等位基因的作用。利用比值比(OR)及其95%可信區(qū)間(95%CI)衡量AdipoQ基因多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈疾病的易感性之間的關(guān)聯(lián)。采用Q檢驗(yàn)中的卡方檢驗(yàn)進(jìn)行異質(zhì)性檢驗(yàn),I2衡量異質(zhì)性大小。運(yùn)用反變量隨機(jī)效應(yīng)模型合并所有的OR,并采用Z統(tǒng)計(jì)量分析合并的OR的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。基于研究的結(jié)局(冠心病和所有其他的結(jié)局指標(biāo))、基因分型技術(shù)(PCR-RFLP, TaqMan或者其他)、研究對象(對照組與病例組)、人種(歐洲人、東亞人、西亞人和非洲人)、樣本量(1000和≥1000)、質(zhì)量評(píng)分(10和≥10)進(jìn)行亞組分析。采用敏感性分析評(píng)估每篇文獻(xiàn)對于合并OR的作用。此外,還進(jìn)行累積性meta分析并檢驗(yàn)發(fā)表偏倚。運(yùn)用遺傳模型(顯性模型、隱性模型、共顯性模型)分析基因與冠心病之間的關(guān)聯(lián)性。對于納入meta分析的3個(gè)SNPS進(jìn)行單獨(dú)分析。本研究運(yùn)用STATA 12進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。除特殊說明外,P0.05則認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.關(guān)聯(lián)研究(AdipoQ突變-冠心病關(guān)聯(lián)；基因-環(huán)境交互作用；脂聯(lián)素水平與冠心病/AdipoQ突變/其他研究的變量)2.1研究對象：采用病例-對照研究的設(shè)計(jì),招募冠心病患者754例,對照760例,共1514名研究對象。病例來源于吉林大學(xué)第一醫(yī)院和吉化總醫(yī)院。對照與病例年齡、性別相匹配,且與病例同期。本文研究對象為相互間無血緣關(guān)系的中國北方漢族人。數(shù)據(jù)從2011年9月份開始收集,直至2012年11月。本研究獲得吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院倫理委員會(huì)的審查與批準(zhǔn)。所有研究對象均簽署《知情同意書》。2.2流行病學(xué)調(diào)查和生化檢查：運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)化信息檢索工具(調(diào)查問卷)收集研究對象的人口學(xué)資料和臨床資料。吸煙定義為在過去的一個(gè)月內(nèi)每天至少吸煙一支,或者既往吸煙,即使至少一個(gè)月內(nèi)完全不吸煙。飲酒定義為飲用各種含酒精成分的飲料,每周至少一次。由兩名有經(jīng)驗(yàn)的心血管病醫(yī)生診斷冠心病,診斷依據(jù)WHO有關(guān)冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn),且經(jīng)冠脈造影證實(shí)(至少有一支主動(dòng)脈狹窄程度50%)。運(yùn)用心電圖和臨床表現(xiàn)確定對照不患有冠心病。對照無糖尿病和高血壓病史。抽取研究對象靜脈血至抗凝、有機(jī)玻璃管中,并儲(chǔ)存于-20℃。2.3 SNP的選擇,DNA提取和基因型檢測：運(yùn)用HapMap網(wǎng)站和軟件Haploview4.2選擇AdipoQ基因的3個(gè)SNPs (rs3774261、rs1063537和rs2082940)。利用血液基因組提取試劑盒(ClotBlood DNA kit,康為,北京,中國)提取基因組DNA。采用標(biāo)準(zhǔn)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增基因組DNA樣本。運(yùn)用Assay Design 31引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)PCR的引物。SNP位點(diǎn)的基因型檢測采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)。運(yùn)用紫外分光光度計(jì),波長取260nm和280nm,檢測DNA的純度和濃度。之后進(jìn)行電泳、PCR擴(kuò)增和聚集分析。分別對盲樣本和非盲樣本進(jìn)行檢測,要求重合率大于99.99%。2.4脂聯(lián)素水平與冠心病/AdipoQ突變／其他研究的變量：本研究共檢測了83例冠心病患者和81例對照者的血漿脂聯(lián)素含量。每個(gè)研究對象采集3m1血液樣本,在3500×g離心10分鐘后儲(chǔ)存于-80℃溫度下直至進(jìn)行測量。血漿脂聯(lián)素水平檢測使用Abeam貿(mào)易有限公司生產(chǎn)的人類脂聯(lián)素ELISA試劑盒,且所有實(shí)驗(yàn)步驟均依據(jù)該試劑盒說明書進(jìn)行操作。