發(fā)布時間：2017-09-22 14:34

  本文關鍵詞：BCL6B基因在抑制肝細胞肝癌和肝纖維化的發(fā)生發(fā)展的機制研究

  更多相關文章： BCL6B 肝癌 預后 凋亡 BCL6B 肝纖維化 肝臟損傷 肝硬化

【摘要】：肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一,目前占我國惡性腫瘤死亡原因的第二位。肝臟炎癥和肝纖維化是造成肝癌的重要因素,同時也對患者的生活質量造成了嚴重影響。肝癌,尤其是伴有肝纖維化的肝細胞肝癌,除了徹底的手術切除,目前尚缺乏其他有效的治療方法。通過基因技術手段進行腫瘤分子標志物的篩選和基因治療,是目前治療肝癌的研究方向和研究熱點。B細胞慢性淋巴細胞白血病/淋巴瘤6成員B (B cell CLL/lymphoma 6 member B BCL6B)基因是一個新穎的抑癌基因,最近被發(fā)現(xiàn)在胃癌中低表達,然而在別的腫瘤的表達尚不清楚。研究表明,腫瘤中BCL6B基因表達量的降低與啟動子的高甲基化相關,而且伴有患者術后生存時間的減少,提示BCL6B可能與腫瘤的發(fā)展密切相關。第一部分BCL6B基因在抑制肝細胞肝癌的發(fā)生發(fā)展及其機制研究目的：探索BCL6B在肝細胞肝癌中的表達量改變,并驗證其在體內(nèi)外實驗中的抑癌作用及機制。方法：運用定量PCR、免疫印跡(WB)和免疫組織化學(IHC)的方法分析肝細胞肝癌與癌旁正常肝組織中BCL6B的表達水平。本研究采用肝癌細胞株HepG2與SMMC-7721細胞株,運用慢病毒載體外源性加入重組的BCL6B,建立過表達BCL6B的細胞模型。應用CCK-8和克隆形成試驗檢測BCL6B對細胞增殖的影響,流式細胞術分析細胞的凋亡和周期阻滯情況,Transwell試驗檢測細胞遷移和侵襲能力改變。通過裸鼠成瘤試驗在體內(nèi)環(huán)境驗證BCL6B的抑癌作用。通過表達譜芯片探討B(tài)CL6B抑制肝癌發(fā)生的可能機制。結果：相比正常肝細胞,7種肝癌細胞株中BCL6B的表達量出現(xiàn)了不同程度的降低。選擇肝癌細胞株HepG2與SMMC-7721過表達BCL6B,發(fā)現(xiàn)細胞增殖能力與細胞活性下降、細胞凋亡增多、細胞遷移和侵襲能力下降,細胞周期阻滯于G0/G1期。體內(nèi)試驗發(fā)現(xiàn)BCL6B使裸鼠皮下成瘤能力明顯減弱。表達譜芯片顯示BCL6B可能通過多種信號通路途徑影響肝癌的發(fā)生發(fā)展。定量PCR結果顯示,與癌旁正常肝組織相比,肝癌組織中BCL6B的mRNA的水平顯著降低(p0.01),在蛋白水平通過WB和IHC方法同樣得到了驗證。聯(lián)系臨床病理資料分析,發(fā)現(xiàn)BCL6B的表達量與肝硬化情況呈正相關(p0.05),與門靜脈癌栓(PVTT)呈負相關(p0.05)。生存曲線表明低表達BCL6B的肝癌患者預后較差(p0.05),多因素回歸分析顯示BCL6B是肝癌預后的獨立預測因子。結論：BCL6B在肝癌組織中低表達,與肝硬化、PVTT及患者生存率密切相關。發(fā)現(xiàn)BCL6B可能通過多途徑影響腫瘤細胞的增殖、凋亡和轉移能力。第二部分BCL6B抑制肝纖維化發(fā)生發(fā)展及其機制研究目的：驗證BCL6B在肝纖維化組織中表達量的改變,探索BCL6B抑制肝損纖維化的機制。方法：用二乙基亞硝胺(DEN)或四氯化碳(CCl4)處理大鼠,分別造成急性肝臟損傷和慢性肝臟損傷模型。用過表達BCL6B的慢病毒或干擾BCL6B的腺病毒,分別通過門靜脈或尾靜脈注射,使大鼠肝臟過表達或低表達BCL6B。通過檢測炎癥因子和纖維化指標分子的表達情況來驗證BCL6B對肝臟損傷的保護作用。結果：肝纖維化的大鼠肝臟組織和慢性肝病患者肝臟組織中BCL6B的表達量,相比于正常肝臟組織均顯著增加。肝臟過表達外源性BCL6B能顯著的降低肝臟的炎癥因子和肝纖維化因子,能有效的抵抗肝臟纖維化的發(fā)生。另一方面,敲低肝臟BCL6B的表達量則加重了肝臟纖維化的發(fā)生。此外,我們發(fā)現(xiàn)BCL6B的抗纖維化作用可能是通過肝臟生長因子(hepatocyte growth factor, HGF)途徑起作用的。結論：BCL6B在肝纖維組織中高表達。BCL6B有抗炎抗肝纖維化作用,而這種保護作用可能是通過HGF途徑起作用的。
【關鍵詞】：BCL6B 肝癌 預后 凋亡 BCL6B 肝纖維化 肝臟損傷 肝硬化
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7;R575.2
【目錄】：

