本文關(guān)鍵詞：冠心病合并高血壓1號(hào)染色體高密度掃描易感基因關(guān)聯(lián)分析

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【摘要】：目的：冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(coronary artery disease, CAD)是一種由環(huán)境和遺傳因素共同作用引起的復(fù)雜性多基因遺傳疾病,嚴(yán)重威脅著人類的健康,針對(duì)冠心病易感基因的研究一直備受重視。原發(fā)性高血壓(essential hypertension, EH)作為冠心病的重要病因之一,也是一種多基因遺傳疾病,通過(guò)損傷血管內(nèi)皮引發(fā)炎癥反應(yīng)導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的形成。提示兩者之間可能存在共同的易感基因和發(fā)病機(jī)制。但是由于兩種疾病均具有復(fù)雜遺傳疾病的特點(diǎn),如未知、復(fù)雜的遺傳模式,遺傳異質(zhì)性,及表型異質(zhì)性等,迄今為止,對(duì)高血壓誘發(fā)冠心病機(jī)制的研究,大多集中在蛋白質(zhì)-核酸水平,兩者之間的分子遺傳學(xué)機(jī)制仍不十分清楚。本研究將DNA混合池(DNA pooling)方法與芯片技術(shù)相結(jié)合,通過(guò)高密度篩查及關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)冠心病及高血壓的易感基因并探求兩者之間的聯(lián)系。方法：1.選取在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院心內(nèi)科住院并經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影確診的冠心病合并高血壓患者作為病例組,共115例；山東省血液中心的健康獻(xiàn)血者作為對(duì)照組,共1,000例；此外,冠心病合并高血壓重復(fù)驗(yàn)證組,共115例；原發(fā)性高血壓驗(yàn)證組,共450例；冠心病合并高血壓合并糖尿病合并血脂異常驗(yàn)證組,共146例；冠心病綜合驗(yàn)證組,共607例。研究對(duì)象均已進(jìn)行知情告知,且個(gè)體之間無(wú)血緣關(guān)系。2.采集外周靜脈血5ml,經(jīng)EDTA抗凝,使用Lab-Aid核酸(DNA)分離試劑盒,及Lab-Aid 820核酸自動(dòng)提取儀,用磁珠法提取全血DNA。用NANODROP 2000超微量核酸蛋白測(cè)定儀(Thermo scientific,美國(guó))檢測(cè)DNA樣本濃度。用三蒸水將所有DNA樣品稀釋至終濃度10ng/μl,每份濃度為10ng/μl的DNA溶液中取10μl進(jìn)行混合,最終濃度仍為10ng/μl。建立兩組DNA混合池樣本,分別為115例冠心病合并高血壓患者組和1,000例正常人對(duì)照組。3.經(jīng)過(guò)DNA酶切、連接及擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物純化和定量,PCR產(chǎn)物片段化及PCR產(chǎn)物標(biāo)記和雜交,然后用Array Holding Buffer 對(duì)人類 SNP6.0芯片(Affymetrix Genome-Wide Human SNP Array 6.0)進(jìn)行清洗,最后在Affymetrix 7G芯片掃描儀(AFFX,美國(guó))中進(jìn)行樣本掃描。4.統(tǒng)計(jì)分析,應(yīng)用Genotyping Console軟件對(duì)掃描后數(shù)據(jù)進(jìn)行基因分型,得到全基因組等位基因圖譜,比較病例組與對(duì)照組的各SNP位點(diǎn)的等位基因頻率并進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。最終得到有差異的SNP位點(diǎn)等位基因型,初步的拷貝數(shù)(copy number, CN)和關(guān)聯(lián)分析(association analysis)結(jié)果。結(jié)果：本次研究,共得到1號(hào)染色體上71,480個(gè)SNP位點(diǎn)的基因分型數(shù)據(jù),其中5個(gè)SNP位點(diǎn)與冠心病合并高血壓高度相關(guān)(p≤6.96×10-8),分別為rs12120090(1p31.1)、rs2788417(1p13.2)、rs17347980(1q32.1)、rs17018933(1q32.3)和rs1218660(1q43)。在對(duì)該結(jié)果的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中同樣發(fā)現(xiàn)這5個(gè)位點(diǎn)與冠心病合并高血壓密切相關(guān)。并且發(fā)現(xiàn)這5個(gè)位點(diǎn)不僅與冠心病合并高血壓相關(guān),也與糖尿病等危險(xiǎn)因素關(guān)系密切。此外,這5個(gè)位點(diǎn)附近相應(yīng)的基因分別為ELTD1、 CTTNBP2NL、NUCKS1、PPP2R5A 和 CHRM3,在中國(guó)漢族人群中與冠心病的關(guān)聯(lián)報(bào)道尚屬首次。結(jié)論：中國(guó)漢族冠心病人群中,rs12120090(1p31.1)、rs2788417(1p13.2)、rs17347980(1q32.1)、rs17018933(1q32.3)和rs1218660(1q43)位點(diǎn)與冠心病合并高血壓病顯著相關(guān)(p≤6.96×10-8),提示其附近的基因可能與冠心病及高血壓易感性有關(guān)。今后,我們將進(jìn)一步精細(xì)定位冠心病的易感基因。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R541.4;R544.1

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本文編號(hào)：1244953