本文關(guān)鍵詞：工程化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)小鼠腸炎的治療研究

  更多相關(guān)文章： 間充質(zhì)干細(xì)胞 炎癥性腸病 歸巢 CX3CR1 IL-25

【摘要】：間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)是一種具有自我更新能力和多向分化潛能的成體干細(xì)胞,廣泛存在于人體的多種組織中,能夠從骨髓、脂肪組織、臍帶血和外周血中分離獲得,體外培養(yǎng)時(shí)具有分化為脂肪、成骨、軟骨、肌肉和神經(jīng)元的潛能。由于其在體外易分離培養(yǎng),具有低免疫原性而不會(huì)引起排斥反應(yīng),并能夠歸巢至靶組織調(diào)節(jié)免疫反應(yīng),近年來(lái)在多種疾病的臨床治療中表現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。炎癥性腸病(IBD)是一類(lèi)反復(fù)發(fā)作、難治愈的腸道免疫疾病,主要表現(xiàn)為克羅恩病(Crohn's)和潰瘍性結(jié)腸炎(UC)。作為IBD的新型細(xì)胞療法,外源性MSCs通過(guò)歸巢至腸炎部位,分泌多種細(xì)胞因子促進(jìn)腸道免疫調(diào)節(jié)而發(fā)揮療效,目前已報(bào)道的臨床實(shí)驗(yàn)包括系統(tǒng)性輸入MSCs和局部注射MSCs治療CD肛周瘺管。然而,由于MSCs在體外培養(yǎng)時(shí)容易丟失某些表面分子而影響其歸巢效率,使得遷移至靶組織的MSCs數(shù)量減少且無(wú)法長(zhǎng)期停留以發(fā)揮作用。因此為了提升MSCs對(duì)IBD的治療效率,解決MSCs歸巢效率低的問(wèn)題,我們構(gòu)建工程化骨髓來(lái)源的MSCs (BM-MSCs),并對(duì)小鼠腸炎進(jìn)行了治療研究。我們首先在分離得到的BM-MSCs中轉(zhuǎn)染攜帶趨化因子受體CX3CR1和白細(xì)胞介素-25(IL-25)基因的慢病毒來(lái)構(gòu)建工程化BM-MSCs,鑒定了工程化BM-MSCs的增殖能力及表型,并通過(guò)Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)測(cè)定其體外遷移能力。我們進(jìn)一步將工程化BM-MSCs通過(guò)尾靜脈輸入腸炎小鼠體內(nèi),免疫熒光染色證明其能夠歸巢至腸炎部位。結(jié)腸拍照、體重測(cè)量、疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)評(píng)分、結(jié)腸病理分析、髓過(guò)氧化物酶測(cè)定和檢測(cè)炎癥相關(guān)因子的表達(dá)等實(shí)驗(yàn)證明BM-MSCs的工程化改造可以進(jìn)一步提高其對(duì)小鼠腸炎的治療效率。本文的科學(xué)意義在于成功構(gòu)建了特異性表達(dá)CX3CR1和IL-25的工程化BM-MSCs,通過(guò)趨化因子CX3CL1和其受體CX3CR1的相互作用提高了BM-MSCs的腸道歸巢效率,使到達(dá)腸炎部位的細(xì)胞數(shù)增多,同時(shí)也實(shí)現(xiàn)了調(diào)節(jié)細(xì)胞因子IL-25對(duì)腸道炎癥的治療作用,為提高M(jìn)SCs對(duì)IBD的療效提供了臨床治療新思路。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 炎癥性腸病 歸巢 CX3CR1 IL-25
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R574
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 綜述部分11-47
• 1.1 間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)概述11-23
• 1.1.1 MSCs生物學(xué)特性11-16
• 1.1.2 MSCs歸巢及其歸巢分子16-23
• 1.2 MSCs在臨床中的應(yīng)用23-28
• 1.2.1 疾病治療23-25
• 1.2.2 治療機(jī)制25-27
• 1.2.3 安全性27
• 1.2.4 存在問(wèn)題27-28
• 1.3 MSCs與炎癥性腸病28-35
• 1.3.1 炎癥性腸病概述28-31
• 1.3.2 細(xì)胞因子在炎癥性腸病中的作用31-33
• 1.3.3 MSCs在炎癥性腸病中的應(yīng)用33-35
• 1.4 工程化MSCs35-37
• 參考文獻(xiàn)37-47
• 2 實(shí)驗(yàn)部分47-56
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑47-49
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器47
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑47-49
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法49-56
• 2.2.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSCs)提取及培養(yǎng)49
• 2.2.2 工程化BM-MSCs的構(gòu)建49
• 2.2.3 免疫印跡實(shí)驗(yàn)49-51
• 2.2.4 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)51-52
• 2.2.5 流式細(xì)胞分析實(shí)驗(yàn)52-53
• 2.2.6 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)53
• 2.2.7 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)53
• 2.2.8 小鼠腸炎模型建立及其治療方案53-54
• 2.2.9 組織切片和蘇木精-伊紅染色54-55
• 2.2.10 髓過(guò)氧化物酶檢測(cè)實(shí)驗(yàn)55
• 2.2.11 免疫熒光實(shí)驗(yàn)55-56
• 2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)56
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論56-68
• 3.1 工程化BM-MSCs的構(gòu)建56-59
• 3.1.1 BM-MSCs原代細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)和鑒定56-57
• 3.1.2 檢測(cè)工程化BM-MSCs中CX3CR1水平57-58
• 3.1.3 檢測(cè)工程化BM-MSCs中IL-25水平58-59
• 3.2 工程化BM-MSCs的表型及增殖分析59-61
• 3.2.1 工程化BM-MSCs的表型分析59-60
• 3.2.2 體外檢測(cè)工程化BM-MSCs的增殖能力60-61
• 3.3 工程化BM-MSCs的體外遷移能力61-63
• 3.3.1 體外檢測(cè)工程化BM-MSCs的遷移能力61-62
• 3.3.2 小鼠腸炎模型中各器官CX3CL1的組織分布62-63
• 3.4 工程化BM-MSCs尾靜脈注射的分布情況63-64
• 3.5 工程化BM-MSCs對(duì)小鼠腸炎的療效64-68
• 3.5.1 療效觀察64-65
• 3.5.2 病理分析65-66
• 3.5.3 髓過(guò)氧化物酶檢測(cè)66-67
• 3.5.4 炎癥相關(guān)因子檢測(cè)67-68
• 4 小結(jié)68-70
• 致謝70-72

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