本文關(guān)鍵詞：抗原模擬法建立免疫性血小板減少癥小鼠模型中巨核細(xì)胞形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)觀察，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《復(fù)旦大學(xué)》 2015年

抗原模擬法建立免疫性血小板減少癥小鼠模型中巨核細(xì)胞形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)觀察

陳樸  

【摘要】：背景免疫性血小板減少癥(immune thrombocytopenia, ITP)是臨床上最常見的出血性疾病,以血小板計(jì)數(shù)減少、出血傾向?yàn)橹饕攸c(diǎn),有相當(dāng)一部分患者持續(xù)及反復(fù)發(fā)作,發(fā)展為慢性或難治性ITP,嚴(yán)重影響生活質(zhì)量。既往大多觀點(diǎn)認(rèn)為ITP主要是由自身抗體所介導(dǎo)的血小板破壞過多,然而近年來越來越多的證據(jù)表明,體液免疫、細(xì)胞免疫、固有免疫都參與了ITP的發(fā)生,尤其是T細(xì)胞的異常在其發(fā)病中的地位越來越受到廣泛關(guān)注。除此之外,作為自身免疫反應(yīng)的標(biāo)靶之一,巨核細(xì)胞層面的異常也開始進(jìn)入研究者的視野。對(duì)ITP自身免疫發(fā)病機(jī)制的深入研究令許多新的定向免疫干預(yù)措施進(jìn)入臨床研究階段。然而,相對(duì)于ITP發(fā)病機(jī)制研究的不斷進(jìn)展,ITP動(dòng)物模型的相關(guān)發(fā)展嚴(yán)重滯后,目前被廣泛運(yùn)用的模型,通常是通過直接注射外源性抗血小板抗體以達(dá)到模型動(dòng)物血小板減少的目的。這類模型對(duì)于ITP發(fā)病機(jī)制的模擬是建立在單一的體液免疫基礎(chǔ)上,且抗體是外源性的,對(duì)自身免疫的觸發(fā)、抗體的產(chǎn)生及細(xì)胞免疫機(jī)制作用的模擬都存在明顯缺陷。隨著對(duì)ITP免疫發(fā)病機(jī)制研究的深入,一種新型動(dòng)物模型成為迫切的需要。目的介紹一種能夠更好模擬自身免疫反應(yīng)啟動(dòng)及進(jìn)程的新型主動(dòng)免疫型ITP造模法,對(duì)其模擬人類ITP疾病的狀態(tài)進(jìn)行評(píng)估,并觀察模型中巨核細(xì)胞形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)變化,以加深我們對(duì)ITP發(fā)病機(jī)制的理解。方法運(yùn)用免疫學(xué)上的抗原模擬原理,分離純化Wistar大鼠的血小板來定期免疫CBA/Ht小鼠,建立主動(dòng)免疫型ITP模型；對(duì)照組小鼠僅注射0.9%氯化鈉溶液。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)小鼠中各血細(xì)胞變化；取骨髓涂片染色觀察髓象巨核細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征；取骨髓組織切片行電鏡觀察骨髓巨核細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組小鼠在接受大鼠血小板初次免疫后的第二周開始出現(xiàn)下降的趨勢(shì),并在第4周時(shí)達(dá)到最低點(diǎn)(P0.01),從第5周開始逐漸回升,第2-5周實(shí)驗(yàn)組小鼠外周血血小板數(shù)量與對(duì)照組小鼠之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。建模過程中實(shí)驗(yàn)組小鼠血小板平均體積(mean platelet volume, MPV)出現(xiàn)升高,第二、四、五周實(shí)驗(yàn)組小鼠血小板平均體積較對(duì)照組小鼠結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),白細(xì)胞、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果變化與對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。骨髓涂片細(xì)胞學(xué)檢查示實(shí)驗(yàn)組小鼠髓象中巨核細(xì)胞較對(duì)照組顯著增生,且不成熟巨核細(xì)胞比例明顯升高(P0.001),而產(chǎn)血小板巨核細(xì)胞比例明顯減低(P0.001)。骨髓組織超薄切片行電鏡檢查顯示實(shí)驗(yàn)組小鼠巨核細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)較對(duì)照組具有明顯的成熟障礙及產(chǎn)板功能不良表現(xiàn),主要特征為核分葉不能,‘分界膜系統(tǒng)(demarcation membrane system, DMS)擴(kuò)張或數(shù)量減少、細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)較多空泡且邊緣區(qū)域較致密,漿內(nèi)血小板顆粒、線粒體及高爾基體等細(xì)胞器減少。結(jié)論該主動(dòng)免疫型ITP小鼠模型中觀察到的血象及骨髓象特點(diǎn)與人類ITP臨床表現(xiàn)相似,提示模型建立成功。此種主動(dòng)免疫型ITP小鼠模型相對(duì)以往的被動(dòng)免疫建模法能更好的模擬人類ITP疾病的過程和病理特征,且價(jià)格低廉,方便可行。在模型中觀測(cè)到的骨髓巨核細(xì)胞的數(shù)量、形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)的異常改變?yōu)槲覀冞M(jìn)一步揭示了該模型中巨核細(xì)胞層面存在成熟障礙及產(chǎn)板功能不佳,與人類ITP中觀察到的特點(diǎn)相似,可能成為科學(xué)實(shí)驗(yàn)中評(píng)價(jià)療效的新靶點(diǎn)。該模型有助于我們深入了解ITP的發(fā)病機(jī)制,同時(shí)為細(xì)胞免疫機(jī)制研究及進(jìn)行針對(duì)性的相關(guān)治療評(píng)估提供了更好的實(shí)驗(yàn)平臺(tái),具有重要的應(yīng)用前景和臨床價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R558.2;R-332
【目錄】：

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