本文關(guān)鍵詞：抗血小板藥物對高血壓大鼠微循環(huán)及血管重構(gòu)的作用和炎癥內(nèi)皮微粒對內(nèi)皮通透性的作用研究　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學院》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的：第一部分：探討抗血小板藥物氯吡格雷對自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)微循環(huán)及血管重構(gòu)的作用。第二部分：探討炎癥因子C反應(yīng)蛋白刺激人臍靜脈內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的內(nèi)皮微粒對體外培養(yǎng)單層內(nèi)皮細胞通透性的作用。方法：第一部分：SPF級雄性13周齡SHR隨機分為溶劑對照組、氯吡格雷組、奧美拉唑組及兩藥混合組,每組5只,分別灌胃1 mL 0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)、氯吡格雷溶液(10mg/kg).奧美拉唑溶液(20mg/kg)及兩藥混合溶液,每日一次。連續(xù)四周后,首先用高功率激光多普勒血流探測儀(LDF)檢測大鼠腦皮質(zhì)、耳廓及趾血流量、血細胞聚集度和血流速度,用血流成像儀(LDPI)觀察腦血流分布狀態(tài)；取溶劑對照組和氯吡格雷組大鼠的腦和主動脈固定,利用HE染色觀察主動脈管壁厚度、管壁面積、管腔面積及管壁平滑肌、利用HE染色觀察腦微血管數(shù)及利用免疫組化方法檢測腦皮質(zhì)血管內(nèi)皮細胞CD31表達量等血管重構(gòu)和微血管稀疏情況。采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學分析和比較。第二部分：體外培養(yǎng)人臍帶靜脈內(nèi)皮細胞株(HUVEC),以倒置顯微鏡觀察細胞生長過程并繪制細胞生長曲線。HUVEC經(jīng)不同濃度C反應(yīng)蛋白(0、25、50、75μg/mL)作用12 h,收集細胞培養(yǎng)液以制備內(nèi)皮微粒。利用流式細胞儀檢測CD62E+內(nèi)皮微粒的百分率；利用Transwell系統(tǒng)檢測內(nèi)皮微粒對HUVEC通透性的影響；利用免疫熒光染色觀察不同濃度內(nèi)皮微粒對HUVEC肌動蛋白F-actin的表達影響。結(jié)果：第一部分：氯吡格雷組高血壓大鼠的腦皮質(zhì)、耳廓和趾血流量顯著高于溶劑對照組(P值分別0.05、0.01和0.05)；氯吡格雷組高血壓大鼠的耳廓和趾血流速度顯著高于溶劑對照組(P值分別0.001和0.05)；氯吡格雷組高血壓大鼠腦血流分布曲線與溶劑對照組相比整體右移,其腦高血流量(800-1500 PU)面積百分比顯著高于溶劑對照組(P0.01)；本實驗結(jié)果中,奧美拉唑在對微循環(huán)作用中并未顯示對氯吡格雷改善微循環(huán)的減效作用。氯吡格雷組大鼠主動脈管壁厚度及面積明顯低于溶劑對照組(P0.05),血管平滑肌增殖較溶劑對照組有所改善,排列相對連續(xù)工整,管腔面積與管壁面積比值明顯高于溶劑對照組(P0.05),氯吡格雷組大鼠腦皮質(zhì)內(nèi)微血管數(shù)明顯高于溶劑對照組(P0.05),血管CD31表達量明顯高于溶劑對照組(P0.05)。第二部分：細胞接種8h后完全貼壁,6d后細胞融合可達80-90%,其中2-4d為細胞對數(shù)生長期,數(shù)目明顯增多,體積增大,胞漿豐富,其他時間則變化不明顯；與對照組相比,梯度濃度C反應(yīng)蛋白(25、50、75μg/mL)可以刺激HUVEC產(chǎn)生更高的CD62E+內(nèi)皮微粒,其中50和75 μg/mL兩個濃度有顯著差異(P值分別0.01和0.05)；與對照組相比,不同濃度內(nèi)皮微粒(2500、5000、10000個/mL)使HUVEC通透性在15、30、60、90 min時刻顯著增高(P值均分別0.01、0.05和0.001)；與對照組相比,隨著刺激HUVEC的內(nèi)皮微粒濃度升高,F-actin由細胞周圍和細胞連接處向細胞內(nèi)遷移,致密外周束逐漸減少,應(yīng)力纖維和中央短纖維逐漸增粗增多。。結(jié)論：第一部分：氯吡格雷能夠明顯改善高血壓大鼠體表和腦微循環(huán),其機制可能與改善血管重構(gòu)及有效增加微血管數(shù)量相關(guān),有利于高血壓預(yù)后和降低心腦血管并發(fā)癥的發(fā)生。第二部分：在炎癥因子C反應(yīng)蛋白刺激下內(nèi)皮細胞產(chǎn)生了特定表型的內(nèi)皮微粒,以這種內(nèi)皮微粒再作用于正常內(nèi)皮細胞,可導(dǎo)致正常內(nèi)皮細胞的細胞通透性發(fā)生顯著變化,這種改變會對進一步導(dǎo)致內(nèi)皮細胞損傷起重要作用。
[Abstract]:Objective: the first part: To investigate the drug clopidogrel in spontaneously hypertensive rats (SHR) microcirculation and vascular remodeling. The second part: endothelial microparticles of cytokine C reactive protein in cultured human umbilical vein endothelial cells from cultured monolayer endothelial cells permeability effect on in vitro. Methods: the first part: SPF male 13 weeks of age SHR were randomly divided into solvent control group, clopidogrel group, omeprazole group and the two drug combination group, 5 rats in each group were intragastric administration of 1 mL of 0.5% sodium carboxymethyl cellulose (CMC-Na), clopidogrel solution (10mg/kg). Omeprazole solution (20mg/kg) and the two drugs mixed solution, once a day. Four weeks, with the first high power laser Doppler blood flow detector (LDF) to detect the cerebral cortex of rats, ear and foot blood flow, blood cell aggregation and blood flow velocity, flow imaging (LDPI) to observe the distribution of cerebral blood flow. State; take the solvent control group and clopidogrel group rat brain and aorta fixation, staining of aortic wall thickness by HE, wall area, lumen area and tube wall smooth muscle, using HE staining to observe the cerebral microvessel count and by immunohistochemistry expression of skin cell CD31 content of vascular remodeling and microvascular rarefaction situation detection of cerebral blood vessel. And statistical analysis was conducted using SPSS17.0 statistical software. The second part: the in vitro cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVEC), with