本文選題：體外心臟震波　切入點(diǎn)：動(dòng)脈生成　出處：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：[背景]缺血性心臟病(IHD)嚴(yán)重危害全球公眾健康。建立冠脈側(cè)支循環(huán)、改善心肌微循環(huán)是減輕心肌缺血的關(guān)鍵環(huán)節(jié),但目前臨床缺乏有效干預(yù)手段。我們的前期研究發(fā)現(xiàn),體外心臟震波療法(CSWT)從體表導(dǎo)入低能量震波脈沖,可在心肌組織中形成空穴效應(yīng),對(duì)組織和細(xì)胞產(chǎn)生剪切力作用,促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞多種生長(zhǎng)因子表達(dá)上調(diào),誘導(dǎo)缺血心肌局部血管新生；同時(shí),CSWT可改善IHD患者的心肌灌注和心肌代謝,能改善模型動(dòng)物的冠脈側(cè)支循環(huán)。然而,單純的血管新生對(duì)恢復(fù)缺血組織有效血液灌注的作用有限。當(dāng)冠脈微血管通過(guò)動(dòng)脈生成進(jìn)行管腔改建,形成有功能的側(cè)支循環(huán),才能有效改善缺血心肌的組織灌注。目前,CSWT能否誘導(dǎo)冠脈微血管動(dòng)脈生成、促進(jìn)有效側(cè)支循環(huán)建立及其相關(guān)的分子機(jī)制并未明確。[目的]對(duì)SD大鼠急性心肌梗死模型實(shí)施經(jīng)胸震波干預(yù),探討CSWT剪切力對(duì)梗死周?chē)募」诿}微血管的動(dòng)脈生成有無(wú)誘導(dǎo)作用及其可能的分子機(jī)制,為深入了解CSWT的顯效機(jī)制、探索冠心病治療新策略和新方法提供科學(xué)依據(jù)。[方法]①隨機(jī)入選55只成年雄性SD大鼠,手術(shù)開(kāi)胸、高位結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支,建立SD大鼠急性心肌梗死模型。術(shù)前及術(shù)后采用高頻超聲心動(dòng)圖評(píng)價(jià)大鼠心功能,TTC染色測(cè)定心肌缺血面積,評(píng)價(jià)建模成功率和平行性。②另入選70只成年雄性SD大鼠,隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham組10例)、心肌梗死組(AMI組30例)和心臟震波干預(yù)組(CSWT組30例)。AMI組和CSWT組先建立急性心肌梗死模型。Sham組除不結(jié)扎冠脈外,其余操作同另兩組。真假手術(shù)后,所有大鼠均常規(guī)飼喂。CSWT組實(shí)施心臟震波干預(yù)：震波能量0.24mJ/mm2,每次200脈沖,頻率60次/min每周3天,每天1次,共4周。③CSWT干預(yù)4周后,采用高頻超聲心動(dòng)圖評(píng)價(jià)大鼠心功能；摘取左室心肌行組織切片免疫熒光染色,激光共聚焦顯微鏡觀察冠脈微血管動(dòng)脈生成情況；TUNEL及Western blotting方法觀察心肌細(xì)胞凋亡和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)量變化；MASSON染色觀察心肌纖維化程度。④采用Label free蛋白質(zhì)非標(biāo)記定量技術(shù)分析CSWT組和平行對(duì)照AMI組SD大鼠在CSWT干預(yù)后第1、2、4周時(shí)心肌組織中的蛋白表達(dá)量差異。應(yīng)用生物信息學(xué)分析方法對(duì)差異表達(dá)蛋白進(jìn)行GO功能注釋、KEGG通路注釋及富集分析,找出差異表達(dá)蛋白質(zhì)顯著富集的GO和KEGG條目。分析篩選CSWT誘導(dǎo)AMI大鼠冠脈微血管動(dòng)脈生成這一生物力學(xué)過(guò)程中,核心的調(diào)控信號(hào)通路和相關(guān)目的蛋白,并采用Western blot方法驗(yàn)證相關(guān)目的蛋白在大鼠心肌組織中的表達(dá)量。[結(jié)果]①55只SD大鼠均完成AMI模型制作,手術(shù)成功率為100%。術(shù)后1周存活率90.9%。術(shù)后高頻超聲心動(dòng)圖示AMI大鼠心室間隔運(yùn)動(dòng)幅度明顯減弱或無(wú)運(yùn)動(dòng)、心尖部膨�。籐VESD(3.09+0.40與5.77+0.48,P0.01)和LVEDD(4.92±0.37與8.06+0.47,P0.01)較術(shù)前明顯增大,FS明顯降低(37.07±8.01與28.37±6.79,P0.01)。離體后,肉眼可見(jiàn)大鼠心臟左室壁變薄、局部塌陷、表面顏色灰暗。TTC染色后測(cè)算梗死心肌面積占左室面積的百分比為35.66%±3.77%。② CSWT干預(yù)AMI大鼠第4周,高頻超聲心動(dòng)圖示：CSWT組大鼠LVESD和LVEDD較AMI組明顯改善(4.32±0.20與5.71±0.33和6.43±0.32與7.73+0.55,P0.01),FS也有提高(32.54±5.43與25.80±7.34,P0.05)。