本文關(guān)鍵詞： 腹主動(dòng)脈瘤 丹參酮ⅡA 基質(zhì)金屬蛋白酶 促炎因子 氧化應(yīng)激 Toll樣受體 髓樣分化因子88 核因子κB　出處：《南京大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分 彈力蛋白酶誘導(dǎo)大鼠腹主動(dòng)脈瘤模型的建立與改進(jìn)目的：建立符合要求的腹主動(dòng)脈瘤動(dòng)物模型從而給本研究建立基礎(chǔ)。方法：首先按文獻(xiàn)報(bào)道建立彈力蛋白酶誘導(dǎo)的大鼠腹主動(dòng)脈瘤模型。用50只S-D大鼠,隨機(jī)分成5組,分別接受生理鹽水及彈力蛋白酶(0.1U/μL、1U/μL、10U/μL、 100U/μL)灌注30分鐘造模,B超監(jiān)測(cè)腹主動(dòng)脈內(nèi)徑變化并于造模術(shù)后28天取標(biāo)本,明確最適造模濃度。再用30只S-D大鼠,隨機(jī)分成3組,以最適濃度灌注不同時(shí)間(1min,10min,30min),B超監(jiān)測(cè)腹主動(dòng)脈內(nèi)徑變化并于造模術(shù)后28天取標(biāo)本,明確最適造模濃度。結(jié)果：在成功建立大鼠腹主動(dòng)脈瘤基礎(chǔ)上,得出改進(jìn)后生理鹽水組存活率為100%,其余各組均為90%,生理鹽水及0.1U/μL彈力蛋白酶灌注組的成瘤率為0,而1U/μL、10 U/μL、100 U/μL灌注組成瘤率為100%,在建立腹主動(dòng)脈成功組中,灌注濃度與腹主動(dòng)脈擴(kuò)張程度無(wú)關(guān)(P=0.136及P=0.261)。在以1 U/μL彈力蛋白酶灌注時(shí),30min組存活率為90%,其余兩組存活率為100%,1min組成瘤率為70%,10mmin與30min組為100%,灌注時(shí)間越長(zhǎng),腹主動(dòng)脈擴(kuò)張?jiān)矫黠@(P=0.000及P=0.007)。結(jié)論：本研究以1U/μL濃度的彈力蛋白酶灌注大鼠腹主動(dòng)脈10min建立腹主動(dòng)脈瘤動(dòng)物模型技術(shù)上是可行的,同時(shí)可提高存活率和減少不必要的浪費(fèi),可為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供穩(wěn)定高效平臺(tái)。第二部分 丹參酮ⅡA對(duì)大鼠腹主動(dòng)脈瘤的干預(yù)和效果目的：研究丹參酮ⅡA對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠腹主動(dòng)脈瘤的抑制作用。方法：SD雄性大鼠36只隨機(jī)平均分成實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組、空白組。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組予胰彈力蛋白酶灌注腎下段腹主動(dòng)脈,空白組予生理鹽水灌注。實(shí)驗(yàn)組自造模前1天起全程腹腔內(nèi)注射2mg/d (10ml)丹參酮ⅡA,對(duì)照組與空白組予等量生理鹽水腹腔內(nèi)注射。術(shù)前7天和術(shù)后第7、14、21、28 d使用多普勒超聲測(cè)量動(dòng)脈瘤最大處內(nèi)徑并測(cè)量動(dòng)脈收縮壓。術(shù)后28 d取腹主動(dòng)脈觀察組織學(xué)變化并通過(guò)免疫組化、ELISA法、Western blot法、RT-PCR方法進(jìn)行分析。結(jié)果：術(shù)后28 d實(shí)驗(yàn)組腹主動(dòng)脈瘤直徑較對(duì)照組明顯減小(TanⅡA vs control, 0.23±0.023 vs 0.31±0.038, t=5.62, p0.001),但各組血壓手術(shù)前后無(wú)明顯變化(p值分別為0.226,0.287,0.304)。實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本彈性纖維含量明顯高于對(duì)照組(Tan ⅡA vs control,14.6±3.3 vs 7.6±2.6, t=5.09, p0.001),管壁結(jié)構(gòu)較完整保存。