本文關(guān)鍵詞：DFMG對LPC處理巨噬細(xì)胞增殖和TLR4-MyD88信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響

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【摘要】：目的:研究7-二氟甲氧基-5,4’-二甲氧基金雀異黃素(7-difluoromethoxy-5,4’-dimethoxygenistein,DFMG)對LPC處理巨噬細(xì)胞增殖活性和Toll樣受體4(Toll-like receptor 4,TLR4)及下游髓樣分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)信號(hào)傳導(dǎo)的作用。方法:體外培養(yǎng)人單核細(xì)胞(THP-1)系細(xì)胞,佛波酯(PMA)誘導(dǎo)THP-1系細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞。溶血性磷脂酰膽堿(Lysophosphatidylcholine,LPC:3.0、10.0、30.0、100.0μM)孵育巨噬細(xì)胞12h,制備LPC處理巨噬細(xì)胞模型。分別給予不同劑量的DFMG(0.3、1.0、3.0μM)孵育LPC處理巨噬細(xì)胞模型不同時(shí)間段(6h、12h、24h、48h),同時(shí),設(shè)模型對照組和溶媒對照組,用CCK-8法檢測細(xì)胞增殖活性。DFMG(0.3、1.0、3.0μM)、洛伐他汀(50μM)、TLR4拮抗劑(1μg/ml)、LPS(1μg/ml)分別作用LPC處理巨噬細(xì)胞模型12h,另設(shè)溶媒對照組,收集細(xì)胞培養(yǎng)液上清,ELISA法檢測人腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-alpha,TNF-α)的表達(dá)。用DFMG(3.0μM)、洛伐他汀(50μM)、TLR4拮抗劑(1μg/ml)、LPS(1μg/ml)分別作用LPC處理巨噬細(xì)胞模型12h,另設(shè)溶媒對照組,收集細(xì)胞,Western blotting檢測TRL4、My D88蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.PMA150 n M誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞24h,其分化為巨噬細(xì)胞的百分率(39.67±0.05)%,顯著高于未處理組(0.55±0.19)%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),因此,選用150 n M為PMA誘導(dǎo)源自THP-1細(xì)胞系巨噬細(xì)胞的濃度。2.不同濃度LPC(3.0、10.0、30.0、100.0μM)處理巨噬細(xì)胞12h,臺(tái)盼藍(lán)拒染法測得巨噬細(xì)胞存活率分別為:(95.83±2.08)%、(86.17±2.62)%、(52.43±1.59)%、(38.19±1.20)%,與細(xì)胞對照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。3.CCK-8試劑盒檢測結(jié)果顯示:與細(xì)胞對照組相比,30.0μM LPC抑制細(xì)胞增殖活性(P0.05)。選擇LPC30.0μM作為LPC處理巨噬細(xì)胞模型的造模濃度。4.DFMG以時(shí)間和濃度依賴方式增高LPC處理巨噬細(xì)胞增殖活性。5.ELISA結(jié)果顯示:DFMG以濃度依賴方式降低LPC處理巨噬細(xì)胞培養(yǎng)液TNF-α濃度(P0.001)。6.Western blotting結(jié)果顯示:30.0μM LPC、1μg/ml LPS作用于巨噬細(xì)胞12h,上調(diào)巨噬細(xì)胞TLR4、My D88蛋白表達(dá)(P0.001)。7.3.0μM DFMG與TLR4拮抗劑處理抑制LPC上調(diào)巨噬細(xì)胞TLR4、My D88蛋白的表達(dá)作用(P0.001)。結(jié)論:1.LPC抑制巨噬細(xì)胞增殖活性、增加TNF-α分泌,并上調(diào)TLR4、My D88蛋白表達(dá)。2.DFMG能有效對抗LPC抑制巨噬細(xì)胞增殖作用及拮抗LPC誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞TNF-α分泌效應(yīng)。3.DFMG拮抗LPC抑制巨噬細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)TNF-α分泌作用與其抑制TLR-4-My D88信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R543.5

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