本文關(guān)鍵詞：SIRT3在HBx介導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)中的作用

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【摘要】：目的:研究沉默信息調(diào)節(jié)因子3(SIRT3)在乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白介導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)中的重要作用。方法:1.利用熒光探針carboxy-H2DCFDA和流式細(xì)胞術(shù)檢測HBV瞬時表達(dá)和HBV穩(wěn)定復(fù)制的細(xì)胞中活性氧自由基(ROS)的水平,驗(yàn)證HBV對細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的誘導(dǎo)作用。2.利用熒光探針carboxy-H2DCFDA和流式細(xì)胞術(shù)檢測過表達(dá)HBx突變型HBV和過表達(dá)HBx對細(xì)胞中活性氧自由基(ROS)水平的影響,探討HBx在氧化應(yīng)激反應(yīng)中的作用。3.利用Western blot、q RT-PCR檢測分析HBV、HBx對SIRT3蛋白質(zhì)和mRNA表達(dá)水平的影響,并進(jìn)一步利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析HBV/HBx對SIRT3啟動子活性的調(diào)控作用。4.Western blot驗(yàn)證HBx、SIRT3的過表達(dá),通過熒光探針carboxy-H2DCFDA和流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)ROS的水平,GSH/GSSG檢測試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)GSH與GSSG的比例來分析SIRT3對HBV、HBx誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響。5.細(xì)胞免疫熒光、westernblot檢測hbx對細(xì)胞dna損傷標(biāo)志物γ-h2ax形成的影響;dna損傷定量試劑盒檢測hbx對氧化損傷的ap位點(diǎn)形成的影響;并通過檢測γ-h2ax和ap位點(diǎn)進(jìn)一步分析sirt3在hbx導(dǎo)致的氧化損傷中的作用;mts和流式細(xì)胞術(shù)分別分析在氧化應(yīng)激條件下hbx對細(xì)胞存活率和細(xì)胞凋亡的影響,并進(jìn)一步分析sirt3在其中的保護(hù)作用。6.real-timepcr、southernblot檢測氧化劑h2o2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)對hbv復(fù)制水平的影響;real-timepcr、southernblot檢測抗氧化劑nac抑制的氧化應(yīng)激反應(yīng)對hbv復(fù)制水平的影響;real-timepcr、southernblot分析sirt3對h2o2促進(jìn)hbv復(fù)制的影響。結(jié)果:1.hbv穩(wěn)定復(fù)制細(xì)胞和hbv瞬時表達(dá)的細(xì)胞中活性氧自由基的水平明顯增高。2.hbv基因組中hbx突變能明顯降低hbv對氧化應(yīng)激反應(yīng)的誘導(dǎo)作用,hbx過表達(dá)可顯著誘導(dǎo)細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)。3.hbx下調(diào)sirt3的mrna、蛋白質(zhì)表達(dá)水平;hbx明顯抑制sirt3的啟動子活性。4.sirt3拮抗hbx引起細(xì)胞活性氧自由基水平增加和gsh/gssg比例失衡。5.hbx表達(dá)增加了γ-h2ax和ap位點(diǎn)的形成,sirt3過表達(dá)減弱hbx對γ-h2ax和ap位點(diǎn)形成的促進(jìn)作用;氧化應(yīng)激條件下hbx表達(dá)降低了細(xì)胞存活率,誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡,SIRT3過表達(dá)減弱了HBx對細(xì)胞存活和凋亡的影響。6.氧化劑H2O2促進(jìn)HBV的復(fù)制;抗氧化劑NAC抑制HBV的復(fù)制;SIRT3能夠拮抗氧化劑H2O2對HBV復(fù)制的促進(jìn)作用。結(jié)論:SIRT3減弱HBx介導(dǎo)的氧化應(yīng)激對宿主細(xì)胞造成的氧化損傷,并同時能減弱氧化應(yīng)激對HBV復(fù)制的促進(jìn)作用。
【關(guān)鍵詞】：SIRT3 HBx 氧化應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R512.62
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-16
• 1 材料與方法16-43
• 1.1 材料16-25
• 1.2 方法25-43
• 2 結(jié)果43-62
• 2.1 HBV誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)43-46
• 2.2 HBx是重要的氧化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白46-49
• 2.3 HBV/HBx下調(diào)SIRT3 的表達(dá)水平49-53
• 2.4 SIRT3 拮抗HBx誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)53-55
• 2.5 SIRT3 拮抗HBx誘導(dǎo)的氧化損傷55-58
• 2.6 SIRT3 通過氧化應(yīng)激調(diào)控HBV的復(fù)制58-62
• 討論62-66
• 全文總結(jié)66-67
• 參考文獻(xiàn)67-72
• 文獻(xiàn)綜述72-82
• 參考文獻(xiàn)77-82
• 致謝82-83
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文83

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 Hong Kim;Seoung-Ae Lee;You-Sub Won;Hyun Joo Lee;Bum-Joon Kim;;Occult infection related hepatitis B surface antigen variants showing lowered secretion capacity[J];World Journal of Gastroenterology;2015年06期

2 Evangelista Sagnelli;Tommaso Stroffolini;Alfonso Mele;Michele Imparato;Caterina Sagnelli;Nicola Coppola;Piero Luigi Almasio;;Impact of comorbidities on the severity of chronic hepatitis B at presentation[J];World Journal of Gastroenterology;2012年14期

3 Hye-Lin Ha;Hye-Jun Shin;Mark A Feitelson;Dae-Yeul Yu;;Oxidative stress and antioxidants in hepatic pathogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2010年48期

4 ;Reactive oxygen species: A double-edged sword in oncogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2009年14期

5 Ichiro Shimizu;Nao Kohno;Katsuyoshi Tamaki;Masayuki Shono;;Female hepatology:Favorable role of estrogen in chronic liver disease with hepatitis B virus infection[J];World Journal of Gastroenterology;2007年32期

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本文編號：949608