本文關(guān)鍵詞： 同型半胱氨酸 巨噬細(xì)胞 CD147 動(dòng)脈粥樣硬化　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是冠心病的主要病理學(xué)基礎(chǔ),其發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜,目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)同“內(nèi)皮損傷學(xué)說”,即多種危險(xiǎn)因素?fù)p傷內(nèi)皮細(xì)胞,內(nèi)膜通透性增高,脂質(zhì)進(jìn)入內(nèi)膜,單核巨噬細(xì)胞滲入內(nèi)膜并吞噬脂質(zhì),形成泡沫細(xì)胞;泡沫細(xì)胞不斷凋亡,形成脂質(zhì)核心,斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP),降解細(xì)胞外基質(zhì),導(dǎo)致纖維帽變薄,逐漸演變?yōu)椴环�(wěn)定性斑塊。因此巨噬細(xì)胞在AS過程起了至關(guān)重要的作用。CD147是一種表達(dá)于人體多種組織細(xì)胞膜上的跨膜糖蛋白,可誘導(dǎo)MMP表達(dá),而MMP可降解構(gòu)成粥樣斑塊纖維帽的主要成分,從而加速斑塊不穩(wěn)定。同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)是90年代被確定為新型的AS獨(dú)立危險(xiǎn)因素,研究證實(shí)Hcy誘導(dǎo)多種細(xì)胞表達(dá)MMP增多,但對(duì)其具體機(jī)制尚未完全闡明,Hcy是否通過促進(jìn)MMP的上游分子CD 147表達(dá)而引起MMP分泌,參與AS發(fā)生發(fā)展過程,目前鮮有報(bào)道。他汀類藥物不僅具有強(qiáng)大降脂作用,且能穩(wěn)定及逆轉(zhuǎn)動(dòng)脈粥樣斑塊進(jìn)展。有研究證實(shí)他汀能抑制斑塊內(nèi)CD147及MMP表達(dá),而Hcy是動(dòng)脈斑塊進(jìn)展的危險(xiǎn)因素,他汀能否抑制Hcy誘導(dǎo)的CD147表達(dá),目前未見報(bào)道。目的1、探討Hcy對(duì)U-937來源巨噬細(xì)胞CD147表達(dá)的影響。2、瑞舒伐他汀干預(yù)Hcy處理的巨噬細(xì)胞,確定其對(duì)Hcy誘導(dǎo)CD147表達(dá)的影響。3、MTT檢測Hcy、瑞舒伐他汀對(duì)U-937來源巨噬細(xì)胞活性的影響。方法1、構(gòu)建巨噬細(xì)胞模型將U937細(xì)胞以5×105/L密度接種于細(xì)胞板中,加10nmol/L佛波酯(PMA)刺激48 h,顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),確定分化為巨噬細(xì)胞。2、Hcy、瑞舒伐他汀干預(yù)分化為巨噬細(xì)胞后,換無血清培養(yǎng)24 h,按如下處理:(1)分別加入濃度為0、50、100、500umol/L的Hcy孵育48h。(2)500umol/LHcy孵育0、12、24、48h。(3)0、10-8、10-7、10-6、10-5mol/L 的瑞舒伐他汀和500umol/LHcy 共培養(yǎng) 48h。PCR、Western blot、免疫熒光檢測巨噬細(xì)胞CD147的表達(dá)。3、MTT檢測細(xì)胞活性將U937細(xì)胞以2×104個(gè)細(xì)胞/孔接種于96孔板中,Hcy、瑞舒伐他汀處理后,加10ulMTT溶液(5g/L),37℃孵育4h,棄上清,加100ulDMSO,震蕩10min,酶標(biāo)儀上測490nm處吸光度。4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用x±s表示,應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析,多組樣本均數(shù)比較采用LSD-t檢驗(yàn),P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1、未處理的U937細(xì)胞為形態(tài)均一類圓形,呈懸浮生長。PMA處理48h,可見細(xì)胞貼壁生長,為梭形、星狀或不規(guī)則形。2、PCR:CD147mRNA表達(dá)量隨Hcy濃度升高(或Hcy孵育時(shí)間延長)而逐漸增加,其中100、500umol/LHcy組(或24h、48hHcy組)較對(duì)照組明顯增加(P0.05)。瑞舒伐他汀與500umol/LHcy共處理細(xì)胞48h后,CD147mRNA隨瑞舒伐他汀濃度增加而逐漸減少,其中10-7-10-5 mol/L瑞舒伐他汀組CD147mRNA較對(duì)照組明顯減少(P0.05)。3、western blot:CD147蛋白表達(dá)量隨著Hcy的濃度升高(或Hcy孵育時(shí)間延長)而逐漸增加,其中,100、500umol/LHcy組(或24h、48hHcy組)與對(duì)照組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。不同濃度瑞舒伐他汀與500umol/LHcy共處理U-937細(xì)胞48h后,CD147蛋白表達(dá)量隨瑞舒伐他汀濃度增加而逐漸減少,其中10-7-10-5mol/L瑞舒伐他汀組較對(duì)照組明顯減少(P0.05)。4、免疫熒光:Oumol/LHcy處理的細(xì)胞膜上熒光淺淡,500umol/LHcy處理的熒光明顯增強(qiáng)。而10-5mol/L瑞舒伐他汀+500umol/LHcy處理的熒光強(qiáng)度較500umol/L Hcy組明顯減弱。5、MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果:不同濃度Hcy組、不同濃度瑞舒伐他汀組的OD值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論本研究證實(shí),Hcy能上調(diào)U-937來源巨噬細(xì)胞CD147的表達(dá),而瑞舒伐他汀能抑制Hcy誘導(dǎo)的CD147表達(dá);一定濃度Hcy和瑞舒伐他汀對(duì)U937細(xì)胞來源巨噬細(xì)胞的活力無明顯影響。
[Abstract]:Atherosclerosis ( AS ) is the main pathological basis of coronary heart disease , and its pathogenesis is extremely complex , and most scholars agree with the theory of endothelium injury . The expression of MMP - 7 and MMP - 2 in macrophages were determined to be a new type of atherosclerosis . (3)0,10-8,10-7,10-6,10-5mol/L 鐨勭憺鑸掍紣浠栨眬鍜，

本文編號(hào)：1506950