inverted microscope to observe the cell growth process and cell growth curves of.HUVEC with different concentration of C reactive protein (0,25,50,75 g/mL) 12 h, the cell culture medium was collected in the preparation of endothelial microparticles. Using the percentage of detection of CD62E+ endothelial microparticles by flow cytometry; using Transwell system to detect endothelial microparticles effect on HUVEC permeability by immune; Fluorescent staining to observe the expression of different concentrations of HUVEC F-actin endothelial microparticles actin effect. Results: the first part: clopidogrel group hypertensive rats cerebral cortex, auricle and toe blood flow was significantly higher than that of the solvent control group (P = 0.05,0.01 and 0.05); the auricle and toe blood flow velocity high blood pressure in rats with clopidogrel group was significantly higher than that of the solvent control group (P = 0.001 and 0.05); clopidogrel group hypertensive rats with cerebral blood flow distribution curve and the solvent control group compared to the overall shift, the cerebral blood flow (800-1500 PU) high percentage was significantly higher than that of the solvent control group (P0.01); the experimental results, did not show the effects of omeprazole in improving microcirculation of clopidogrel on the microcirculation in rat aorta. The clopidogrel group was significantly lower than the wall thickness and area of solvent control group (P0.05), the proliferation of vascular smooth muscle compared with solvent control Group improved continuous arrangement relatively neat, lumen area and wall area ratio was significantly higher than that of the solvent control group (P0.05), the cerebral cortex of rats in the clopidogrel group was significantly higher than that of microvessels in solvent control group (P0.05), vascular expression of CD31 was significantly higher than that of the solvent control group (P0.05). The second part: after inoculation with 8h cells adherenced after cell fusion, 6D up to 80-90%, which 2-4d cells in logarithmic growth phase, significantly increased the number, size, abundant cytoplasm, the rest of the time did not change significantly; compared with the control group, the concentration gradient of C reactive protein (25,50,75 g/mL) HUVEC CD62E+ can stimulate endothelial microparticles higher, among them 50 and 75 g/mL two concentration had significant difference (P = 0.01 and 0.05); compared with the control group, different concentration of endothelial microparticles (2500500010000 /mL) so that the permeability of HUVEC was significantly higher in the 15,30,60,90 time min (P value were 0 .01,0.05 and 0.001); compared with the control group, with the increase of HUVEC concentration stimulated endothelial microparticles, F-actin from around the cells and cell junction migration into cells, dense peripheral beam gradually reduced, stress fibers and central short fibers gradually thickening increased. Conclusion: the first part: clopidogrel can significantly improve the surface of hypertensive rats and the cerebral microcirculation, and its mechanism may improve vascular remodeling and increase the microvascular number related to hypertension, prognosis and reduce cardiovascular complications. The second part: the endothelial cells induced by pricking endothelial microparticles in inflammatory cytokines C reactive protein had a specific phenotype, in this role in normal endothelial microparticles and endothelial cells. May cause normal endothelial cell permeability change, this change will lead to further damage of endothelial cells plays an important role.

【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R544.1

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