• 致謝5-6
• 中文摘要6-10
• Abstract10-14
• 縮略詞表14-19
• 緒論19-24
• 參考文獻21-24
• 第一部分 BCL6B基因抑制肝細胞肝癌的發(fā)生發(fā)展及其機制研究24-63
• 1 前言24-25
• 2 材料與方法25-41
• 2.1 實驗材料25-27
• 2.2 實驗方法27-40
• 2.3 統(tǒng)計分析40-41
• 3 實驗結果41-58
• 3.1 肝癌細胞株中BCL6B的表達水平41-42
• 3.2 檢測感染BCL6B慢病毒的過表達效率42
• 3.3 BCL6B對細胞增殖的影響42-45
• 3.4 BCL6B對細胞凋亡及周期的影響45-46
• 3.5 BCL6B對細胞遷移和侵襲能力的影響46-47
• 3.6 BCL6B對裸鼠成瘤能力的影響47-48
• 3.7 BCL6B抑制肝癌細胞的多種信號途徑48-51
• 3.8 BCL6B在肝癌患者組織中的差異表達51-53
• 3.9 BCL6B表達量與臨床病理特征及患者預后的相關性53-58
• 4 討論58-60
• 5 結論60-61
• 6 參考文獻61-63
• 第二部分 BCL6B抑制肝纖維化發(fā)生發(fā)展及其機制研究究63-93
• 1 前言63-65
• 2 材料和方法65-73
• 2.1 實驗材料65-67
• 2.2 實驗方法67-72
• 2.3 統(tǒng)計分析72-73
• 3 實驗結果73-87
• 3.1 急慢性肝損傷對BCL6B的影響73
• 3.2 BCL6B減輕損傷肝臟的炎癥反應73-77
• 3.3 BCL6B改善受損肝臟的纖維化情況77-80
• 3.4 BCL6B通過調(diào)節(jié)HGF而抑制HSCs的活化80-85
• 3.5 干擾BCL6B表達量會加重肝臟纖維化程度85-87
• 4 討論87-89
• 5 結論89-90
• 6 參考文獻90-93
• 綜述93-118
• 參考文獻105-118
• 作者簡歷及在學期間所取得的科研成果118

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄒圣強,齊宗利;91例非老年慢性乙型肝炎肝纖維化的診斷[J];中國基層醫(yī)藥;2001年04期

2 曾民德;肝纖維化的診斷和治療[J];肝臟;2001年S1期

3 田養(yǎng)年,鄧淑玲,張武智;中西醫(yī)結合治療肝纖維化的新進展[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2001年S1期

4 曾民德;肝纖維化的治療及其療效評估[J];中國中西醫(yī)結合雜志;2002年05期

5 謝彥華,劉春榮;基質金屬蛋白酶抑制劑與肝纖維化[J];臨床薈萃;2002年08期

6 李清華,戰(zhàn)淑慧,卞魯巖,秦成勇,勞萍;轉化生長因子-β_1和纖溶酶原激活物抑制物-1在肝纖維化中的作用及關系[J];中華消化雜志;2004年02期

7 王吉耀;重視肝纖維化的基礎與臨床研究[J];中華醫(yī)學雜志;2005年15期

8 陸倫根,曾民德;肝纖維化的診斷和評估[J];中華肝臟病雜志;2005年08期

9 時昭紅,鄧長生;肝纖維化的防治研究進展[J];國外醫(yī)學(內(nèi)科學分冊);2005年03期

10 劉克洲;侯偉;;肝纖維化的治療策略[J];中國中西醫(yī)結合雜志;2006年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉勇鋼;盧建華;;瘦素與肝纖維化關系及研究方法探討[A];中華醫(yī)學會病理學分會2009年學術年會論文匯編[C];2009年

2 袁鳳儀;;淺議中西醫(yī)防治肝纖維化的研究[A];貴州省中西醫(yī)結合學會2010年消化系病學術交流會暨非酒精性脂肪肝研究進展學習班資料匯編[C];2010年

