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早發(fā)冠心病患者高密度脂蛋白抗HUVEC凋亡的作用機(jī)制

發(fā)布時(shí)間:2018-03-03 04:19

  本文選題:早發(fā)冠心病 切入點(diǎn):高密度脂蛋白 出處:《中國動(dòng)脈硬化雜志》2017年07期  論文類型:期刊論文


【摘要】:目的通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)探究早發(fā)冠心病(PCHD)患者高密度脂蛋白(HDLPCHD)與健康人群HDL(HDLhealth)抗人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)凋亡作用是否有區(qū)別及其可能機(jī)制。方法采集PCHD患者和與之相匹配的健康人血樣,并提取HDL;不同濃度氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)處理HUVEC 24 h,MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率,明確ox-LDL引起HUVEC凋亡的合適濃度;不同濃度、不同時(shí)間的HDLhealth預(yù)處理HUVEC后,再用合適濃度的oxLDL處理HUVEC 24 h,MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率,明確HDLhealth預(yù)處理HUVEC的最適濃度與最適作用時(shí)間;用最適濃度HDLhealth、HDLPCHD對(duì)HUVEC進(jìn)行最適作用時(shí)間的預(yù)處理,再用合適濃度的ox-LDL處理HUVEC 24 h,MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率。Annexin V-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒進(jìn)行流式細(xì)胞檢測(cè),Western blot檢測(cè)Caspase 3、Caspase 9的蛋白表達(dá),用試劑盒測(cè)定活性氧(ROS)活性,使用Lipoprint脂蛋白分析儀分析HDLhealth和HDLPCHD亞組分(HDL1-HDL10)分布情況。結(jié)果 100 mg/L ox-LDL處理HUVEC 24 h后細(xì)胞存活率為60.34%,較空白處理組明顯降低(P0.05);200 mg/L HDLhealth預(yù)處理HUVEC 18 h后,細(xì)胞存活率為82.01%,可以明顯減弱ox-LDL對(duì)細(xì)胞的損傷;200 mg/L HDLhealth顯著抑制100 mg/L ox-LDL誘導(dǎo)的HUVEC凋亡及Caspase 3、Caspase 9的蛋白表達(dá)和ROS產(chǎn)生;200 mg/L HDLPCHD預(yù)處理HUVEC 18 h后,細(xì)胞存活率為65.5%,其作用較HDLhealth減弱;200 mg/L HDLPCHD可抑制100 mg/L ox-LDL誘導(dǎo)的HUVEC凋亡及Caspase 3、Caspase 9的蛋白表達(dá)和ROS產(chǎn)生,但作用較HDLhealth減弱;HDLPCHD亞組分大顆粒(HDL1-HDL3)含量較HDLhealth低(28.5%±5.7%比46.8%±15.2%),而小顆粒(HDL8-HDL10)含量較HDLhealth高(21.4%±7.8%比10.9%±5.4%)。結(jié)論 HDLPCHD與HDLhealth比較,可能由于其亞組分大顆粒(HDL1-HDL3)含量較HDLhealth低,而小顆粒(HDL8-HDL10)含量較HDLhealth高,導(dǎo)致其抗氧化功能減弱,抑制ox-LDL誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的功能亦減弱,從而減弱或喪失抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。
[Abstract]:Objective to investigate the difference and possible mechanism of anti-apoptosis effect of high density lipoprotein (HDLPC) in patients with premature coronary heart disease (CHD) and healthy controls. Methods Blood samples from PCHD patients and matched healthy subjects were collected. Different concentrations of oxidized low density lipoprotein (ox-LDL) were used to detect the survival rate of HUVEC for 24 h, to determine the appropriate concentration of HUVEC apoptosis induced by ox-LDL, and to pretreat HUVEC with different concentration and time. The cell survival rate was determined by 24 h HUVEC treatment with appropriate concentration of oxLDL, and the optimal concentration and optimal time of HUVEC pretreatment with HDLhealth were determined, and the optimal time of HUVEC pretreatment with the optimal concentration of HDLhealth and HDLPCHD was determined. The cell survival rate. Annexin V-FITC / Pi apoptosis assay kit was used to detect the protein expression of Caspase 3 caspase 9 by flow cytometry, and the activity of reactive oxygen species (Ros) was measured by using the kit. Lipoprint lipoprotein analyzer was used to analyze the distribution of HDLhealth and HDLPCHD subfractions HDL1-HDL10. Results the cell survival rate of HUVEC treated with 100 mg/L ox-LDL for 24 h was 60.34, which was significantly lower than that of control group after HUVEC 18 h pretreated with P0.05 or 200 mg/L HDLhealth. The cell survival rate was 82.01, which could significantly attenuate the damage induced by ox-LDL and the apoptosis of HUVEC induced by 100 mg/L ox-LDL and the expression of Caspase _ 3 Caspase-9 protein and the production of Caspase _ (2) mg/L HDLPCHD pretreated with HUVEC for 18 h. The cell survival rate was 65. 5%, and its effect was lower than that of HDLhealth, which could inhibit HUVEC apoptosis induced by 100 mg/L ox-LDL and the expression of Caspase 3 Caspase 9 protein and the production of ROS. But the content of HDL1-HDL3) was lower than that of HDLhealth (28.5% 鹵5.7% vs 46.8% 鹵15.2g), while the content of HDL8-HDL10 was higher than that of HDLhealth (21.4% 鹵7.8% vs 10.9% 鹵5.4U). Conclusion compared with HDLhealth, the content of HDL1-HDL3 in the subcomponent of HDLPCHD is lower than that of HDLhealth, while the content of HDL8-HDL10 in small particles is higher than that of HDLhealth. The function of inhibiting the apoptosis of endothelial cells induced by ox-LDL was also weakened, which weakened or lost the effect of anti-atherosclerosis.
【作者單位】: 山西醫(yī)科大學(xué);山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院心內(nèi)科心血管疾病診治及臨床藥理山西省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院心內(nèi)科;
【分類號(hào)】:R541.4

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本文編號(hào):1559503


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