2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：計(jì)量資料采用均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差描述,組間比較運(yùn)用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)和構(gòu)成比描述,組間比較則采用卡方檢驗(yàn)。年齡的界值為60歲,脂聯(lián)素水平的界值為6μg/ml。根據(jù)規(guī)定的界值生成虛擬變量,變量值小于等于界值,則定義為0,變量值高于界值,定義為1。AdipoQ基因多態(tài)性與冠心病之間的關(guān)聯(lián)研究運(yùn)用多因素logistic回歸分析。采用協(xié)方差分析法(analysis of covariance)分析每個(gè)SNP位點(diǎn)的不同基因型之間脂聯(lián)素水平的差異。采用軟件SPSS 21.0和在線軟件SNPStats (http://bioinfo.iconcologia.net/SNPStats)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。除特殊說明外,P0.05則認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3. MicroRNA巴基因預(yù)測本研究利用AdipoQ基因及其3個(gè)SNP位點(diǎn)(rs3774261.rs1063537和rs2082940)的序列信息,檢索了3個(gè)生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(miRGator、miRDB和RegRNA 2.0),進(jìn)而預(yù)測能與AdipoQ基因及其3個(gè)SNP位點(diǎn)靶向結(jié)合的miRNAs。根據(jù)相應(yīng)的步驟在3個(gè)數(shù)據(jù)庫中檢索所需信息,總結(jié)、分析并解釋輸出的結(jié)果。三、結(jié)果1.Meta分析在本文第一部分中,廣泛在PubMed、EMBASE、中國知網(wǎng)(CNKI)、中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫網(wǎng)絡(luò)版(CBMDisc)、維普、萬方數(shù)據(jù)庫中,檢索2015年12月31日前已發(fā)表的AdipoQ單核苷酸多態(tài)性與冠心病關(guān)聯(lián)研究的文獻(xiàn)。利用meta分析,總結(jié)并提供AdipoQ單核苷酸多態(tài)性與冠心病關(guān)聯(lián)研究的全面、最新信息。在此次meta分析中,經(jīng)過文獻(xiàn)檢索和嚴(yán)格的文獻(xiàn)篩查后,納入了63篇文獻(xiàn),共66個(gè)研究。研究對象共49108例,其中,病例組18250例,平均年齡為60.00歲,BMI的平均值為26.27；對照組30,858例,平均年齡為57.22歲,BMI的平均值為25.88。本研究納入了AdipoQ的三種突變,分別為rs266729 [-13770G]、rs2241766 [+45 TG]、rs1501299 [+276 GT]。位點(diǎn)rs266729[-1377CG]納入的文獻(xiàn)數(shù)量是30,對照組中rs266729 [-1377CG]的MAF平均值為0.26；位點(diǎn)rs2241766 [+45 TG]納入的文獻(xiàn)數(shù)量是40,對照組中rs2241766 [+45 TG]的MAF平均值為0.21；位點(diǎn)rs1501299[+276 GT]納入的文獻(xiàn)數(shù)量是45,對照組中rs1501299[+276 GT]的MAF平均值為0.32。在位點(diǎn)rs266729突變研究中,36.7%的研究結(jié)果顯示AdipoQ突變與心血管疾病存在關(guān)聯(lián)(P0.05),其中,30.0%的研究結(jié)果表明AdipoQ突變是心血管疾病的危險(xiǎn)因素,6.7%的研究結(jié)果表明AdipoQ突變是心血管疾病的保護(hù)因素。在rs2241766突變研究中,有50.0%的研究顯示AdipoQ突變與心血管疾病存在關(guān)聯(lián)(P0.05),其中,45.0%的研究結(jié)果表明AdipoQ突變是心血管疾病的危險(xiǎn)因素,5.0%的研究結(jié)果表明AdipoQ突變是心血管疾病的保護(hù)因素。在位點(diǎn)rs1501299突變研究中,35.6%的研究結(jié)果顯示AdipoQ突變與心血管疾病存在關(guān)聯(lián)(P0.05),其中,24.4%的研究結(jié)果表明AdipoQ突變是心血管疾病的危險(xiǎn)因素,11.1%的研究結(jié)果表明AdipoQ突變是心血管疾病的保護(hù)因素。在rs266729突變的meta分析中,共納入28487例,包括病例組10249例,對照組18238例。研究結(jié)果表明rs266729突變與心血管疾病存在關(guān)聯(lián)(OR=1.142,95%CI：1.037-1.259,P=0.007),研究存在異質(zhì)性(,=78.1%,P0.001)。