本文關(guān)鍵詞：自噬在ox-LDL誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《山東大學(xué)》 2014年

自噬在ox-LDL誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的作用研究

郝鳳成  

【摘要】：心腦血管疾病是目前人類死亡的主要原因之一,動(dòng)脈粥樣硬化是心腦血管疾病的病理基礎(chǔ)。動(dòng)脈粥樣硬化由許多因素引起,其發(fā)病機(jī)制到目前仍未完全明確,許多研究表明脂代謝異常和血管的炎癥反應(yīng)均參與了動(dòng)脈粥樣硬化的形成和發(fā)展。血液中的低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生中占有重要位置,LDL可以引起血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙和內(nèi)皮細(xì)胞損傷,內(nèi)皮細(xì)胞損傷之后可以促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞表面的ICAM1和VCAM1的表達(dá),使得血液中的單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞粘附并向內(nèi)皮下遷移,單核細(xì)胞進(jìn)入動(dòng)脈內(nèi)膜后,吞噬LDL,并使其氧化轉(zhuǎn)變?yōu)閛x-LDL,同時(shí)單核細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉?xì)胞。巨噬細(xì)胞能夠分泌多種細(xì)胞因子,促進(jìn)血管的局部炎癥反應(yīng),加重血管內(nèi)皮損傷并最終導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和進(jìn)展。 隨著人們對(duì)自噬在許多疾病發(fā)展過(guò)程中的研究,動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的自噬現(xiàn)象也引起了人們的關(guān)注。近年的研究顯示,動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)的細(xì)胞具有一定程度的自噬現(xiàn)象,自噬也是決定其進(jìn)程的重要影響因素。自噬是真核細(xì)胞用來(lái)降解和再循環(huán)其胞漿內(nèi)容物的一種方式,基礎(chǔ)水平的自噬在血管功能及形態(tài)的維持中發(fā)揮重要作用。在本研究中,我們觀察ox-LDL能否誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC和單核細(xì)胞THP1產(chǎn)生自噬,并初步探討了自噬在ox-LDL誘導(dǎo)的血管局部炎癥反應(yīng)中的作用。第一章自噬在ox-LDL誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用研究目的： 觀察ox-LDL(?)能否誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞產(chǎn)生自噬,同時(shí)用3-MA抑制自噬,探討自噬對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的HUVEC細(xì)胞中ICAM1、VCAM1和MCP-1表達(dá)的影響。 方法： 1. Western-Blot檢測(cè)20、40、80μg/ml的ox-LDL作用于HUVEC細(xì)胞后LC3的表達(dá)變化,免疫熒光檢測(cè)LC3蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布,從而確定ox-LDL能否誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞產(chǎn)生自噬。 2.MDC染色檢測(cè)20、40、80μg/ml的0x-LDL作用于HUVEC細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)的酸性囊泡,通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)MDC的熒光強(qiáng)度,熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)的酸性囊泡,進(jìn)一步明確ox-LDL能否誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞產(chǎn)生自噬。 3.為了確定自噬對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的影響,將實(shí)驗(yàn)分為4組：(1)對(duì)照組,培養(yǎng)液培養(yǎng),作為對(duì)照；(2)ox-LDL刺激組(80μg/ml);(3)3-MA組(5mmol/L),(4)3-MA(5mmol/L)+ox-LDL (80μg/ml)。Western-Blot檢測(cè)ox-LDL和3-MA作用后的LC3、ICAM1和VCAM1的表達(dá)變化,ELISA檢測(cè)MCP-1的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1. ox-LDL作用于HUVEC細(xì)胞后,可以使LC3的表達(dá)明顯增高,并且LCI被剪切成LC3Ⅱ的數(shù)量明顯增多,免疫熒光顯示LC3在細(xì)胞內(nèi)的聚集明顯增多,細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)典型的點(diǎn)狀熒光,這說(shuō)明ox-LDL引起了細(xì)胞內(nèi)自噬泡的形成。 2.流式結(jié)果顯示,ox-LDL作用于HUVEC細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)MDC的熒光明顯增強(qiáng)。同時(shí)在熒光顯微鏡下觀察顯示,ox-LDL作用于HUVEC細(xì)胞后,細(xì)胞中被MDC染色的酸性囊泡明顯增多,這些結(jié)果進(jìn)一步表明ox-LDL可以誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞產(chǎn)生自噬。 3. Western-blot結(jié)果顯示,ox-LDL可以使HUVEC細(xì)胞中的ICAM1和VCAM1的表達(dá)增高,當(dāng)3-MA抑制自噬后,ox-LDL誘導(dǎo)的ICAM1和VCAM1的表達(dá)會(huì)進(jìn)一步升高；ELISA結(jié)果顯示ox-LDL可以使HUVEC細(xì)胞中的MCP-1的表達(dá)增高,抑制自噬后,ox-LDL誘導(dǎo)的MCP-1的表達(dá)會(huì)進(jìn)一步升高。 結(jié)論： ox-LDL可以誘導(dǎo)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC產(chǎn)生自噬,抑制自噬后,可以使ox-LDL誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)進(jìn)一步增強(qiáng),說(shuō)明自噬對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)起到一定的保護(hù)作用。 第二章自噬在ox-LDL誘導(dǎo)的單核細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用研究 目的：觀察ox-LDL能否誘導(dǎo)單核細(xì)胞THP1細(xì)胞產(chǎn)生自噬,同時(shí)用3-MA抑制自噬,探討自噬對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的THP1細(xì)胞中TNF-α、IL-1和IL-6表達(dá)的影響。 方法： 1.Westem-Blot檢測(cè)20、40、80μg/ml的ox-LDL作用于THP1細(xì)胞后LC3的表達(dá)變化,免疫熒光檢測(cè)LC3蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布,確定ox-LDL能否誘導(dǎo)THP1細(xì)胞產(chǎn)生自噬。 2.MDC染色檢測(cè)20、40、80μg/ml的ox-LDL作用于THP1細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)的酸性囊泡,通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)MDC的熒光強(qiáng)度,熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)的酸性囊泡,進(jìn)一步明確ox-LDL能否誘導(dǎo)THP1細(xì)胞產(chǎn)生自噬。 3.為了確定自噬對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的影響,將實(shí)驗(yàn)分為4組：(1)對(duì)照組,培養(yǎng)液培養(yǎng),作為對(duì)照；(2)ox-LDL刺激組(80μg/ml)；(3)3-MA組(5mmol/L), (4)3-MA(5mmol/L)+ox-LDL(80μg/ml)。Western-Blot檢測(cè)ox-LDL和3-MA作用后的LC3的表達(dá)變化,ELISA檢測(cè)]TNF-α、IL-1和IL-6表達(dá)的變化。 結(jié)果： 1.ox-LDL作用于THP1細(xì)胞后,可以使LC3的表達(dá)明顯增高,并且LCI被剪切成LC3Ⅱ的數(shù)量明顯增多,免疫熒光顯示LC3在細(xì)胞內(nèi)的聚集明顯增多,細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)典型的點(diǎn)狀熒光,這就說(shuō)明ox-LDL引起了細(xì)胞內(nèi)自噬泡的形成。 2.流式結(jié)果顯示,ox-LDL作用于THP1細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)MDC的熒光明顯增強(qiáng)。同時(shí)在熒光顯微鏡下觀察顯示,ox-LDL作用于THP1細(xì)胞后,細(xì)胞中被MDC染色的酸性囊泡明顯增多,這些結(jié)果進(jìn)一步表明ox-LDL可以誘導(dǎo)THP1細(xì)胞產(chǎn)生自噬。 3.Western結(jié)果顯示,加入3-MA后,可以使ox-LDL誘導(dǎo)的LCⅡ的表達(dá)下降,說(shuō)明3-MA可以抑制ox-LDL誘導(dǎo)的自噬；ELISA結(jié)果顯示ox-LDL可以使THP1細(xì)胞中的TNF-α、IL-1和IL-6的表達(dá)增高,抑制自噬后,ox-LDL誘導(dǎo)的TNF-α、IL-1和IL-6的表達(dá)會(huì)進(jìn)一步升高。 結(jié)論： ox-LDL可以誘導(dǎo)單核細(xì)胞THP1產(chǎn)生自噬,抑制自噬后,可以使ox-LDL誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)進(jìn)一步增強(qiáng),說(shuō)明自噬對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)起到一定的保護(hù)作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R543.5
【目錄】：

