本文關(guān)鍵詞：苯扎貝特對(duì)PBC患者外周血單核細(xì)胞的作用研究

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【摘要】：原發(fā)性膽汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis,PBC)是機(jī)體免疫耐受失控、自身免疫應(yīng)答過高引起的肝臟自身免疫性疾病。熊去氧膽酸(Ursodeoxycholic acid, UDCA)是目前治療PBC的一線藥物,但仍有一部分患者對(duì)UDCA無應(yīng)答。越來越多的臨床報(bào)告顯示苯扎貝特(Bezafibrate,BF)以其良好的治療效果和較小的副作用開始走進(jìn)臨床PBC患者的治療中,但其對(duì)于PBC疾病的具體作用機(jī)制尚缺乏系統(tǒng)的研究。固有免疫是機(jī)體防御及獲得性免疫應(yīng)答的基礎(chǔ),單核細(xì)胞作為其中主要的效應(yīng)細(xì)胞,以其特有的表型特征及功能特點(diǎn)在PBC的發(fā)病過程中擔(dān)任著重要的角色,我們前期對(duì)PBC患者外周血單核細(xì)胞的研究結(jié)果顯示PBC中存在單核細(xì)胞亞群的失衡,其與肝損傷、炎癥指標(biāo)及Thl細(xì)胞的分化均密切相關(guān)。因此,BF能否作用于單核細(xì)胞上,從機(jī)體過度免疫應(yīng)答觸發(fā)的早期阻止PBC的進(jìn)一步發(fā)展?目前還沒有相關(guān)的研究報(bào)道。目的：觀察BF對(duì)PBC患者外周血中單核細(xì)胞表型和功能的影響,及BF是否能通過調(diào)控單核細(xì)胞從而進(jìn)一步影響CD4+T細(xì)胞分化,并且探討其潛在的分子機(jī)制,為BF抗PBC的研究提供一個(gè)新的視角和實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。方法：1.采集PBC患者外周血20m1,分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell.PBMC),進(jìn)一步分選出CD14+單核細(xì)胞,以不加藥處理作為對(duì)照組,其余分別加入不同濃度的BF (50μM、100μM、200μM)培養(yǎng)48h,RT-PCR技術(shù)檢測CD16、TNF-α、IL-1β、IL-6各mRNA水平的表達(dá),流式細(xì)胞術(shù)檢測單核細(xì)胞CD16、 CD80、CD86和HLA-DR的表達(dá)頻率及細(xì)胞凋亡情況。2.分離PBC患者的PBMC,從中分選出CD14+單核細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞,將BF預(yù)處理組與未經(jīng)BF處理的CD14+單核細(xì)胞分別與CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng),流式細(xì)胞術(shù)檢測IFN-γ +CD4+T(Thl)細(xì)胞、IL-17+CD4+T (Th17)細(xì)胞比例及Ki-67+CD4+T細(xì)胞頻率；采用Transwell細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)重復(fù)上述共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),流式細(xì)胞術(shù)檢測Thl細(xì)胞頻率；RT-PCR檢測BF作用下單核細(xì)胞中IL-12p35、IL-12p40和IL-18各mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果：1.BF在本實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)對(duì)PBC患者外周血中單核細(xì)胞無明顯的細(xì)胞毒性(P0.05)：2.BF呈濃度依賴性抑制PBC患者單核細(xì)胞上CD16的mRNA水平和蛋白水平(P0.05),尤其在200uM的BF干預(yù)濃度下,二者的抑制率分別為44%和58%；3.BF呈濃度依賴性抑制PBC患者單核細(xì)胞促炎因子,如TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平(P0.01),在200μ M濃度的處理下,其抑制程度分別為49%、53%和42%：4.各濃度BF對(duì)PBC患者單核細(xì)胞共刺激分子,如CD80、CD86和HLA-DR的表達(dá)無明顯影響(P0.05)；5.各濃度BF處理下,單核細(xì)胞均沒有發(fā)生明顯的凋亡現(xiàn)象(P0.05)；6.BF不能通過調(diào)控單核細(xì)胞而間接影響CD4+T細(xì)胞的增殖(P0.05)；7.BF通過調(diào)控單核細(xì)胞而間接抑制Thl細(xì)胞的分化(P0.05),但對(duì)Th17細(xì)胞分化無影響(P0.05)；8.對(duì)于Thl細(xì)胞的分化情況,無論是對(duì)照組還是BF預(yù)處理組,直接接觸與間接接觸的共培養(yǎng)方式均沒有明顯的差異(P0.05),兩種培養(yǎng)方式下的BF均可通過調(diào)控單核細(xì)胞抑制Thl細(xì)胞的分化(P0.05)：9.BF抑制PBC患者單核細(xì)胞中IL-12p40和IL-18的mRNA表達(dá)水平(P0.01),而不影響IL-12p35 mRNA(P0.05)。結(jié)論：BF呈濃度依賴性抑制PBC患者外周血單核細(xì)胞CD16及促炎癥因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)的表達(dá),且BF可能通過降低單核細(xì)胞分泌的可溶性分子(IL-12p40和IL-18)進(jìn)一步間接抑制Thl細(xì)胞的分化。
