發(fā)布時(shí)間：2018-03-25 00:15

  本文選題：miRNA　切入點(diǎn)：心室肥厚　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：高血壓病不僅是一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題,而且還是心血管疾病非常重要的危險(xiǎn)因素,關(guān)系到近一半的心血管疾病的死亡率。它還是心力衰竭,包括舒張性和收縮性心衰的強(qiáng)大的風(fēng)險(xiǎn)因素。更為重要的是,規(guī)范化進(jìn)行高血壓的治療可以有效預(yù)防其并發(fā)癥的發(fā)生。我們稱繼發(fā)于高血壓的復(fù)雜而多樣的心臟結(jié)構(gòu)和功能的改變?yōu)楦哐獕盒孕呐K病。主要表現(xiàn)為左心室肥厚、左心房增大,左心室收縮舒張功能降低,而這些病理改變也是心衰和房顫的風(fēng)險(xiǎn)因素。特別是左室肥厚,是高血壓性心臟病的特征性改變。左室肥厚的發(fā)病機(jī)制是多因素的。對(duì)于異常的負(fù)荷條件,尤其是長(zhǎng)期過高的后負(fù)荷作用,左室肥厚可以在一定限度下維持正常的室壁壓力和力學(xué)性能。左室肥厚是高血壓病明確的預(yù)后標(biāo)志物,與高血壓患者整體心血管病風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)。除了左室質(zhì)量,左室結(jié)構(gòu)和幾何形狀的評(píng)估也對(duì)高血壓心臟損害提供了更多的信息。50年前,Linzbach曾指出心室形態(tài)的特殊改變都是為了適應(yīng)血流動(dòng)力學(xué)變化的。左室肥厚主要表現(xiàn)為心肌細(xì)胞肥大和心肌細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)。細(xì)胞外基質(zhì)中膠原成分占85%,主要是I型和III型膠原。而膠原的合成和降解分別受膠原基因mRNA的轉(zhuǎn)錄和各種基質(zhì)金屬蛋白酶(matix metallo protein-ases,MMPs)的調(diào)節(jié)。有研究報(bào)道MMP-9在左室重構(gòu)的過程中,其濃度與左室舒張末容積正相關(guān),與左室射血分?jǐn)?shù)負(fù)相關(guān)。提示MMP-9能夠反映左室重構(gòu)的程度。β肌球蛋白重鏈(β-myosin heavy chain,β-MHC)是由Myh7基因編碼的一種慢反應(yīng)ATP酶,該基因主要表達(dá)在胎兒時(shí)期,出生后被抑制。當(dāng)心臟負(fù)荷增加時(shí),β-MHC的表達(dá)將增加,同時(shí)會(huì)伴隨心功能的降低。甚至在心臟疾病的發(fā)展過程中成為主要的表達(dá)形式。有研究表明,微小RNA-208a(microRNA-208a,miRNA-208a)之所以能夠引起心肌肥厚,與mi RNA-208a導(dǎo)致的β-MHC過表達(dá)與心肌纖維化有關(guān)。另有研究顯示,相較于健康人群,血漿心房利鈉肽(atrial natriuretic peptide,ANP)水平在高血壓患者中顯著增高,而且高血壓伴心肌肥厚的患者血漿anp水平又顯著高于不伴有心肌肥厚患者,因此血漿anp的含量可以作為判斷左室肥大的參考指標(biāo)。mirnas是一類非編碼的,約包含22個(gè)核苷酸的小rna,在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。通常通過與mrna的3’非編碼區(qū)(3’un-translatedregions,3’-utr)以不完全的堿基互補(bǔ)結(jié)合方式,抑制翻譯或降解mrna,其確切機(jī)制尚不清楚。mirna的一個(gè)關(guān)鍵的特征是一個(gè)mirna可以調(diào)控多個(gè)基因,一個(gè)基因也可以被多個(gè)mirnas調(diào)控。因此,mirnas提供了一個(gè)復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),控制著從基礎(chǔ)的生理病理進(jìn)程到廣泛的心血管疾病,包括高血壓病。心肌肥厚的發(fā)生發(fā)展伴隨著大量mirnas的異常表達(dá)。近幾年,已經(jīng)有系列研究報(bào)道這些異常表達(dá)的mirnas。sayed、curcio等研究發(fā)現(xiàn),mirna-1、mirna-133在心肌肥厚模型中表達(dá)下調(diào)。過表達(dá)mirna-133能夠抑制由內(nèi)皮素-1或苯腎上腺素刺激引起的蛋白合成和心肌細(xì)胞肥大,同時(shí)能夠抑制心肌肥厚基因如anp、β-mhc的表達(dá)。mirna-29家族包括了mirna-29a、mirna-29b和mirna-29c,mirna-29家族在多種器官的纖維化過程發(fā)揮了重要的作用。研究顯示轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子因子β(tgfβ)/smad信號(hào)通路通過調(diào)節(jié)mirna-29家族,調(diào)節(jié)mmps的表達(dá),促進(jìn)腎臟纖維化。