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5 鄭芳;兩種小分子化合物調(diào)節(jié)自噬及其相關(guān)生物學(xué)功能的研究[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2012年

6 張艷林;自噬在氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用及其機(jī)制探討[D];蘇州大學(xué);2010年

7 吳雅春;自噬在結(jié)腸癌及胃癌細(xì)胞體外藥物干預(yù)過(guò)程中的作用研究[D];浙江大學(xué);2010年

8 蔡增林;Dynein在α-synuclein自噬性清除中的作用[D];蘇州大學(xué);2010年

9 肖榮;自噬在嚴(yán)重?zé)齻缙谛募p害中的作用及其機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

10 劉波;乙型肝炎病毒通過(guò)干擾溶酶體成熟抑制細(xì)胞自噬性降解途徑[D];浙江大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 涂芊茜;自噬在脂肪酸誘導(dǎo)肝損傷中的作用及機(jī)制的初步研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

2 陳哲;自噬在人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞放射損傷過(guò)程中的作用研究[D];蘭州大學(xué);2011年

3 張曉延;腸道病毒71型誘導(dǎo)細(xì)胞自噬、凋亡及相互調(diào)控關(guān)系的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

4 馮文峰;血小板中自噬發(fā)生及功能研究[D];浙江大學(xué);2012年

5 高靈素;自噬對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞生存及增殖的影響及其可能機(jī)制[D];蘇州大學(xué);2012年

6 周蜜;自噬與慢性阻塞性肺疾病[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

7 李媛媛;奧沙利鉑誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞株自噬潮的增加及其對(duì)細(xì)胞活力的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

8 劉宣宣;鎘誘導(dǎo)人肝腎細(xì)胞自噬及相關(guān)蛋白作用初步研究[D];南京師范大學(xué);2013年

9 陳清鳳;工頻磁場(chǎng)對(duì)中國(guó)倉(cāng)鼠肺成纖維細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)作用[D];浙江大學(xué);2011年

10 解艷艷;腫瘤細(xì)胞自噬與腫瘤細(xì)胞抗藥性機(jī)理的初步研究[D];山東大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：自噬在ox-LDL誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：163173