③免疫熒光染色激光共聚焦顯微鏡觀察到CSWT組大鼠梗死周?chē)募〉奈?dòng)脈(100μm)管徑較AMI組擴(kuò)大,動(dòng)脈管壁平滑肌層厚度明顯增加；冠脈微動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)G-actin熒光強(qiáng)度明顯高于AMI組。④Western blot檢測(cè)示,抗凋亡蛋白Bcl-2在CSWT組(1.08±0.03)和Sham組(1.02+0.02)中的相對(duì)表達(dá)量明顯高于AMI組(0.10±0.02)(P均0.01)。促凋亡蛋白Bax和Caspase-3在CSWT組的相對(duì)表達(dá)量(0.65+0.05和0.00+0.02)明顯低于AMI組(1.10±0.10和1.31±0.12),P均0.01。CSWT組心肌凋亡指數(shù)明顯低于AMI組(29.91±2.96與15.42±1.33)%(P0.05)⑤Masson三色染色示,AMI組梗死周?chē)募〉睦w維化程度較Sham組和CSWT組明顯,心肌纖維排列紊亂,膠原沉積較多。CSWT組心室肌間質(zhì)膠原容積分?jǐn)?shù)(18.70±13.06)%高于Sham組(0.31±0.17)%,但低于AMI組(70.70+12.34)%(P均0.05)。⑥采用Label free蛋白質(zhì)非標(biāo)記定量技術(shù)方法在CSWT組和AMI組大鼠心肌組織中共鑒定出1320個(gè)蛋白質(zhì)。兩組間蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析顯示,相對(duì)于AMI組,CSWT干預(yù)1周后,有50個(gè)蛋白質(zhì)的表達(dá)明顯上調(diào),29個(gè)蛋白質(zhì)的表達(dá)明顯下調(diào)；第2周后,有60個(gè)蛋白質(zhì)的表達(dá)明顯上調(diào),22個(gè)蛋白質(zhì)的表達(dá)明顯下調(diào)；第4周后,有65個(gè)蛋白質(zhì)的表達(dá)明顯上調(diào),24個(gè)蛋白質(zhì)的表達(dá)明顯下調(diào)。生物信息學(xué)分析提示,差異表達(dá)蛋白在黏著斑(focal adhesion)信號(hào)通路顯著富集。該信號(hào)通路中,整合素連接激酶(ILK)、膠原蛋白Ⅵα3(Col6a3)、層粘連蛋白a5 (Lama5)、鈣激活的中性蛋白酶2(Capn2)蛋白的表達(dá)隨CSWT干預(yù)時(shí)間增加呈逐漸上調(diào)的趨勢(shì)；Ras相關(guān)蛋白1b (Raplb)、玻璃粘連蛋白(Vtn)、整合素β3 (Itgb3)、α輔肌動(dòng)蛋白(Actn1)、肌球蛋白輕鏈7(Myl7)蛋白的表達(dá)則呈逐漸下調(diào)的趨勢(shì)。其中,ILK、Col6a3、Capn2、 Vtn、Itgb3和Actn1共6個(gè)蛋白的表達(dá)經(jīng)Western blot驗(yàn)證,其時(shí)序表達(dá)變化趨勢(shì)與Lable free結(jié)果一致。⑦伴隨CSWT干預(yù)的實(shí)施,AMI大鼠心肌組織中整合素連接激酶ILK的蛋白表達(dá)量呈持續(xù)增加的趨勢(shì),與CSWT干預(yù)后AMI大鼠冠脈微血管動(dòng)脈生成的表型密切關(guān)聯(lián)。[結(jié)論]①開(kāi)胸高位結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支可成功建立穩(wěn)定、平行性良好的SD大鼠AMI模型,是心血管領(lǐng)域蛋白組學(xué)和基因組學(xué)研究的理想動(dòng)物模型。② CSWT干預(yù)可誘導(dǎo)大鼠梗死周?chē)募?nèi)冠脈微血管動(dòng)脈生成,使微血管壁肌層增厚、管腔擴(kuò)大、平滑肌細(xì)胞去分化和增殖,從而改善冠脈側(cè)支循環(huán)、抑制心肌細(xì)胞凋亡和纖維化、減緩左室重構(gòu)、改善AMI大鼠心功能。③CSWT剪切力的機(jī)械信號(hào)作用于AMI大鼠心肌組織并轉(zhuǎn)化為生物學(xué)效應(yīng)的過(guò)程中,黏著斑信號(hào)通路在相關(guān)的信號(hào)網(wǎng)絡(luò)調(diào)控中可能具有核心地位。④整合素連接激酶等時(shí)序差異表達(dá)蛋白與CSWT干預(yù)后AMI大鼠冠脈微血管的動(dòng)脈生成表型密切關(guān)聯(lián),可能是CSWT剪切力在冠脈微血管產(chǎn)生一系列生物力學(xué)效應(yīng)的關(guān)鍵因子,有望成為CSWT生物力學(xué)機(jī)制研究的新切入點(diǎn),為探索CSWT促冠脈微血管動(dòng)脈生成的分子機(jī)制提供新思路。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R542.22