在rs2241766突變的meta分析中,共納入25876例,包括病例組10347例,對照組15529例。研究結(jié)果表明rs2241766突變與心血管疾病存在關(guān)聯(lián)(OR=1.198,95%CI：1.087-1.319,P0.001),研究存在異質(zhì)性(I2=69.4%,P0.001)。在rs1501299突變的meta分析中,共納入37598例,包括病例組13054例,對照組24544例。研究結(jié)果表明rs1501299突變與心血管疾病不存在關(guān)聯(lián)((OR=0.936,95%CI:0.943-1.122,P=0.050),研究存在異質(zhì)性(I2=63.3%,P0.001)。顯性模型下,本研究發(fā)現(xiàn)AdipoQ rs266729突變和rs2241766突變均與心血管疾病有關(guān)聯(lián)(OR=1.216,95%CI：1.078-1.372,P=0.002；OR=1.229,95%CI：1.099-1.374,P0.001),但是rs1501299突變與心血管疾病無關(guān)聯(lián)(OR=0.948,95%CI：0.874-1.027,P=0.192)。AdipoQ突變與心血管疾病之間的關(guān)聯(lián)性可能與AdipoQ突變與血漿脂聯(lián)素水平存在關(guān)聯(lián)有關(guān)。研究表明AdipoQ突變會(huì)在一定程度上影響血漿脂聯(lián)素水平和血漿脂聯(lián)素亞型水平。脂聯(lián)素具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、保護(hù)心血管、抗炎、抗血栓的作用,低脂聯(lián)素水平(低脂聯(lián)素血癥)與心血管疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān),較高的脂聯(lián)素水平是心血管疾病的保護(hù)因素。然而,也有研究發(fā)現(xiàn),脂聯(lián)素血癥與心血管疾病之間僅存在微弱或無顯著關(guān)聯(lián)性,尤其是在老年人群和女性中。目前有關(guān)AdipoQ單核苷酸多態(tài)性與心血管疾病關(guān)聯(lián)研究的meta分析中,得出研究結(jié)果并不一致,這可能是由于在不同種族中,遺傳因素和環(huán)境因素存在一定程度的差異,進(jìn)而影響了AdipoQ多態(tài)性對脂聯(lián)素水平的作用。亞組分析顯示不同的變異情況有不同的結(jié)果。敏感性分析沒有發(fā)現(xiàn)任何一篇文章影響整體的OR。本研究發(fā)現(xiàn)在rs2241766變異研究中存在發(fā)表偏倚,但是在rs266729和rs1501299變異研究中沒有發(fā)現(xiàn)發(fā)表偏倚。rs266729亞組分析：對基因型、研究對象、研究人群和文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)分進(jìn)行亞組分析。七個(gè)研究明確指出他們的結(jié)局是冠心病。這些研究的結(jié)果顯示rs266729的G等位基因與冠心病有統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(OR=1.554.95%CI:1.056-2.285,P=0.025),而其他研究卻沒有顯示這種關(guān)聯(lián)(OR=1.090.95%CI:0.998-1.191,P=0.055)。利用P CR-RFLP基因檢測方法提示rs266729的G等位基因與冠心病存在關(guān)聯(lián)(OR=1.462,95%CI:1.117-1.914,P=0.006),而其他檢測方法沒有發(fā)現(xiàn)關(guān)聯(lián)(TaqMan:OR=1.031,95%CI:0.935-1.137, P=0.544; OR=1.065,95%CI:0.927-1.223,P=0.374)。本研究結(jié)果顯示,在對照組人群中rs266729的G等位基因與冠心病存在關(guān)聯(lián)(OR=1.217,95%CI：1.071-1.384,P=0.003),而在病例組不存在關(guān)聯(lián)(OR=1.035,95%CI：0.886-1.209,P=0.666)。對rs266729的多態(tài)性meta分析包括了歐洲和東亞人群,研究結(jié)果顯示在東亞人群,rs266729的G等位基因與冠心病有明顯關(guān)聯(lián)(OR=1.364,95%CI：1.116-1.667,P=0.002),但是在歐洲人群中不存在關(guān)聯(lián)(OR=1.022,95%CI：0.948-1.102,P=0.564)。在文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)分的亞組分析中,發(fā)現(xiàn)在文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)分小于10分組,rs266729的G等位基因與冠心病有明顯關(guān)聯(lián)(OR=1.318,95%CI：1.093-1.589,P=0.004),而在評(píng)分大于10分組不存在關(guān)聯(lián)(OR=1.019,95%CI：0.940-1.105,P=0.646)。