本文選題：心肌梗死　切入點：Gpnmb　出處：《吉林大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：心肌梗死(Myocardial infarction,MI)是目前危害人類健康的主要疾病之一。目前臨床通常采用藥物溶栓或介入治療的方法治療急性心肌梗死,然而冠脈疏通后雖然能在一定程度上改善心臟功能,卻會造成再灌注損傷。因此,急需尋找治療心肌梗死的合適靶點。成年心肌受損后不能再生,其組織損傷修復(fù)主要依賴于對壞死細胞的清除和瘢痕形成。心肌組織60%由心肌成纖維細胞構(gòu)成,它能夠分泌胞外基質(zhì)蛋白,參與組織損傷后的修復(fù)、瘢痕形成及損傷后重構(gòu)等過程,在心梗后心臟功能的維持與修復(fù)過程中具有重要作用。非轉(zhuǎn)移性黑素瘤糖蛋白B(Glycoprotein nonmelanosoma protein B,Gpnmb)是一種Ⅰ型跨膜糖蛋白,在多種組織和細胞中表達。研究表明,在大鼠肝組織損傷后,Gpnmb表達增多,而Gpnmb缺失會導(dǎo)致膠原沉積減少。提示Gpnmb可能通過調(diào)節(jié)纖維化程度參與組織修復(fù)。在遺傳性心肌炎中,心肌組織中高表達樹突狀細胞(dendritic cells,DCs)標記物OX-62,同時Gpnmb表達水平上調(diào)。已有文獻報道,DCs在心肌梗死大鼠心肌組織中上調(diào),而Gpnmb在DCs細胞上有表達,提示DCs可能通過Gpnmb促進組織修復(fù)。但Gpnmb在心肌組織修復(fù)中發(fā)揮的作用尚未闡明。組蛋白乙�；揎検且环N常見的基因調(diào)控方式,Gpnmb也可以受到組蛋白乙�；揎椀恼{(diào)控。曲古菌素A(Trichostatin A,TSA)是一種廣譜的組蛋白去乙酰化酶抑制劑,可上調(diào)組蛋白乙�；�,從而影響基因的表達調(diào)控。我們的前期實驗證明,TSA可以減小大鼠心肌梗死面積,對心肌梗死大鼠起到保護作用,但其是否調(diào)控Gpnmb參與組織修復(fù)尚未闡明。實驗?zāi)康?本實驗擬探討在大鼠心肌梗死條件下,TSA是否通過調(diào)控Gpnmb表達,進而研究TSA對心肌梗死損傷修復(fù)的保護機制。實驗方法:本實驗以健康成年Wistar雄性大鼠為研究對象,采用結(jié)扎冠狀動脈左前降支的方法建立大鼠心肌梗死模型。采用TTC法檢測心肌梗死面積。采用ELISA法,檢測心肌酶CK-MB、c Tn T的含量,明確TSA對心肌梗死損傷的保護作用。采用Western blot法,檢測TSA對心肌梗死后不同時程的Gpnmb和α-SMA、TGF-β1、CTGF蛋白表達的影響。采用染色質(zhì)免疫共沉淀法,檢測TSA對Gpnmb基因啟動子區(qū)組蛋白H3、H4的乙酰化水平的調(diào)控作用。采用天狼猩紅染色法,檢測TSA對梗死心肌組織膠原表達的影響。采用免疫熒光法,觀察心肌梗死后Gpnmb的表達以及與浸潤到心肌組織中的樹突細胞標志物OX-62的共定位情況。實驗結(jié)果:與對照組相比,模型組大鼠心肌梗死后1、3、7、14、21、28天心肌梗死面積顯著增加(P0.01),且呈時間依賴性;與模型組相比,TSA組心梗面積均顯著降低(P0.05)。與對照組相比,模型組大鼠血清中CK-MB在心肌梗死后1天表達升高且達到峰值,c Tn T在心肌梗死后表達升高在3天達到峰值;與模型組相比,TSA組CK-MB和c Tn T的表達均明顯下調(diào)(P0.05)。Western blot結(jié)果顯示:與對照組相比,模型組大鼠梗死心肌組織中,Gpnmb表達顯著升高(P0.05),隨時程逐漸升高并在21天達到峰值,隨后下調(diào);與模型組相比,TSA組Gpnmb表達進一步上調(diào)(P0.05)。免疫熒光結(jié)果表明:與模型組相比,TSA組的Gpnmb表達顯著上調(diào)(P0.05)。染色質(zhì)共沉淀結(jié)果顯示:與對照組相比,模型組Gpnmb啟動子區(qū)域H3、H4乙�；骄尸F(xiàn)上升趨勢(P0.05);給予TSA處理的模型組,Gpnmb啟動子區(qū)域組蛋白H3、H4乙�；竭M一步上調(diào)(P0.05)。與對照組相比,模型組的心肌組織膠原隨時程變化表達增加;與模型組相比,TSA預(yù)處理的心肌組織膠原表達進一步升高(P0.05)。皮爾森相關(guān)性分析結(jié)果顯示,模型組的Gpnmb與膠原表達呈正相關(guān)(r=0.803,P0.05);在TSA組,兩者也呈現(xiàn)正相關(guān)(r=0.795,P0.05)。給予TSA處理后,調(diào)控肌成纖維細胞轉(zhuǎn)化的TGF-β1與其下游CTGF及肌成纖維細胞轉(zhuǎn)化標志物α-SMA也呈現(xiàn)出上升趨勢。免疫熒光結(jié)果顯示,Gpnmb與OX-62共定位,表明心肌梗死大鼠心肌組織中的Gpnmb部分表達在DCs。實驗結(jié)論:TSA通過上調(diào)Gpnmb基因啟動子區(qū)域組蛋白H3、H4的乙�；竭M而上調(diào)Gpnmb表達;TSA上調(diào)膠原表達,同時調(diào)控肌成纖維細胞轉(zhuǎn)化的因子TGF-β1與其下游CTGF以及肌成纖維細胞轉(zhuǎn)化標志物α-SMA的表達;TSA上調(diào)Gpnmb與膠原表達呈現(xiàn)正相關(guān)性;TSA上調(diào)心梗組織中的Gpnmb,部分來源于浸潤到梗死心肌的DCs。TSA可能通過調(diào)節(jié)Gpnmb參與組織損傷修復(fù)進程。我們的研究為調(diào)控心梗后組織修復(fù)提供新思路,為提高心�；颊呱尜|(zhì)量提供新的實驗依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R542.22

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本文編號：1626070