本文關(guān)鍵詞：表皮形態(tài)發(fā)生素在HIV與HCV共感染肝纖維化中的作用及機(jī)制

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【摘要】：一、研究背景目前,在全球公共衛(wèi)生領(lǐng)域,HIV感染與HCV感染都嚴(yán)重威脅人類健康。由于具有相同的傳播途徑,HIV與丙型肝炎病毒(HCV)共感染非常普遍。在AIDS患者中,與HCV的共感染率可達(dá)25%,共感染率隨感染途徑而異,在靜脈藥癮患者中HIV/HCV共感染率約為60%。高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)改變了HIV感染的自然史,使大部分機(jī)會性感染的發(fā)生率明顯下降。HIV感染者生存期明顯延長,對于共感染者來說,HCV引起的肝炎、肝纖維化以及肝硬化已成為影響其發(fā)病和死亡的重要原因之一。目前,HIV/HCV共感染患者肝損傷進(jìn)展的機(jī)制尚未完全明確。人表皮形態(tài)發(fā)生素(Epimorphin, EPM, Syntaxin-2)在正常肝臟主要表達(dá)于肝竇狀隙的肝星狀細(xì)胞(Hepatic stellate cells, HSCs)、匯管區(qū)的膽管與血管細(xì)胞,通過表皮與間質(zhì)之間的相互作用調(diào)控表皮形態(tài)。在肝臟發(fā)育的過程中,HSCs主要通過自身表面特異性表達(dá)的EPM與肝臟干細(xì)胞直接接觸而促進(jìn)肝干細(xì)胞的定向功能性分化。前期,有報道發(fā)現(xiàn)在肝癌、乳腺癌、腸癌等腫瘤性疾病中,EPM也發(fā)揮了重要作用。目前,EPM在HIV/HCV共感染患者中肝纖維化快速進(jìn)展過程中的作用及相關(guān)機(jī)制還不甚明確。二、研究目的：考察HIV/HCV共感染后EPM的表達(dá)變化,研究EPM是否能夠影響肝纖維化進(jìn)展以及其相關(guān)分子機(jī)制。三、主要研究內(nèi)容與方法：1. HIV/HCV對肝星狀細(xì)胞(Hepatic stellate cell, HSC)的影響分別將HSC分為四組(對照組、HIV感染組、HCV感染組、HIV/HCV共感染組),分別通過細(xì)胞周期實驗與Transwell實驗,檢測共感染對HSCs增殖與遷移能力的影響。2. HIV/HCV對肝星狀細(xì)胞基因表達(dá)的影響通過realtime-PCR、western blot檢測HIV/HCV共感染對HSC基因表達(dá)影響,相關(guān)基因表達(dá)包括α-SMA、Collagen Ⅳ、TGF-β、EPM等。3.EPM表達(dá)變化對HSC的影響通過構(gòu)建過表達(dá)與干涉表達(dá)EPM的肝星狀細(xì)胞,考察EPM對HSCs增殖與遷移的影響以及肝纖維化相關(guān)基因的影響。4.EPM影響肝纖維化進(jìn)展的機(jī)制研究使用Western Blot方法檢測肝纖維化相關(guān)基因的變化,EPM相關(guān)信號通路的變化,以及EPM調(diào)控的功能基因的變化,證明EPM影響肝纖維化進(jìn)展的因素。四、實驗結(jié)果：1.HIV//HCV共感染促進(jìn)肝星狀細(xì)胞增殖、遷移HSC的增殖與遷移對于肝纖維化及進(jìn)展有重要作用。我們分別將HSC分為四組(對照組、HIV感染組、HCV感染組、HIV/HCV共感染組),通過細(xì)胞周期實驗、MTT實驗以及Transwell實驗發(fā)現(xiàn)HIV/HCV共感染組HSCs的增殖與遷移能力明顯升高。2.HIV/HCV共感染促進(jìn)肝星狀細(xì)胞高表達(dá)EPM、TGF-β、α-SMA、 Collagen Ⅳ的表達(dá)為了檢測共感染后肝星狀細(xì)胞基因表達(dá)的變化,我們通過Q-CPR和WestenBlot實驗證明HIV/HCV共感染能夠影響肝星狀細(xì)胞的多種基因表達(dá)。EPM作為肝內(nèi)肝星狀細(xì)胞特異表達(dá)的蛋白也同時發(fā)生了上調(diào)。3.EPM對于肝星狀細(xì)胞的影響為了研究EPM對于肝星狀細(xì)胞的影響,我們對干涉及過表達(dá)EPM星狀細(xì)胞的增殖與遷移能力進(jìn)行了檢測。EPM沉默之后,肝星狀細(xì)胞的增殖和遷移能力明顯下降。而過表達(dá)EPM后,肝星狀細(xì)胞的增殖和遷移能力明顯上升。因此,肝臟微環(huán)境中星狀細(xì)胞高表達(dá)的EPM能夠促進(jìn)自身的增殖與遷移,從而促進(jìn)肝纖維化的進(jìn)展。4.EPM通過TIMP-1促進(jìn)肝纖維化的進(jìn)展為了進(jìn)一步研究EPM促進(jìn)肝纖維化進(jìn)展的分子機(jī)制,我們檢測了EPM對基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)及其抑制劑家族(TIMPs)表達(dá)的影響。我們發(fā)現(xiàn)HIV/HCV共感染可以抑制MMP-3的表達(dá),同時促進(jìn)TIMP-1的表達(dá)。但EPM并不影響MMP-3的表達(dá),但可以促進(jìn)TIMP-1表達(dá)而影響肝纖維化的進(jìn)展。5.EPM通過FAK-ERK信號通路調(diào)控TIMP-1的表達(dá)我們發(fā)現(xiàn)HIV/HCV共感染組FAK-ERK表達(dá)明顯上調(diào),EPM同樣能夠促進(jìn)此信號通路激活。通過ERK抑制劑等實驗發(fā)現(xiàn),ERK抑制后能顯著降低TIMP-1的表達(dá),這證明EPM調(diào)控TIMP-1是通過FAK-ERK實現(xiàn)的。綜上所述,本課題通過考察HIV與HCV共感染后肝星狀細(xì)胞表達(dá)EPM的變化,并進(jìn)一步研究了其變化后的作用和機(jī)制,證明EPM能夠促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的激活,并且能夠通過FAK-ERK途徑促進(jìn)TIMP-1的表達(dá),從而加快肝纖維化的進(jìn)程。
【關(guān)鍵詞】：HIV/HCV共感染 肝纖維化 肝星狀細(xì)胞 表皮形態(tài)發(fā)生素 FAK-ERK TIMPs
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R512.91;R575.2;R512.63
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 引言12-19
• 第一部分 HIV/HCV共感染對肝星狀細(xì)胞及EPM的影響19-42
• 材料與方法19-30
• 實驗結(jié)果30-39
• 討論39-42
• 第二部分 EPM在HIV/HCV共感染肝纖維化進(jìn)展中的作用及機(jī)制42-61
• 材料與方法42-48
• 實驗結(jié)果48-58
• 討論58-61
• 結(jié)論與展望61-63
• 參考文獻(xiàn)63-68
• 文獻(xiàn)綜述68-80
• 參考文獻(xiàn)73-80
• 附錄 論文主要縮略詞表80-82
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章等情況82-84
• 致謝84-85

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