rs2241766亞組分析：對基因型、研究對象、研究人群和文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)分進(jìn)行亞組分析。十一個(gè)研究明確指出他們的結(jié)局是冠心病。這些研究的結(jié)果顯示rs2241766的G等位基因與冠心病有統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)((OR=1.225,95%CI:1.022-1.468,P=0.028)。結(jié)果顯示其他研究的rs2241766突變也同樣與冠心病的發(fā)生存在關(guān)聯(lián)((OR=1.188,95%CI: 1.057-1.335,P=0.004)。在對基因型檢測方法的亞組分析中,本本文結(jié)果顯示,利用PCR-RFLP方法的研究和合并方法的研究均發(fā)現(xiàn)rs2241766的G等位基因與冠心病存在關(guān)聯(lián)(OR=0.68,95%CI:0.52-0.90,P=0.006; OR=1.201,95%CI:1.039-1.389, P=0.013),但是利用TaqMan檢測方法的研究中沒有發(fā)現(xiàn)關(guān)聯(lián)(OR=1.053,95%CI：0.905-1.225,P=0.504)。在正常人群和患病人群中均發(fā)現(xiàn)rs2241766的G等位基因與冠心病存在關(guān)聯(lián)(OR=1.159,95%CI：1.039-1.292, P=0.008; OR=1.336,95%CI:1.095-1.630,P=0.004)。在對rs2241766的多態(tài)性研究中包括歐洲、東亞、西亞和非洲人群,本文的研究結(jié)果顯示在東亞和西亞人群rs2241766的G等位基因與冠心病存在關(guān)聯(lián)(OR=1.203,95%CI：1.044-1.386,P=0.010；OR=1.591,95%CI：1.284-1.970,P=0.000),但是在歐洲和非洲人群不存在關(guān)聯(lián)(OR=1.066,95%CI：0.933-1.217,P=0.348；OR=1.757,95%CI：0.907-3.403,P=0.095)。在文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)分的亞組分析中,發(fā)現(xiàn)在文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)分小于10分組,rs2241766的G等位基因與冠心病存在關(guān)聯(lián)(OR=1.385,95%CI：1.182-1.624,P0.001),而在評(píng)分大于10分組不存在關(guān)聯(lián)(OR=1.028,95%CI：0.943-1.122,P=0.530)。rs1501299亞組分析：對基因型、研究對象、研究人群和文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)分進(jìn)行亞組分析。八個(gè)研究明確指出他們的結(jié)局是冠心病。這些研究的結(jié)果顯示的rs1501299的T等位基因與冠心病有統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(OR=0.860,95%CI:0.694-1.065,P=0.166)。結(jié)果顯示其他研究rs1501299的突變也同樣與冠心病存在關(guān)聯(lián)(OR=0.950,95%CI:0.886-1.017,P=0.142)。在基因型檢測方法的亞組分析中,任何一種測序方法都沒有發(fā)現(xiàn)rs1501299的T等位基因與冠心病存在關(guān)聯(lián)：PCR-RFLP(OR=0.913,95%CI:0.795-1.048,P=0.196),TaqMan方法(OR=0.960,95%CI:0.859-1.074,P=0.478)和其他的合并方法(OR=0.933,95%CI：0.838-1.039,P=0.209)。在病例組中,rs1501299的T等位基因與冠心病存在關(guān)聯(lián)(OR=0.845,95%CI：0.770-0.927,P0.001),而在對照組中未發(fā)現(xiàn)rs1501299與冠心病存在關(guān)聯(lián)(OR=0.976,95%CI:0.901-1.058,P=0.551)。rs1501299多態(tài)性研究的研究人群包括歐洲,東亞,西亞和非洲人群。本文的研究結(jié)果顯示,在歐洲,東亞,西亞和非洲人群中rs1501299的T等位基因與冠心病均不存在關(guān)聯(lián)(OR=0.944,95%CI:0.889-1.003,P=0.062；OR=0.950,95%CI:0.833-1.083,P=0.440;OR=0.819, 95%CI:0.573-1.171,P=0.275；OR=0.848,95%CI:0.629-1.143,P=0.278)。