【關(guān)鍵詞】：苯扎貝特 原發(fā)性膽汁性肝硬化 單核細(xì)胞 CD4~+T細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575.2;R446.6
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 引言10-12
• 第一章 文獻(xiàn)研究12-17
• 1.1 原發(fā)性膽汁性肝硬化的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制12-14
• 1.1.1 非特異性免疫12-13
• 1.1.2 特異性免疫13-14
• 1.2 原發(fā)性膽汁性肝硬化的治療進(jìn)展14-16
• 1.2.1 藥物療法14-15
• 1.2.2 肝移植療法15-16
• 1.3 結(jié)語16-17
• 第二章 苯扎貝特對(duì)PBC患者外周血中單核細(xì)胞表型和功能的影響17-28
• 2.1 材料17-18
• 2.1.1 研究對(duì)象17
• 2.1.2 主要試劑17-18
• 2.1.3 主要耗材儀器18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-21
• 2.2.1 藥物的溶解18-19
• 2.2.2 標(biāo)本的采集19
• 2.2.3 分離外周血單個(gè)核細(xì)胞19
• 2.2.4 磁珠分選CD14~+細(xì)胞19
• 2.2.5 CD14~+細(xì)胞加藥培養(yǎng)19
• 2.2.6 CD14~+細(xì)胞總RNA的提取19-20
• 2.2.7 CD14~+細(xì)胞cDNA的合成20
• 2.2.8 引物的設(shè)計(jì)與合成20
• 2.2.9 Real-time PCR檢測20-21
• 2.2.10 流式細(xì)胞術(shù)檢測21
• 2.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析21
• 2.3 結(jié)果21-26
• 2.3.1 BF不影響單核細(xì)胞的活性21-22
• 2.3.2 BF降低單核細(xì)胞CD16的表達(dá)22-24
• 2.3.3 BF抑制單核細(xì)胞促炎細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)水平24-25
• 2.3.4 BF不影響單核細(xì)胞共刺激分子的表達(dá)25-26
• 2.3.5 BF不影響單核細(xì)胞的凋亡26
• 2.4 討論26-28
• 第三章 苯扎貝特預(yù)處理的單核細(xì)胞調(diào)控CD4~+T細(xì)胞分化的研究28-38
• 3.1 材料28-30
• 3.1.1 研究對(duì)象28
• 3.1.2 主要試劑28-29
• 3.1.3 主要耗材儀器29-30
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法30-33
• 3.2.1 標(biāo)本的采集30
• 3.2.2 分離PBMCs30
• 3.2.3 磁珠分選CD14~+細(xì)胞30
• 3.2.4 磁珠分選CD4~+T細(xì)胞30-31
• 3.2.5 細(xì)胞共培養(yǎng)31
• 3.2.6 Transwell細(xì)胞共培養(yǎng)31
• 3.2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測31
• 3.2.8 CD14~+細(xì)胞總RNA的提取31-32
• 3.2.9 CD14~+細(xì)胞cDNA的合成32
• 3.2.10 引物的設(shè)計(jì)與合成32
• 3.2.11 RT-PCR檢測32-33
• 3.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析33
• 3.3 結(jié)果33-36
• 3.3.1 BF不能通過調(diào)控單核細(xì)胞影響CD4~+T細(xì)胞的增殖33-34
• 3.3.2 BF通過調(diào)控單核細(xì)胞間接抑制Th1細(xì)胞的分化34-35
• 3.3.3 BF通過調(diào)控單核細(xì)胞間接抑制Th1細(xì)胞分化,依賴于細(xì)胞分泌的可溶性分子35-36
• 3.3.4 BF通過調(diào)控單核細(xì)胞間接抑制Th1細(xì)胞分化,可能依賴于細(xì)胞分泌的IL-12p40和IL-18的降低36
• 3.4 討論36-38
• 結(jié)語38-39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 附錄44-46
• 在校期間發(fā)表論文情況46-47
• 致謝47

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 鄧日輝;陳穎;黃羽;孫靜;何敏;周丹;曾星;陳曲波;;IL-1β、IL-6和IL-23對(duì)原發(fā)性膽汁性肝硬化患者Th17細(xì)胞形成的影響[J];中國免疫學(xué)雜志;2010年05期

2 陳曲波;彭桉平;黎翠翠;趙蓉;盧欣沂;何敏;周麗敏;吳煒霖;;苯扎貝特對(duì)原發(fā)性膽汁性肝硬化患者外周血CD4~+T細(xì)胞的抑制作用研究[J];中國免疫學(xué)雜志;2014年10期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 趙蓉;單核細(xì)胞在PBC中的表型特征及其對(duì)CD4~+T分化的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：981615