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄭建箏;高聰;謝富華;蒲蜀湘;陳盛強(qiáng);;SD大鼠實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎模型的建立[J];實(shí)用診斷與治療雜志;2006年07期

2 馮建勛;李紅艷;田建偉;;飲食中晚期糖基化終產(chǎn)物對(duì)健康SD大鼠腎臟的影響[J];中國(guó)臨床康復(fù);2006年36期

3 呂伯東;年建華;黃曉軍;張士更;耿強(qiáng);陳剛;陳世濤;;低氧對(duì)SD大鼠陰莖海綿體平滑肌纖維化的影響[J];中華男科學(xué)雜志;2011年02期

4 陳衛(wèi)偉;楊留才;潘施文;李仕紅;徐紅濤;;線栓法制備SD大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年50期

5 張冬冬;張軍;;小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌和高碘對(duì)SD大鼠的影響[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2012年01期

6 唐軍;鐘琳;姚裕家;陳娟;;SD大鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞系的分離、培養(yǎng)及鑒定[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2006年23期

7 李建國(guó);孟壯志;劉海英;田耕;;降鈣素基因相關(guān)肽在受損SD大鼠面神經(jīng)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中的表達(dá)與定位[J];內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年02期

8 趙振江;趙瑞斌;姚澤忠;;建立幼齡SD大鼠肺炎克雷伯桿菌肺炎模型的一種新方法[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生;2009年05期

9 王雪瑩;黃紹平;陳小聰;姜永生;;SD大鼠腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)及純化方法改良[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;2009年09期

10 王寒;趙根尚;周玉陽(yáng);高峰;張正升;何攀;李明;;SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離提純及鑒定[J];中華實(shí)用診斷與治療雜志;2012年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 呂伯東;;低氧對(duì)SD大鼠陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞凋亡的影響[A];2009年浙江省男科、泌尿外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

2 呂伯東;;低氧對(duì)SD大鼠陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞纖維化影響[A];2009年浙江省男科、泌尿外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

3 戴旭鋒;林冰;李英姿;劉曉玲;;正常SD大鼠暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖及光強(qiáng)-反應(yīng)函數(shù)的研究[A];2006年浙江省眼科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