在文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)分的亞組分析中,本研究發(fā)現(xiàn)在文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)分小于10分組和評(píng)分大于10分組,rs1501299的T等位基因與冠心病均無關(guān)聯(lián)(OR=0.930,95%CI：0.831-1.041,P=0.209;OR=0.940,95%CI:0.868-1.018,P=0.130)。(結(jié)果圖表請見英文部分)2.AdipoQ單核苷酸多態(tài)性與冠心病之間的關(guān)聯(lián)采用病例-對照研究,在中國東北地區(qū)漢族人群中探討AdipoQ單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(rs3774261、rs1063537和rs2082940)與冠心病的關(guān)聯(lián),以及AdipoQ與環(huán)境因素(吸煙、飲酒、血脂等)的交互作用對冠心病的影響。本研究共招募研究對象1514名,為相互間無血緣關(guān)系的中國東北地區(qū)漢族人,包括754名冠心病患者和760名對照。病例來源于2011年9月至2012年11月期間吉林大學(xué)第一醫(yī)院和吉化總醫(yī)院心內(nèi)科確診的冠心病患者。由至少兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的心血管醫(yī)生完成冠心病的診斷,并通過冠脈造影進(jìn)一步確定診斷的結(jié)果。對照來源于同期吉林大學(xué)第一醫(yī)院和吉化總醫(yī)院的體檢者。對照為與病例性別、年齡相匹配的,心電圖正常、無冠心病臨床癥狀和體征者。在病例組中,男性404例,女性350例,對照組中有男性378例,女性382例,兩組間性別分布的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.14)；病例組的平均年齡為63.12±8.05,對照組的平均年齡為63.10±8.37,兩組的平均年齡的差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.96),說明病例組與對照組的年齡和性別相匹配。與對照組相比,冠心病組的TC,TG和LDL-C水平較高,HDL-C水平較低。與對照組相比,冠心病組有更多的吸煙和飲酒者(飲酒：14.2% vs.7.2%,吸煙：50.1% vs.11.6%)。本文的結(jié)果顯示吸煙和飲酒與冠心病存在關(guān)聯(lián),為冠心病的危險(xiǎn)因素(OR=7.677,95%CI:5.895-9.997, P0.001; OR=2.120,95%CI:1.505-2.985, P0.001)�；蛐虳NA樣本由754例冠心病患者和760例對照組成。位點(diǎn)rs3774261、位點(diǎn)rs1063537和位點(diǎn)rs2082940的檢出率分別是98.88%,99.01%和98.88%。病例組和對照組在rs3774261位點(diǎn)的基因型分布和等位基因頻率上差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=24.75, P0.001; χ2=21.33, P0.001)。在rs2082940位點(diǎn),病例組與對照組間基因型分布的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.36,P=0.04)；而兩組間等位基因頻率的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.34,P=0.562)。對于rs1063537位點(diǎn)來說,病例組和對照組的基因型分布和等位基因頻率上的差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.60, P=0.27;χ2=2.01, P=0.16)。顯性模型下,攜帶rs3774261位點(diǎn)G等位基因的研究對象患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)較高(OR=1.74,95%CI：1.39-2.18,P0.001),攜帶rs2082940位點(diǎn)T等位基因的研究對象患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)較低(OR=0.80,95%CI:0.66-0.99, P=0.035), rs1063537位點(diǎn)C等位基因與冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)聯(lián)(OR=0.85,95%CI：0.69-1.04,P=0.110),提示AdipoQ對冠心病可能既存在保護(hù)作用,又可能是其危險(xiǎn)因素,如在本研究中,rs3774261位點(diǎn)G等位基因可能是冠心病的危險(xiǎn)因素,rs2082940位點(diǎn)的T等位基因可能是冠心病的保護(hù)因素。