mirna-29a-3p參與了系統(tǒng)性硬化,mirna-29a-3p可以調(diào)節(jié)膠原的合成。抑制mirna-29可以促進(jìn)膠原的合成和腎臟纖維化。血清mirna-29a-3p水平在肝纖維化患者中下降,過表達(dá)mirna-29b可以降低膠原的合成。過表達(dá)mirna-29b可以增加血管緊張素ii誘導(dǎo)的心肌纖維化,而血管緊張素ii誘導(dǎo)的心室纖維化與mirna-29a-3p和mirna-29c的表達(dá)水平下降有關(guān)。新近的研究顯示mirna-29a-3p與肥厚性心肌病有關(guān),血漿mirna-29a-3p水平與肥厚性心肌病患者超聲心動(dòng)圖和心臟磁共振所測(cè)的心臟肥厚和纖維化指標(biāo)相關(guān),提示了mirna-29a-3p可能與心室肥厚和纖維化有關(guān)。本研究旨在通過iontorrent半導(dǎo)體高通量測(cè)序技術(shù)和sybrgreeni實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction,pcr)技術(shù),檢測(cè)高血壓左室肥厚患者、單純高血壓患者和健康對(duì)照者血漿mirnas的表達(dá)譜,篩選高血壓左室肥厚患者血漿中差異表達(dá)的mirnas分子,比較并證實(shí)候選mirna-29a-3p分子屬于差異表達(dá)顯著的mirnas分子之一,同時(shí)對(duì)mirna-29a-3p進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)和基因功能分析。進(jìn)而對(duì)mirna-29a-3p與mmp-9、i型和iii型膠原進(jìn)行相關(guān)性研究,揭示mirna-29a-3p與高血壓左室肥厚心肌纖維化的關(guān)系。最后通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn),運(yùn)用westernblot方法,揭示抑制mirna-29a-3p表達(dá)能夠抑制anp和β-mhc蛋白水平的升高,改善心肌肥厚的程度。本研究技術(shù)路線:收集高血壓左室肥厚患者、單純高血壓患者和健康對(duì)照者三組人群的血漿樣本。構(gòu)建3個(gè)血漿樣本庫(kù),進(jìn)行高通量測(cè)序,獲得三組人群的mirnas表達(dá)譜,篩選出高血壓左室肥厚患者差異表達(dá)的mirnas分子。比較并證實(shí)候選mirna-29a-3p分子屬于我們篩選出來的差異表達(dá)顯著的mirna分子之一,然后對(duì)mirna-29a-3p進(jìn)行基因功能分析,包括靶基因預(yù)測(cè),基因功能分析(geneontologyanalysis,go-analysis)和信號(hào)通路分析(pathwayanalysis)。其次,運(yùn)用sybrgreeni實(shí)時(shí)熒光pcr技術(shù),在上述三組大規(guī)模人群驗(yàn)證并測(cè)取mirna-29a-3p相對(duì)表達(dá)量,與心肌纖維化指標(biāo)mmp-9、i型和iii型膠原做相關(guān)性分析。最后通過小鼠主動(dòng)脈弓縮窄(transverseaorticconstriction,tac)術(shù),獲得壓力負(fù)荷所致左室肥厚的動(dòng)物模型,運(yùn)用免疫印跡(westernblot)方法,揭示抑制mirna-29a-3p的表達(dá)可以抑制心室肥厚指標(biāo)anp和β-mhc蛋白水平的升高,為高血壓左室肥厚和重塑的治療提供新的分子靶點(diǎn)。第一部分高血壓左室肥厚患者循環(huán)mirnas表達(dá)譜分析及mirna-29a-3p基因功能分析目的:篩選高血壓左室肥厚患者血漿中差異表達(dá)的mirna分子并對(duì)mirna-29a-3p進(jìn)行基因功能分析方法:1選取高血壓左室肥厚患者、單純高血壓患者及健康對(duì)照三組人群各20名,制備成3個(gè)血漿庫(kù)樣本。應(yīng)用iontorrent半導(dǎo)體高通量測(cè)序技術(shù),檢測(cè)三組研究對(duì)象的mirnas表達(dá)譜,并篩選差異表達(dá)的mirnas分子。對(duì)候選mirna-29a-3p進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)、go分析和pathway分析。2實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用spss13.0(spss公司,加工,芝加哥,美國(guó))統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。