發(fā)布時(shí)間：2017-11-13 04:11

  本文關(guān)鍵詞：大鼠血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化前后NCX1表達(dá)變化的研究

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【摘要】：目的：通過(guò)培養(yǎng)SD大鼠的血管平滑肌細(xì)胞并對(duì)其進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng),建立血管平滑肌細(xì)胞由收縮型轉(zhuǎn)為分泌型的模型,探討兩種不同功能型態(tài)下血管平滑肌細(xì)胞中NCX1的表達(dá)變化規(guī)律。方法：使用組織貼塊法培養(yǎng)SD大鼠血管平滑肌細(xì)胞,同時(shí)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的細(xì)胞學(xué)形態(tài),并使用免疫組化檢測(cè)細(xì)胞種類與細(xì)胞純度。在細(xì)胞培養(yǎng)到第二代的時(shí)候使用誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞由收縮型轉(zhuǎn)為分泌型。而后分別使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)及Western blotting檢測(cè)細(xì)胞在表型轉(zhuǎn)化前后NCX1的mRNA及蛋白分子的表達(dá)變化規(guī)律。結(jié)果：1.經(jīng)由(20%FBS+80%高糖DMEM培養(yǎng)基)及(10%FBS+45%高糖DMEM+45%Ham'sF 12誘導(dǎo)培養(yǎng)基)培養(yǎng)SD大鼠血管平滑肌細(xì)胞均成功的獲得目的平滑肌細(xì)胞,倒置顯微鏡形態(tài)學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)多樣,細(xì)胞生長(zhǎng)一定周期后呈典型的“峰谷樣”排列。經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)的SD大鼠血管平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)更加快速,形態(tài)更加多樣,細(xì)胞經(jīng)胰酶消化時(shí)更易懸浮。2.經(jīng)特異的平滑肌α肌動(dòng)蛋白免疫熒光組化染色后,熒光顯微鏡下可見(jiàn)胞質(zhì)內(nèi)大量發(fā)出綠色熒光、與細(xì)胞長(zhǎng)軸平行的纖維細(xì)絲,即平滑肌α肌動(dòng)蛋白絲,細(xì)胞核被染色劑染成藍(lán)靛色居于細(xì)胞中央中,免疫組化結(jié)果證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞為血管平滑肌細(xì)胞。隨機(jī)連續(xù)計(jì)數(shù)500個(gè)視野中的處理細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)有483個(gè)細(xì)胞α肌動(dòng)蛋白表達(dá)陽(yáng)性,約占操作細(xì)胞數(shù)量的96%,顯示所培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞純度為96%,符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞純度的要求。3.使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)分泌型血管平滑肌細(xì)胞中NCX1的mRNA的量明顯多于收縮型血管平滑肌細(xì)胞中NCX1 mRNA的量(P0.05),高出范圍約為30%。4.使用western blot技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)分泌型血管平滑肌細(xì)胞中NCX1的表達(dá)分子量明顯多于收縮型血管平滑肌細(xì)胞中NCX1的表達(dá)分子量(P0.05)。結(jié)論：1.使用組織貼塊法能成功培養(yǎng)出符合純度要求的血管平滑肌細(xì)胞。2.經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)后,血管平滑肌細(xì)胞由收縮型轉(zhuǎn)型成了分泌型(增殖型)。3.血管平滑肌細(xì)胞在轉(zhuǎn)型為分泌型后,NCX1在mRNA水平的表達(dá)量出現(xiàn)了明顯的升高,相對(duì)于同代VSMC,其升高率約為32%,且該變化不隨細(xì)胞代數(shù)的升高而轉(zhuǎn)變。4.血管平滑肌細(xì)胞在轉(zhuǎn)型為分泌型后其NCX1的蛋白分子表達(dá)量也出現(xiàn)了明顯的升高,升高率約38%。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R54

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1179030