Lacquemant等研究表明AdipoQ rs224166突變增加糖尿病病人患冠心病的風(fēng)險(xiǎn),而Bacci等研究發(fā)現(xiàn)AdipoQ rs1501299突變與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)降低有關(guān),這些研究也表明AdipoQ在冠心病發(fā)生發(fā)展可能發(fā)揮雙重作用,與本文的研究結(jié)果相一致。本研究單體型分析的結(jié)果顯示,在冠心病患者中,AdipoQ基因多態(tài)性位點(diǎn)rs3774261、rs1063537、rs2082940組成的單體型共有GCC、ATT、ACC三種；在對照組中,AdiooQ基因多態(tài)性位點(diǎn)rs3774261、rs1063537、rs2082940組成的單體型主要有GCC、ATT、ACC、ACT四種,上述四種單體型頻率之和為99.19%。在本研究中,僅在對照組中發(fā)現(xiàn)ACT單體型,頻率為1.99%。與冠心病組相比,ATT單體型和ACC單體型在對照組中頻率較大。攜帶單體型ATT的研究對象患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶單體型GCC的0.78倍(OR=0.78,95%CI：0.65-0.93,P=0.0068)；攜帶單體型ACC的研究對象患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶單體型GCC的0.74倍(OR=0.74,95%CI:0.62-0.88, P0.001)。在對照組中,AdipoQ的4個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)不同基因型間,TG水平、TC水平、LDL-C水平和HDL-C水平的差異均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。基因和環(huán)境因素均影響心血管疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),此外,研究表明心血管疾病的遺傳風(fēng)險(xiǎn)受到特定環(huán)境因素的調(diào)節(jié),即基因與環(huán)境因素之間存在交互作用。在本研究的基因和環(huán)境的交互作用分析中,結(jié)果顯示,HDL-C水平分別與AdipoQ rs1063537位點(diǎn)(P=0.034)和rs2082940位點(diǎn)存在交互作用(P=0.033),未發(fā)現(xiàn)HDL-C水平與rs3774261位點(diǎn)存在交互作用(P=0.708),說明環(huán)境因素在冠心病發(fā)生發(fā)展中的起到重要的作用。在本次研究中,未發(fā)現(xiàn)AdipoQ單核苷酸多態(tài)性與其他環(huán)境因素(吸煙,飲酒,TG, LDL-C和FBG)之間存在交互作用(P0.05)。(結(jié)果圖表請見英文部分)3.血漿脂聯(lián)素水平本部分研究對象共包括83例冠心病患者和81例對照者,每人采集3ml的血液樣本。應(yīng)用Abcam貿(mào)易有限公司生產(chǎn)的人類脂聯(lián)素ELISA試劑盒檢測研究對象血漿脂聯(lián)素水平分析性別、年齡、冠心病和AdipoQ基因多態(tài)性對血漿脂聯(lián)素水平的影響。研究結(jié)果顯示,未發(fā)現(xiàn)性別和年齡對血漿脂聯(lián)素水平有影響(性別：P=0.991；年齡：P=0.447),提示在本研究中性別和年齡對血漿脂聯(lián)素水平可能無影響。而既往有研究表明女性血漿脂聯(lián)素水平高于男性,與本研究結(jié)果不一致,需要擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證分析。冠心病患者的血漿脂聯(lián)素水平低于對照者(病例組：7.70±4.96,對照組：12.85±3.98,P0.001),提示在北方漢族人群中,冠心病患者血漿脂聯(lián)素水平與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)關(guān)聯(lián)。采用協(xié)方差分析方法分別在冠心病組、對照組和所有研究對象中分析AdipoQ基因三個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)(-3774261、rs1063537和rs2082940)對血漿脂聯(lián)素水平的影響,結(jié)果顯示各個(gè)基因型間的脂聯(lián)素水平差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示AdipoQ基因多態(tài)性對血漿脂聯(lián)素水平無影響。該結(jié)果與Apalasamy等在馬來西亞人群中的研究結(jié)果相一致,但另有其他研究顯示AdipoQ基因多態(tài)性可影響血漿脂聯(lián)素水平,與本文的結(jié)果不一致,這可能與本研究的樣本量較小有關(guān)。4. MicroRNA靶基因預(yù)測目前對于AdipoQ基因變異與脂聯(lián)素水平之間的關(guān)聯(lián)仍存在爭議,現(xiàn)有研究結(jié)果也未能解釋冠心病患者血漿脂聯(lián)素水平降低的原因。