主要統(tǒng)計(jì)指標(biāo)均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn),計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用snk檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以例(%)表示,組間對(duì)比行χ2檢驗(yàn),率的兩兩比較采用scheffe法。檢驗(yàn)水平α=0.05,以p0.05表示組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3運(yùn)用fast-qc軟件對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)的質(zhì)量進(jìn)行整體評(píng)估;采用差異表達(dá)基因的rna-seq的數(shù)據(jù)(identifydifferentiallyexpressedgenesfromrna-seqdata,degseq)算法對(duì)mirnas?標(biāo)準(zhǔn)化后的基因表達(dá)量(transcriptspermillionreads,tpm)值進(jìn)行差異篩選,其中倍性變化(foldchange)1.5或0.667,p值0.05,誤判率(fdr)0.05為顯著性差異mirnas。以國(guó)際公認(rèn)的mirna靶基因預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)mirnabase與targetscan結(jié)合,預(yù)測(cè)出mirna-29a-3p調(diào)控的所有靶基因。首先基于數(shù)據(jù)庫(kù)將靶基因進(jìn)行g(shù)o注釋,得到基因所參與的所有g(shù)o,同時(shí)采用fisher檢驗(yàn)計(jì)算得到每個(gè)go的顯著性水平(p-value),然后校正多重假設(shè)檢驗(yàn)的結(jié)果并獲得fdr,最終篩選出靶基因富集的顯著性go。其次基于kegg數(shù)據(jù)庫(kù),對(duì)靶基因進(jìn)行pathway注釋,獲得基因參與的所有pathway,使用基于超幾何分布(hypergeometricdistribution)的fisher檢驗(yàn)計(jì)算每個(gè)pathway的顯著性水平(p-value),校正多重假設(shè)檢驗(yàn)的結(jié)果并獲得fdr,從而篩選出靶基因所體現(xiàn)的顯著性pathway。結(jié)果:1研究對(duì)象一般情況:高血壓左室肥厚組病例的平均年齡在63.50±6.03歲,其中男性13人(65.0%),女性7人(35.0%);高血壓組病例的平均年齡在64.50±8.10歲,其中男性12人(60.0%),女性8人(40.0%);健康對(duì)照組對(duì)象平均年齡在65.80±7.68歲,其中男性13人(65.0%),女性7人(35.0%),三組人群在年齡、性別、吸煙狀態(tài)、空腹血糖情況及體重指數(shù)(bmi)分布無顯著性差異(p0.05);在血壓,包括收縮壓(sbp)和舒張壓(dbp)和高血壓病程方面,同對(duì)照組比較,高血壓組與高血壓合并左室肥厚組具有顯著性差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),但兩組間比較差異不顯著無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);在lvmi方面,三組間兩兩比較,差異顯著(p0.01),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述資料表明研究結(jié)果具有可對(duì)比性;2三組研究對(duì)象的iontorrent半導(dǎo)體高通量測(cè)序結(jié)果:為表述方便,下文及圖表中以s1為健康對(duì)照樣本,s2為高血壓疾病對(duì)照樣本,s3為高血壓左室肥厚疾病樣本。2.1差異表達(dá)分析:按照方案設(shè)計(jì),將s2vss1,s3vss1,s3vss2進(jìn)行差異mirnas篩選。采用degseq算法對(duì)313個(gè)mirna的tpm值進(jìn)行差異篩選,其中foldchange1.5或0.667,p-value0.05,fdr0.05為顯著性差異mirna。s2vss1共有59個(gè)差異表達(dá)的mirnas,其中表達(dá)上調(diào)的28個(gè),表達(dá)下調(diào)的31個(gè);s3vss1共有87個(gè)差異表達(dá)的mirnas,其中表達(dá)上調(diào)的66個(gè),表達(dá)下調(diào)的21個(gè);s3vss2共有75個(gè)差異表的mirnas,其中表達(dá)上調(diào)的55個(gè),表達(dá)下調(diào)的20個(gè);2.2mirna-29a-3p差異表達(dá)譜的結(jié)果:mirna-29a-3p在s2vss1中,表達(dá)有差異,但不顯著,foldchange為1.253332;在s3vss1中,差異顯著,foldchange為2.6910523;在s3vss2中,差異顯著,foldchange為2.147118894。