發(fā)布時(shí)間：2017-10-07 17:18

  本文關(guān)鍵詞：Caveolin-1調(diào)節(jié)大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞接觸性抑制在肝肺綜合征中的作用研究

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【摘要】：背景和目的:肝-肺綜合癥(Hepatopulmonary syndrome,HPS)是臨床上一種危重的并發(fā)癥,主要包括晚期肝病、低氧血癥和肺內(nèi)血管擴(kuò)張(intrapulmonary vaso dilatation,IPVD)等特征。其中肝硬化病人合并HPS占其總數(shù)的32%,明顯增加其死亡率。到現(xiàn)在為止,HPS發(fā)生發(fā)展的具體機(jī)制尚未研究清楚,肝移植仍然是唯一有效的治療措施。多種因素參與HPS的發(fā)病機(jī)制。其中肺微血管擴(kuò)張促進(jìn)肺微血管重塑和低氧血癥。而PMVECs接觸抑制減弱和增殖可能在HPS肺微血管擴(kuò)張中發(fā)揮了重要作用。嚴(yán)重肝病致大量細(xì)胞因子如內(nèi)皮素-1(Endothelin-1,ET-1),腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等釋放入血循環(huán)中,激活或增加引起肺微血管內(nèi)皮增殖相關(guān)的信號(hào)通路中的相關(guān)蛋白的表達(dá)。然而HPS血清刺激的PMVECs接觸性抑制作用發(fā)生顯著減弱變化的機(jī)制尚不清楚。Caveolin-1是細(xì)胞膜表面上的重要結(jié)構(gòu)和功能蛋白,在caveolin-1的N端存在一個(gè)特殊CSD結(jié)構(gòu)域,這個(gè)CSD結(jié)構(gòu)域能綁定多個(gè)信號(hào)蛋白調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附、增殖、遷移及凋亡,但是Caveolin-1在慢性膽總管結(jié)扎(common bile duct ligation,CBDL)大鼠血清誘導(dǎo)PMVECs接觸抑制減弱,促進(jìn)其增殖的機(jī)制仍然不明確。我們?cè)谇捌趯?shí)驗(yàn)過程中病理解剖CBDL大鼠肺臟發(fā)現(xiàn)其肺部微血管發(fā)生增厚、明顯擴(kuò)張的表現(xiàn)。而用HPS大鼠血清刺激的PMVECs出現(xiàn)復(fù)層增長的趨勢(shì),同時(shí)其接觸性抑制作用減弱。目前,在研究接觸性抑制作用較多集中在腫瘤研究方面。而ve-cadherin作為細(xì)胞間黏附體結(jié)構(gòu)的重要組成部分在接觸性抑制方面發(fā)揮了重要的作用。Caveolin-1是細(xì)胞膜上多種信號(hào)通路如增長、凋亡等的樞紐中心,它能通過相關(guān)的信號(hào)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞間黏附結(jié)構(gòu)體的穩(wěn)定性,最終對(duì)細(xì)胞接觸性抑制進(jìn)行調(diào)控。于是我們假設(shè)caveolin-1調(diào)節(jié)PMVECs接觸性抑制大鼠在HPS的發(fā)展有可能發(fā)揮重要的作用。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谘芯縃PS大鼠血清誘導(dǎo)下大鼠PMVECs發(fā)生接觸性抑制作用減弱及探索caveolin-1調(diào)節(jié)HPS大鼠血清誘導(dǎo)的大鼠PMVECs接觸性抑制作用減弱的機(jī)制。膽總管結(jié)扎術(shù)后膽汁性肝硬化門靜脈高壓癥誘導(dǎo)大鼠hps的形成,然后,提取其血清刺激pmvecs,檢測(cè)其黏附指數(shù)及caveolin-1和ve-cadherin的表達(dá),探索hps的發(fā)病機(jī)制。方法:實(shí)驗(yàn)分為三部分1.建hps大鼠模型,收集血清。cbdl法構(gòu)建hps大鼠模型,建模成功的標(biāo)準(zhǔn)為其腹主動(dòng)脈血血?dú)夥治鰌ao285mmhg(1mmhg=0.133kpa)且a-ado218mmhg,術(shù)后2周收集其血清。2.檢測(cè)hps大鼠血清對(duì)正常sd(spraguedawley,sd)大鼠pmvecs接觸性抑制作用的影響。用組織塊貼壁法原代培養(yǎng)pmvecs。正常sd大鼠(1月齡),取肺,用生理鹽水灌注后剪下其邊緣1cm組織行pmvecs原代培養(yǎng)、純化及鑒定。將第4-9代pmvecs隨機(jī)分成2組:hps干預(yù)組(hps組)和對(duì)照組(c組),于12、24和36h(t1、t2、t3)時(shí)間點(diǎn),用cck-8法分別檢測(cè)pmvecs的黏附指數(shù)和增殖情況。3.于12、24和36h(t1、t2、t3)時(shí)間點(diǎn)用westernblot法分別檢測(cè)hps組和c組中caveolin-1和ve-cadherin蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1).hps大鼠模型構(gòu)建成功,其取其腹主動(dòng)脈血?dú)夥治鍪緋ao285mmhg且a-ado218mmhg并成功收集其hps鼠血清。2).原代pmvecs培養(yǎng)成功,hps大鼠血清降低細(xì)胞間的黏附指數(shù),使pmvecs接觸抑制作用減弱,增殖能力增高。3).與c組比較,hps組在t1、t2、t3時(shí)相點(diǎn)pmvecs中的caveolin-1和ve-cadherin蛋白表達(dá)均下調(diào)。結(jié)論:1.pmvecs在hps大鼠血清的刺激下,其細(xì)胞間黏附指數(shù)下降提示細(xì)胞增殖加快,PMVECs的接觸性抑制作用減弱。2.HPS大鼠血清的刺激的PMVECs中的caveolin-1和ve-cadherin蛋白表達(dá)均下調(diào),提示caveolin-1和ve-cadherin可能參與PMVECs接觸性抑制作用減弱的調(diào)節(jié)。
【關(guān)鍵詞】：HPS 血清 增殖 黏附指數(shù) PMVECs 小窩蛋白-1 鈣黏素
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575;R56
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 肝肺綜合征大鼠血清對(duì)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞接觸性抑制的影響13-26
• 2.1 構(gòu)建肝肺綜合大鼠模型和收集血清13-19
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法13-16
• 2.1.2 結(jié)果16-17
• 2.1.3 討論17-19
• 2.2 HPS大鼠血清對(duì)正常SD大鼠肺肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞接觸性抑制作用的影響19-26
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法19-21
• 2.2.2 結(jié)果21-23
• 2.2.3 討論23-26
• 第三章 caveolin-1/ve-cadherin在肝肺綜合征中大鼠血清誘導(dǎo)的肺肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞接觸性抑制減弱作用中的研究26-31
• 3.1 材料與方法26-28
• 3.2 結(jié)果28-29
• 3.3 討論29-31
• 全文討論31-33
• 全文總結(jié)33-34
• 參考文獻(xiàn)34-40
• 文獻(xiàn)綜述 接觸性抑制作用的研究進(jìn)展40-49
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果49-50
• 致謝50

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 黎尚榮;沈?qū)?易慧敏;甘小亮;黑子清;;肝肺綜合征病人體肺循環(huán)及血漿iNOS、ET-1水平變化[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年10期

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本文編號(hào)：989091