由于miRNA能與AdipoQ基因的3'UTR區(qū)域互補(bǔ)結(jié)合,調(diào)控基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄后過程,進(jìn)而抑制脂聯(lián)素蛋白的翻譯,因此本研究檢索了3個(gè)生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(miRGator、miRDB和 RegRNA 2.0),進(jìn)而預(yù)測能與AdipoQ基因及其3個(gè)SNP位點(diǎn)靶向結(jié)合的miRNAs。通過檢索miRGator數(shù)據(jù)庫,僅發(fā)現(xiàn)一種miRNA (hsa-miR-199a-star)能與AdipoQ基因靶向結(jié)合。進(jìn)一步檢索顯示,除了AdipoQ基因之外,hsa-miR-199a還能與另外612個(gè)基因的mRNA相結(jié)合,但hsa-miR-199a與大多數(shù)靶基因mRNA的結(jié)合強(qiáng)度較弱。在miRDB數(shù)據(jù)庫中,本研究預(yù)測發(fā)現(xiàn)有62個(gè)miRNAs能夠靶向結(jié)合AdipoQ基因,同時(shí)發(fā)現(xiàn)分別有20、36和41個(gè)miRNAs能夠靶向結(jié)合AdipoQ基因的rs3774261、rs1063537和rs2082940位點(diǎn),在預(yù)測出的41個(gè)與AdipoQ基因3'UTR處rs2082940位點(diǎn)靶向結(jié)合的miRNAs中,得分最高的2個(gè)miRNAs為hsa-miR-4657和hsa-miR-4491。以上結(jié)果與L agana等人的研究結(jié)論相一致,提示單個(gè)miRNA通過與目標(biāo)mRNA的部分序列互補(bǔ)結(jié)合的方式來調(diào)控不同基因的轉(zhuǎn)錄過程,而且多個(gè)miRNAs也能共同調(diào)節(jié)單個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄過程。因此,能與AdipoQ基因靶向結(jié)合的miRNAs同時(shí)也能調(diào)控其他基因的表達(dá),如本研究中預(yù)測的hsa-miR-199a也可靶向調(diào)節(jié)SPARCLl和ACTA2基因,進(jìn)而影響多種疾病的發(fā)展過程。本研究利用RegNA數(shù)據(jù)庫來識(shí)另AdipoQ-miRNA結(jié)合的結(jié)構(gòu)模體,將rs3774261、rs1063537和rs2082940位點(diǎn)的序列信息輸入該數(shù)據(jù)庫后進(jìn)行檢索。檢索結(jié)果發(fā)現(xiàn)與AdipoQ基因rs3774261位點(diǎn)互補(bǔ)結(jié)合的miRNAs有hsa-miR-4655-3p(caccgtggacctgatgaagaa)和hsa-miR-323b-5p(aatgtactcaccgtggacctgat),沒有檢索到與AdipoQ基因rs1063537和rs2082940位點(diǎn)靶向結(jié)合的1niRNAs。(結(jié)果圖表請見英文部分)四、結(jié)論1.本研究的meta分析結(jié)果表明,rs266729和rs2241766的G等位基因是冠心病的易感基因,而rs1501299的T等位基因與冠心病無關(guān)聯(lián)。在冠心病與rs2241766的關(guān)聯(lián)性研究中存在異質(zhì)性和發(fā)表偏倚。2.在東北地區(qū)漢族人群中,對AdipoQ基因的三種變異(rs3774261、rs1063537和rs2082940)與冠心病的關(guān)聯(lián)進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)AdipoQ基因的單核苷酸多態(tài)性對冠心病的發(fā)病可能具有雙重作用,即攜帶rs2082940位點(diǎn)的T等位基因是冠心病的保護(hù)性因素,攜帶rs3774261位點(diǎn)的G等位基因是冠心病的危險(xiǎn)因素。3.在東北地區(qū)漢族人群中冠心病患者血漿脂聯(lián)素水平與冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)關(guān)聯(lián)。4.通過檢索生物信息數(shù)據(jù)庫,針對rs3774261、rs1063537和rs2082940三個(gè)位點(diǎn),預(yù)測了多個(gè)與AdipoQ結(jié)合的miRNAs,識(shí)別出AdipoQ-miRNA結(jié)合的結(jié)構(gòu)模體,并發(fā)現(xiàn)hsa-miR-4657和hsa-miR-4491可與AdipoQ 3'UTR的rs2082940結(jié)合。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R541.4
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本文編號(hào)：1673448