表明mirna-29a-3p水平與高血壓所致的左室肥厚存在相關(guān)性;3mirna-29a-3p靶基因分析:3.1mirna-29a-3p靶基因預(yù)測(cè)結(jié)果:將mirna-29a-3p與國(guó)際公認(rèn)mirna靶基因預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)mirnabase與targetscan結(jié)合,我們共得到884個(gè)靶基因,score為mirna-29a-3p與其靶基因的結(jié)合分值,分值越高,靶基因預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性越高;3.2靶基因功能分析結(jié)果,我們將上述得到的靶基因基于數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行g(shù)o注釋,通過基因功能分析,得到顯著影響的go及其包含的基因。并且從三個(gè)層面進(jìn)行分析,分別為:生化進(jìn)程(biologicalprocess,bp);分子功能(molecularfunction,mf);細(xì)胞組成(cellularcomponent,cc)。其中g(shù)o顯著性最高的前5個(gè)為細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrixorganization,ecm)、膠原分解代謝進(jìn)程(collagencatabolicprocess)、細(xì)胞外基質(zhì)分解(extracellularmatrixdisassembly)、細(xì)胞質(zhì)膜黏附分子介導(dǎo)的同源細(xì)胞黏附(homophiliccelladhesionviaplasmamembraneadhesionmolecules)、膠原纖維合成(collagenfibrilorganization),其-log2p值分別為:19.42798892、18.94812724、17.45448077、16.10443753、13.84480546;3.3信號(hào)通路分析結(jié)果:pathway-analysis是基于基因注釋數(shù)據(jù)庫(kù),檢測(cè)差異基因顯著pathway的手段。我們以mirna-29a-3p的靶基因?yàn)檠芯繉?duì)象,通過基因信號(hào)通路分析,得到顯著影響的pathway及其包含的基因。其中顯著性pathway前5個(gè)為蛋白質(zhì)分解吸收(proteindigestionandabsorption)、細(xì)胞外基質(zhì)受體相互作用(ecm-receptorinteraction)、pi3k-akt信號(hào)通路(pi3k-aktsignalingpathway)、黏著斑(focaladhesion)、小細(xì)胞肺癌(smallcelllungcancer),其-log2p值分別為:23.17177941、21.10576753、20.66932209、20.28737691、15.27204612。第二部分mirna-29a-3p水平與高血壓左室肥厚患者心肌纖維化的相關(guān)性分析目的:探討高血壓伴左室肥厚患者mirna-29a-3p的水平與心肌纖維化程度的相關(guān)性。方法:1選取高血壓合并左室肥厚患者,單純高血壓患者以及健康對(duì)照者三組為人群為研究對(duì)象,應(yīng)用sybrgreeni實(shí)時(shí)熒光pcr技術(shù)檢測(cè)血漿中mirna-29a-3p水平;雙抗體酶聯(lián)免疫吸附(elisa)法測(cè)定血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9(mmp-9)、i和iii型膠原標(biāo)志物:i型膠原氨基端肽(propeptideoftypeiprocollagen,pinp)和iii型膠原氨基端肽(propeptideoftypeiiiprocollagen,piiinp)水平。2實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用spss13.0軟件包(spss公司,加工,芝加哥,美國(guó))進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。主要統(tǒng)計(jì)指標(biāo)均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn),計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用snk檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以例(%)表示,組間對(duì)比行χ2檢驗(yàn),率的兩兩比較采用scheffe法。檢驗(yàn)水平α=0.05,以p0.05表示組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)分析采用person法。差異顯著性水平定義為p0.05。