4 路浩;張浩;趙寶玉;韋冬梅;王占新;宋巖巖;;氯化汞對(duì)SD大鼠血液生理生化指標(biāo)的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物毒物學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

5 周欣榮;原慧萍;王雅;馬春楊;李鴻翼;;不同強(qiáng)度微波輻射對(duì)SD大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

6 沈陽(yáng);章捷;單治;吳鼎宇;王瑞蘭;;不同補(bǔ)液對(duì)急性呼吸窘迫綜合征SD大鼠凝血功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國(guó)重癥醫(yī)學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2011年

7 皮斯妮;譚孟群;;不同年齡SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)2013年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2013年

8 皮斯妮;譚孟群;;不同年齡SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)2013年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2013年

9 宋哲;黎曉新;于文貞;;可變高氧環(huán)境下SD大鼠形成早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變模型實(shí)驗(yàn)研究[A];中國(guó)眼底病論壇·全國(guó)眼底病專(zhuān)題學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2008年

10 栗炳南;王峰;宋柳江;王冉;田晶;薛金鳳;譚孟群;;SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)鑒定及體外向血管內(nèi)皮分化的的研究[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)2008年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 王世煥;利用SD大鼠培育人用皮膚[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 左汶奇;模擬手機(jī)電磁輻射對(duì)正常或脂多糖誘導(dǎo)病理狀態(tài)下的SD大鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷的研究[D];華中科技大學(xué);2015年

2 羅玉衡;抑制消化道產(chǎn)甲烷古菌對(duì)SD大鼠脂質(zhì)代謝的影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 楊文慧;心臟震波誘導(dǎo)SD大鼠梗死周?chē)募」诿}微血管動(dòng)脈生成及其分子機(jī)制研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2016年

4 羅金泰;miRNA-145對(duì)SD大鼠陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

5 周軍;介入硬化劑聚桂醇治療SD大鼠子宮內(nèi)膜異位囊腫的實(shí)驗(yàn)研究[D];武漢大學(xué);2014年

6 喬婧;青春期重復(fù)使用非典型抗精神病藥對(duì)SD大鼠藥物敏感性及心理功能的短期和長(zhǎng)期影響[D];西南大學(xué);2015年

7 張姍姍;姜黃素對(duì)口腔黏膜下纖維性變SD大鼠模型抗纖維化作用及機(jī)制的研究[D];中南大學(xué);2012年

8 馬志飛;“中低溫低流量”腦損傷SD大鼠模型的制作以及缺血預(yù)適應(yīng)腦保護(hù)作用機(jī)制的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2014年

9 陳會(huì)強(qiáng);SD大鼠主動(dòng)脈瓣間質(zhì)細(xì)胞自發(fā)鈣化模型的建立及阿托伐他汀和氨氯地平的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

10 鹿楠;SD大鼠腰2移位修復(fù)骶叢撕脫傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 謝金蘭;硫氫化鈉對(duì)SD大鼠骨癌性疼痛影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 李翠;外源性內(nèi)脂素對(duì)SD大鼠子宮內(nèi)膜容受性的影響[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

3 顧國(guó)曉;早期嗅覺(jué)剝奪對(duì)SD大鼠海馬的影響的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 郭志剛;姜黃素對(duì)博來(lái)霉素致SD大鼠急性肺損傷中TNF-α和ICAM-1表達(dá)的影響[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

5 劉永杰;miR-21對(duì)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療心肌梗死的影響實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2015年

6 張峰;推拿對(duì)SD大鼠肌腱末端病模型bFGF的影響[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

7 宋麗媛;胰腺脂肪浸潤(rùn)對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖SD大鼠胰島素分泌的影響[D];山東大學(xué);2015年

8 羅翠蓮;藥物保留灌腸防治SD大鼠急性放射性直腸炎預(yù)防慢性放射性直腸炎的研究[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

9 林艷云;射頻電磁輻射對(duì)雄性SD大鼠和TM3細(xì)胞睪酮分泌的影響研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 劉思思;ARFI破壞微泡增強(qiáng)Fe_3O_4納米粒子在SD大鼠皮下移植瘤靶向遞送的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1660043