實(shí)驗(yàn)組基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2與MMP-9在mRNA轉(zhuǎn)錄(TanⅡA vs control, MMP-2,1.52±0.44 vs 2.14±0.54 t=2.76,p=0.007; MMP-9,1.35±0.44 vs 2.76±0.77, t=5.48,P=0.001)和蛋白質(zhì)表達(dá)水平上均較對(duì)照組明顯下降(TanⅡA vs control, MMP-2,1.85±0.27 vs 3.61±0.31, t=13.18, p 0.001; MMP-9,2.28±0.23 vs 3.84±0.28, t=13.30, p0.001), TIMP-1與TIMP-2在轉(zhuǎn)錄水平得到明顯提升(TanⅡA vscontrol, TIMP-1,0.93±0.26 vs 0.48±0.18, t=4.34, p0.001; TIMP-2,3.11±0.58 vs 0.41±0.17,t=13.42,p0.001),同時(shí)單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)、白介素-6(IL-6)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、8-羥化鳥苷酸(8-OHdG)、8-異前列腺素(8-isoprostane)表達(dá)則明顯較對(duì)照組明顯減少(Tan ⅡA vs control, MCP-1, 0.68±2.45 vs 0.39±1.55, t=9.67,p0.001; IL-6,48.3±9.7 vs 144.2±13.9, t=17.59, p0.001; iNOS,0.52±3.24 vs 1.22±4.37,t=12.19,p0.001; 8-OHdG,1.60±0.21 vs 2.46±0.27, t=7.83, p0.001; 8-isoprostane, Tan ⅡA vs Control,13.38±3.27 vs 28.84±5.53,t=7.51, p0.001;), IL-1β和TNF-α的mRNA水平得到顯著提升(Tan Ⅱ Avs control, IL-1β,0.73±0.19 vs 1.35±0.22, t=6.59, p0.001; TNF-α,0.68±0.19 vs 2.07±0.36, t=10.69,p0.001)。結(jié)論：從大體結(jié)果中得出丹參酮ⅡA可以顯著抑制腹主動(dòng)脈瘤的擴(kuò)張,從細(xì)胞水平可見(jiàn)丹參酮ⅡA保護(hù)血管平滑肌細(xì)胞,從分子水平上表明丹參酮ⅡA可以抑制MMP-2和MMP-9的表達(dá),抑制TIMP-1和TIMP-2的轉(zhuǎn)錄水平,減弱MCP-1和IL-6的表達(dá),降低IL-1β和TNF-α的轉(zhuǎn)錄,弱化炎癥反應(yīng),減少iNOS的合成,減輕氧化應(yīng)激損傷,導(dǎo)致8-isoprostane和8-OHdG生成減少。第三部分丹參酮ⅡA與MyD88依賴性TLR-4通路在抑制腹主動(dòng)脈瘤中的關(guān)系目的：探索丹參酮ⅡA與是否對(duì)髓樣分化因子88(MyD88)依賴性Toll樣受體(TLR)-4通路抑制實(shí)現(xiàn)抑制實(shí)驗(yàn)性大鼠腹主動(dòng)脈瘤擴(kuò)張。方法：雄性SD大鼠(每組12只)隨機(jī)分為三組：Tan ⅡA組、對(duì)照組和空白組。Tan IIA組和對(duì)照組經(jīng)主動(dòng)脈內(nèi)灌注彈性蛋白酶誘導(dǎo)腹主動(dòng)脈瘤,假手術(shù)組灌注生理鹽水。Tan IIA組大鼠給予Tan IIA(2mg/只/天)。灌注后24d,采集腹主動(dòng)脈樣本,使用RT-PCR, Western blot、免疫組化和免疫熒光方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果：取標(biāo)本后的多種檢測(cè)方法共同表明丹參酮ⅡA干預(yù)使得在對(duì)照組出現(xiàn)高強(qiáng)度強(qiáng)烈表達(dá)的TLR-4、MyD88、磷酸化核因子KB(pNF-KB)和磷酸化IκBα(pIκBα)在實(shí)驗(yàn)組中表達(dá)顯著減少(TLR-4,0.82316±0.22vs 1.14120±0.29, t=-2.62,p=0.017; MyD88,0.63919±0.26 vs 0.99909±0.22, t=-3.17, p=0.006; pNF-∈B,1.51225±0.40 vs 2.92694±0.49, t=-6.71, p0.001; pIicBa,1.07369±0.16 vs 1.31090±0.18, t=-2.95, p=0.008)。結(jié)論：MyDS8依賴性TLR-4信號(hào)通路激活NF-∈B導(dǎo)致多種致病蛋白高表達(dá),在腹主動(dòng)脈瘤病理過(guò)程中起到重要作用,丹參酮ⅡA抑制這條通路,顯著降低通路蛋白表達(dá),最終實(shí)現(xiàn)抑制腹主動(dòng)脈瘤擴(kuò)張的效果。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R543.16

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1548159