發(fā)布時間：2017-09-28 04:46

  本文關鍵詞：靜脈注射殼聚糖對大鼠肝纖維化的治療作用

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【摘要】：研究目的 針對殼聚糖特有的理化性質以及當前臨床上并無治療肝纖維化的有效藥物特點[1]。本文以四氯化碳(CCl4)誘導的大鼠肝纖維化模型，探討殼聚糖對肝纖維化大鼠的治療作用，為臨床治療肝纖維化提供備選藥物。 研究方法 選用SD雄性大鼠100只隨機取出15只做空白對照組，剩余85只為CCl4給藥組。采用腹腔注射CCl4和大豆油混合液復制肝纖維化模型。隨機選擇空白對照組大鼠3只，CCl4組大鼠5只觀察大鼠肝組織表面變化，檢測血清中谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）和堿性磷酸酶（ALP）的含量以及肝組織內α-SMA總蛋白和COL3mRNA的表達量，檢驗肝纖維化模型的成功。將余下80只四氯化碳組大鼠隨機分5組，分別為模型組、陽性對照組（甘利欣組）、12.5mg/kg殼聚糖（低劑量組）、25mg/kg殼聚糖（中劑量組）、37.5mg/kg殼聚糖（高劑量組）5組。隨后將6組統(tǒng)一采用尾靜脈注射方式每天一次連續(xù)給藥28天，在給藥7天、14天、21天和28天后分別進行標本采集，檢測血清中ALT、AST和ALP的水平，采用HE染色法常規(guī)病理切片，觀察肝組織改變情況；通過Western Blot檢測肝組織內α-SMA總蛋白含量，利qRT-PCR檢測肝組織COL3mRNA的表達量。 研究結果 殼聚糖連續(xù)尾靜脈注射7天、14天、21天和28天分別檢測大鼠血清中ALT、AST、ALP水平。與模型組比較，其明顯降低，并且低劑量殼聚糖組效果最好。從病理切片可以看出，模型組隨時間變化大鼠肝組織炎癥浸潤明顯，膠原纖維明顯增多，殼聚糖組和甘利欣組隨著時間變化逐漸好轉，并且低劑量殼聚糖組好轉最明顯。Western Blot結果，模型組大鼠肝組織中α-SMA總蛋白含量升高，殼聚糖各組肝組織中α-SMA總蛋白含量均低于模型組，且殼聚糖低劑量組中α-SMA總蛋白含量最低。qRT-PCR結果發(fā)現(xiàn)，殼聚糖可下調COL3的mRNA的表達，，殼聚糖和甘利欣組大鼠肝組織中COL3mRNA的表達與模型組相較明顯降低，且靜脈給予殼聚糖的濃度越大，肝組織中COL3mRNA的表達越多。 研究結論 靜脈注射殼聚糖對大鼠肝纖維化有明顯治療作用，其中12.5mg/kg的殼聚糖對大鼠肝纖維化的治療效果最好。靜脈注射殼聚糖可通過降低血清中ALT、AST、ALP的濃度，抑制肝組織中α-SMA總蛋白的表達，下調肝組織中COL3的mRNA的表達，緩解肝纖維化進程。
【關鍵詞】：肝纖維化 殼聚糖 尾靜脈注射 α-SMA COL3mRNA
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 中英文縮寫對照8-12
• 第一章 文獻綜述12-28
• 1.1 肝纖維化產生機制12-16
• 1.1.1 肝內組織細胞的激活13-15
• 1.1.1.1 枯否細胞13
• 1.1.1.2 肝星狀細胞13-14
• 1.1.1.3 其他細胞14
• 1.1.1.4 細胞外基質14-15
• 1.1.3 細胞因子15-16
• 1.2 肝纖維化診斷16-17
• 1.3 肝纖維化治療17-18
• 1.3.1 細胞保護與細胞因子類藥物17
• 1.3.2 作用于 ECM 類藥物17
• 1.3.3 中藥治療17-18
• 1.3.4 基因治療18
• 1.4 殼聚糖的研究進展18-20
• 1.4.1 甲殼質的發(fā)現(xiàn)與分布18
• 1.4.2 殼聚糖的結構與理化性質18-20
• 1.5 殼聚糖的應用進展20-28
• 1.5.1 生物技術方面20-21
• 1.5.2 醫(yī)藥衛(wèi)生方面21-24
• 1.5.3 日常用品方面24-25
• 1.5.4 農業(yè)方面25-26
• 1.5.5 應用于工業(yè)與環(huán)保方面26-28
• 第二章 材料與方法28-34
• 2.1 實驗材料28-30
• 2.1.1 實驗動物28
• 2.1.2 實驗儀器28-29
• 2.1.3 實驗藥品29
• 2.1.4 引物序列29-30
• 2.2 實驗方法30-33
• 2.2.1 大鼠肝纖維化模型的構建30
• 2.2.2 給藥方法30
• 2.2.3 標本采集30
• 2.2.4 血液中 ALT、AST 和 ALP 的水平檢測30-31
• 2.2.5 肝組織纖維化程度檢測31
• 2.2.6 肝組織 α-SMA 的定量表達檢測31
• 2.2.7 肝組織中Ⅲ型膠原酶的表達檢測31-33
• 2.3 統(tǒng)計學處理33-34
• 第三章 實驗結果34-48
• 3.1 大鼠肝纖維化模型構建34-35
• 3.1.1 肝組織外觀形態(tài)34
• 3.1.2 大鼠血清中 ALT、AST、ALP 的變化34-35
• 3.1.3 大鼠肝組織中 α-SMA 與 COL3mRNA 的表達35
• 3.2 靜脈注射殼聚糖對大鼠肝纖維化的影響35-48
• 3.2.1 大鼠的表觀形態(tài)特征與體重變化35-37
• 3.2.2 血清中 ALT、 AST 和 ALP 的變化37-41
• 3.2.3 大鼠肝組織 HE 染色結果41-42
• 3.2.4 殼聚糖對 CCl4誘導大鼠肝纖維化中 ɑ-SMA 表達影響42-45
• 3.2.5 殼聚糖對 CCl4誘導大鼠肝纖維化中 COL3 的 mRNA 表達影響45-48
• 第四章 討論48-52
• 第五章 結論52-53
• 參考文獻53-59
• 致謝59

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本文編號：933886