發(fā)布時(shí)間：2017-10-24 19:06

  本文關(guān)鍵詞：AMPK對(duì)低氧誘導(dǎo)血管生成作用的研究

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【摘要】：目的：建立簡(jiǎn)單有效且重復(fù)性高的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical VeinEndothelial Cells，HUVECs)體外原代培養(yǎng)及傳代技術(shù)，，并對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。探討低氧條件下AMPK對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞血管生成的影響，為缺血性疾病的治療提供相應(yīng)的理論基礎(chǔ)。 方法：HUVECs的原代分離培養(yǎng)：采用I型膠原酶灌注消化法從臍靜脈分離內(nèi)皮細(xì)胞，并用人第Ⅷ因子相關(guān)抗原抗體免疫熒光染色法進(jìn)行鑒定。通過(guò)MTT檢測(cè)低氧對(duì)細(xì)胞活性的影響；采用蛋白免疫印跡法檢測(cè)空白對(duì)照組與低氧處理組p-AMPK/AMPK蛋白的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)分為5組：空白組、低氧組(0.2mM CoCl2)、低氧+Compound C(20μM)、低氧+C75(10μM)和正常+VEGF(100ng/ml)組。劃痕試驗(yàn)檢測(cè)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力；小管形成實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞體外血管形成能力。 結(jié)果：第Ⅷ因子相關(guān)抗原抗體免疫熒光檢測(cè)：細(xì)胞核為藍(lán)色，胞質(zhì)內(nèi)有紅色的染色顆粒；而對(duì)照組(PBS液)胞質(zhì)內(nèi)無(wú)紅色的染色顆粒，呈陰性反應(yīng)。確定低氧模型CoCl2的濃度為0.2mM，建立了較好的低氧實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�。低氧處理較正常培養(yǎng)的人臍靜脈細(xì)胞其AMPK磷酸化水平有明顯的增高，與正常組相比，低氧組可以誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和小管形成能力(p0.05)，給予AMPK相關(guān)抑制劑能抑制低氧誘導(dǎo)的遷移和小管形成能力(p0.05)。 結(jié)論：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，低氧可激活A(yù)MPK的磷酸化，促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和血管生成。
【關(guān)鍵詞】：AMPK 缺血 血管生成 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：湖北科技學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R543
【目錄】：

• 縮略詞5-6
• 中文摘要6-7
• Abstract7-8
• 前言8-10
• 材料與方法10-14
• 實(shí)驗(yàn)方法14-20
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-25
• 討論25-27
• 結(jié)論27-28
• 參考文獻(xiàn)28-32
• 綜述32-40
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 致謝40

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本文編號(hào)：1090097