結(jié)果:1研究人群基本特征:本部分實(shí)驗(yàn)共入選高血壓左室肥厚患者70名,其中男性39名(55.7%)女性31名(44.3%);入選高血壓患者80名,男性42名(52.5%)女性38名(47.5%);健康對(duì)照者50名,其中男性28名(56.0%)女性22名(44.0%)。三組間平均年齡分別為:61.50±8.03歲;63.20±8.20歲和62.01±7.80歲。基本特征:性別、年齡、吸煙、空腹血糖、bmi等指標(biāo)在三組間比較未見顯著性差異(p0.05);但在血壓,包括sbp和dbp和高血壓病程方面,同對(duì)照組比較,高血壓組與高血壓合并左室肥厚組均差異顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),但高血壓組與高血壓合并左室肥厚組兩組間比較差異不顯著無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);在lvmi方面,三組間兩兩比較,差異顯著(p0.01),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;2三組研究對(duì)象血清mirna-29a-3p相對(duì)表達(dá)量如下:對(duì)照組1.72±0.79;高血壓組3.52±1.21;高血壓合并左室肥厚組5.37±1.56。與健康對(duì)照組比較,高血壓和高血壓合并左室肥厚組患者血清mirna-29a-3p水平均明顯升高,而高血壓合并左室肥厚組患者血清mirna-29a-3p水平高于單純高血壓組患者,統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義,p0.05。3三組研究對(duì)象血清心肌纖維化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果顯示比較對(duì)照組,高血壓和高血壓合并心室肥厚的患者血清pinp、piiinp和mmp-9水平均明顯升高,統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義,p0.05;高血壓合并心室肥厚患者血清pinp、piiinp和mmp-9水平高于單純高血壓患者,統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義,p0.05;4血清mirna-29a-3p與心肌纖維化項(xiàng)指標(biāo)mmp-9、pinp和piiinp的相關(guān)性分析,結(jié)果顯示了mirna-29a-3p表達(dá)水平與血清pinp、piiinp和mmp-9水平呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為0.58、0.45和0.66,統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義,p0.05。第三部分抑制mirna-29a-3p改善小鼠壓力負(fù)荷所致的左室肥厚與心肌纖維化目的:抑制mirna-29a-3p改善壓力負(fù)荷所致的左室肥厚與心肌纖維化方法:1納入11-12周齡c57bl/6雄性小鼠,體重約25g,共60只,隨機(jī)分為2組:假手術(shù)組20只和主動(dòng)脈弓縮窄(tac)手術(shù)組40只,tac組小鼠在術(shù)后7d隨機(jī)給予antagomirna陰性對(duì)照或antago-mirna-29a-3p腹腔注射3次,分為tac+antagomirna陰性對(duì)照組20只,tac+antagomirna-29a-3p組20只,術(shù)后4周he染色檢測(cè)心肌細(xì)胞橫截面面積;masson染色檢測(cè)心肌纖維化面積;westernblot檢測(cè)anp和β-mhc蛋白表達(dá)水平。2實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用spss13.0軟件包(spss公司,加工,芝加哥,美國(guó))進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。主要統(tǒng)計(jì)指標(biāo)均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn),計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用snk檢驗(yàn);差異顯著性水平定義為p0.05。結(jié)果:1三組小鼠超聲檢測(cè)結(jié)果:三組小鼠在建模前測(cè)得的左室舒張末內(nèi)徑(leftventricularinternaldiastolicdiameter,lvids)、左室收縮末內(nèi)徑(leftventricularinternalsystolicdiameter,lvids)、左室舒張末期后壁厚度(leftventricularposteriorwalldiameter,lvpwd)和計(jì)算出的左室短軸縮短率(leftventricularfractionalshortening,lvfs)無顯著性差別,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p0.05。