本文關鍵詞： 房顫 巨噬細胞-心房肌細胞交互作用 IL-1β QKI蛋白　出處：《浙江大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：心房顫動(房顫)是最常見的心律失常,目前認為炎癥在房顫的發(fā)生和發(fā)展中起到重要作用。新近研究發(fā)現(xiàn),房顫患者的心房組織內(nèi)巨噬細胞浸潤增加,但其表型和功能尚不明確。為回答上述問題,我們開展了如下工作:首先,我們收集并分析了房顫患者的右心耳組織,我們發(fā)現(xiàn),與竇性心律對照者相比,房顫患者右心耳組織中巨噬細胞浸潤增加,并且以促炎型(iNOS+,Arg1-)為主。將快速起搏后的小鼠心房肌細胞(HL-1細胞)與巨噬細胞共培養(yǎng),同樣可以誘導巨噬細胞向促炎型分化。另一方面,用LPS激活心房內(nèi)促炎型巨噬細胞可導致小鼠及犬心房電重構(gòu)增加,表現(xiàn)為房顫發(fā)生率的增多、有效不應期縮短及L型鈣離子通道電流的減小;而使用膦酸二鈉脂質(zhì)體清除心房內(nèi)促炎型巨噬細胞可減少LPS所致心房電重構(gòu),此結(jié)果進一步確認了促炎型巨噬細胞在房顫發(fā)生中的作用。在分子機制方面,我們發(fā)現(xiàn),促炎型巨噬細胞所致心房電重構(gòu)增加是通過分泌IL-1β實現(xiàn)的,巨噬細胞分泌IL-1β作用于心房肌細胞,導致心房肌細胞內(nèi)RNA結(jié)合蛋白QKI表達下降。另一方面,與野生型促炎型巨噬細胞相比,IL-1β敲除促炎型巨噬細胞與心房肌細胞共培養(yǎng)后,可以部分恢復心房肌細胞的QKI表達,進一步確認了 IL-1β在促炎型巨噬細胞所致心房肌細胞QKI下調(diào)中的作用。進一步地,我們發(fā)現(xiàn),心房肌細胞QKI過表達可以增加QKI與L型鈣離子通道蛋白α1C亞基編碼基因CACNA1C mRNA的結(jié)合,同時可以提高CACNA1C表達水平和L型鈣離子通道電流,而心房肌細胞QKI敲除可減少CACNA1C表達。最后,為研究QKI的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,我們進行了轉(zhuǎn)錄因子篩選,我們發(fā)現(xiàn)AT豐富序列結(jié)合蛋白1(Satb1)可激活QKI轉(zhuǎn)錄。綜上所述,我們發(fā)現(xiàn),房顫可導致巨噬細胞向促炎型極化,而促炎型巨噬細胞可通過分泌IL-1β,誘導心房肌細胞內(nèi)QKI表達下調(diào),從而減小QKI與CACNA1CmRNA的結(jié)合并降低L型鈣離子通道電流。我們的研究揭示了巨噬細胞和心房肌細胞交互作用在房顫發(fā)生和發(fā)展中的作用,并提供了房顫治療的新靶點(QKI)。
[Abstract]:Atrial fibrillation (AF) is the most common arrhythmia. Inflammation is thought to play an important role in the occurrence and development of AF. To answer these questions, we did the following: first, we collected and analyzed the right atrial appendage tissue in patients with atrial fibrillation, and we found that, compared with sinus rhythm controls, The infiltration of macrophages in right atrial appendage was increased in patients with atrial fibrillation, and the inflammatory type of iNOS (Arg 1) was the main one. The HL-1 cells of mouse atrial myocytes after rapid pacing were co-cultured with macrophages. On the other hand, the activation of LPS could increase atrial electrical remodeling in mice and dogs, which was characterized by increased incidence of atrial fibrillation. The effective refractory period was shortened and the L-type calcium channel current was decreased, while the removal of proinflammatory macrophages induced by LPS could reduce the atrial electrical remodeling induced by LPS by using phosphonic acid disodium liposome to remove the proinflammatory macrophages in the atrium. The results further confirmed the role of pro-inflammatory macrophages in the pathogenesis of atrial fibrillation. In molecular mechanism, we found that the increase of atrial electrical remodeling induced by pro-inflammatory macrophages was achieved by secreting IL-1 尾. The secretion of IL-1 尾 by macrophages induced a decrease in the expression of RNA binding protein QKI in atrial myocytes. On the other hand, compared with wild-type pro-inflammatory macrophages, IL-1 尾 knockout proinflammatory macrophages were co-cultured with atrial myocytes. It can partially restore the expression of QKI in atrial myocytes, and further confirm the role of IL-1 尾 in the down-regulation of QKI in atrial myocytes induced by pro-inflammatory macrophages. Overexpression of QKI in atrial myocytes increased the binding of QKI to L-type calcium channel protein 偽 1C subunit encoding gene CACNA1C mRNA, and increased CACNA1C expression level and L-type calcium channel current. Finally, in order to study the transcriptional regulation of QKI, we screened transcription factors and found that AT-rich sequence binding protein (AT-rich sequence binding protein 1) can activate QKI transcription. Atrial fibrillation can induce macrophage polarization towards inflammation type, while pro-inflammatory macrophage can induce down-regulation of QKI expression in atrial myocytes by secreting IL-1 尾. Our study revealed the role of macrophage and atrial myocyte interaction in the occurrence and development of atrial fibrillation and provided a new target for the treatment of atrial fibrillation.
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R541.75

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本文編號：1521798