建模后4周得到的上述四項(xiàng)指標(biāo)與建模前指標(biāo)進(jìn)行組內(nèi)比較,除假手術(shù)組外,tac+antogomirna陰性對(duì)照組和tac+antagomirna-29a-3p組均有顯著性差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p0.01。建模4周后,與假手術(shù)組比較,tac+antogomirna陰性對(duì)照組和tac+antagomirna-29a-3p組在lvidd、lvids、lvpwd和lvfs指標(biāo)上均有顯著性差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p0.01;tac+antogomirna陰性對(duì)照組與tac+antagomirna-29a-3p組比較,上述四項(xiàng)指標(biāo)有顯著性差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p0.01;2小鼠左室心肌組織病理學(xué)檢測(cè):2.1經(jīng)he染色,心肌細(xì)胞橫截面積進(jìn)行測(cè)量分析結(jié)果顯示:與假手術(shù)組比較,tac+antogomirna陰性對(duì)照小鼠及tac+antogomirna-29a-3p小鼠左心室心肌細(xì)胞呈現(xiàn)肥大表現(xiàn),心肌間質(zhì)也有不同程度的增多。其中tac+antogomirna陰性對(duì)照小鼠表現(xiàn)最為明顯,tac+antogo-mirna-29a-3p小鼠心肌細(xì)胞肥大程度及間質(zhì)增生程度表現(xiàn)介于假手術(shù)組和tac+antogomirna陰性對(duì)照之間。三組間比較差異顯著,p0.05;2.2masson染色結(jié)果顯示,假手術(shù)組小鼠的心肌細(xì)胞呈現(xiàn)紫紅色或者紅色,形態(tài)規(guī)整,其間排列少量呈現(xiàn)藍(lán)色的膠原纖維。tac+antogomirna陰性對(duì)照小鼠及tac+antogomirna-29a-3p小鼠左心室心肌纖維排列紊亂,而且有部分?jǐn)嗔?藍(lán)色膠原纖維增多明顯,其中tac+antogomirna-29a-3p組纖維增生程度少于tac+antogomirna陰性對(duì)照組。三組間比較差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p0.05。心肌纖維化面積結(jié)果見;3免疫印跡結(jié)果顯示:對(duì)比假手術(shù)組,tac小鼠心肌組織反映心肌肥大的anp和β-mhc蛋白表達(dá)水平明顯升高,而antagomirna-29a-3p可以抑制anp和β-mhc蛋白水平的升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p0.05,提示antagomirna-29a-3p可以抑制tac誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大。結(jié)論:1通過iontorrent半導(dǎo)體高通量測(cè)序技術(shù),獲得健康對(duì)照組、高血壓組及高血壓左室肥厚組的血漿循環(huán)mirnas表達(dá)譜。2將對(duì)照組、高血壓組及高血壓左室肥厚組的循環(huán)mirnas兩兩比對(duì)采用degseq算法對(duì)tpm值進(jìn)行差異篩選,獲得顯著差異表達(dá)的mirnas。3對(duì)mirna-29a-3p進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè),并對(duì)其靶基因進(jìn)行g(shù)o分析獲得顯著影響的基因功能及其包含的主要基因;通過對(duì)mirna-29a-3p的keggpathway分析,獲得mirna-29a-3p可能參與的主要信號(hào)通路及相關(guān)靶基因。4高血壓左室肥厚患者mirna-29a-3p水平及血清pinp、piiinp和mmp-9水平明顯高于健康對(duì)照組,亦高于單純高血壓組。5高血壓左室肥厚的患者mirna-29a-3p表達(dá)水平與血清pinp、piiinp和mmp-9水平呈正相關(guān),血清mirna-29a-3p有可能成為心室肥厚和纖維化的生物學(xué)標(biāo)記物,評(píng)估療效和預(yù)后。6antagomirna-29a-3p能夠在一定程度上改善壓力負(fù)荷所致的心室腔增大和心功能的惡化。7antagomirna-29a-3p可以抑制tac誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大和心肌纖維化,可以抑制心室肥厚指標(biāo)anp和β-mhc蛋白水平的升高。8mirna-29a-3p有可能成為高血壓心室肥厚和重塑的治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R544.1
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本文編號(hào)：1660683