3 杜緒勝;;肝纖維化的中西醫(yī)結合研究現(xiàn)狀[A];中國中西醫(yī)結合學會第十六次全國消化系統(tǒng)疾病學術研討會論文匯編[C];2004年

4 趙新顏;王寶恩;賈繼東;;先天性肝纖維化的臨床病理特點[A];中華醫(yī)學會第十二次全國病毒性肝炎及肝病學術會議論文匯編[C];2005年

5 李驥;董培紅;金益輝;盧明芹;潘發(fā)奮;王幫松;陳永平;;維生素D受體基因多態(tài)性與肝纖維化關系初步研究[A];第九次浙江省中西醫(yī)結合肝病學術會議論文匯編[C];2006年

6 張磊;李俊;黃成;呂雄文;金涌;朱鵬禮;;肝纖維化逆轉的機制研究[A];第十屆全國生化與分子藥理學術會議論文摘要匯編[C];2007年

7 徐葉進;;胰島素樣生長因子-1在大鼠肝纖維化組織中的表達及意義[A];2012年浙江省醫(yī)學會肝病、感染病學學術年會暨浙江省感染科醫(yī)師學術年會論文集[C];2012年

8 賈繼東;;肝纖維化的發(fā)生機理及治療進展[A];第6屆全國疑難及重癥肝病大會論文集[C];2011年

9 楊從意;陳英杰;程晶;李群;周大橋;;淺談肝纖維化的臨床研究進展[A];中華中醫(yī)藥學會第十三屆內(nèi)科肝膽病學術會議論文匯編[C];2008年

10 郭宇;曾華強;羅時兵;何麗珍;;中西醫(yī)結合診療肝纖維化的幾點思考[A];第十八次全國中西醫(yī)結合肝病學術會議論文匯編[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張昀;肝纖維化可以治療[N];健康報;2005年

2 陳斌;肝纖維化可以逆轉嗎？[N];大眾衛(wèi)生報;2007年

3 范又;肝病專家指出治療肝纖維化中醫(yī)藥療效世界領先[N];光明日報;2007年

4 陳黎明;肝纖維化[N];家庭醫(yī)生報;2006年

5 通訊員 陳麗霞邋王懷民 記者 趙鳳華;黃連素可能治肝纖維化[N];科技日報;2008年

6 蔣明邋通訊員 陳麗霞 王懷民;黃連素治療肝纖維化有效果[N];健康報;2008年

7 健康時報記者 劉橋斌;測肝纖維化免穿刺[N];健康時報;2009年

8 解放軍302醫(yī)院肝纖維化無創(chuàng)診療中心 陳國鳳 黃顯斌 整理;肝纖維化檢查進入無創(chuàng)時代[N];健康報;2009年

9 第二軍醫(yī)大學長征醫(yī)院教授 謝渭芬　整理 王根華;阻斷肝纖維化發(fā)展的鏈條[N];健康報;2010年

10 黃丁毅;福瑞股份：肝纖維化專科面對“做大”命題[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2010年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李俊峰;單采血漿所致慢性HCV感染20年自然史及其鞘脂組學研究[D];蘭州大學;2015年

2 杜靜華;微小RNAs差異表達對非酒精性脂肪性肝炎相關肝纖維化的影響及分子調(diào)控機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2016年

3 李紅;探討海珠益肝方從痰論治肝纖維化的作用及機制研究[D];湖北中醫(yī)藥大學;2016年

4 涂曉龍;miR-30和lincRNA-p21調(diào)控肝纖維化的作用機制研究[D];南京大學;2016年

5 朱穎煒;轉染TIMP-1-shRNA基因的骨髓間充質干細胞治療大鼠肝纖維化[D];蘇州大學;2016年

6 李楊;磁共振T_2~* mapping成像及分子成像評價大鼠肝纖維化的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

7 莊燦皇;基于近二十年文獻中醫(yī)藥治療肝纖維化的方藥規(guī)律研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2016年

8 吳鵬;姜黃素對肝纖維化的保護作用及表觀遺傳學機制[D];南京中醫(yī)藥大學;2016年

9 石磊;表皮形態(tài)發(fā)生素在HIV與HCV共感染肝纖維化中的作用及機制[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2016年

10 陳利軍;經(jīng)血干細胞治療肝纖維化及其作用機制[D];浙江大學;2016年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張麗君;水飛薊素聯(lián)合吡喹酮治療小鼠血吸蟲病肝纖維化的實驗研究[D];湖北科技學院;2015年

2 張美;肝纖維化無創(chuàng)模型對聚乙二醇干擾素α治療HBeAg陽性慢性乙型肝炎療效的預測價值[D];福建醫(yī)科大學;2015年

3 樓印fE;慢性乙型肝炎肝纖維化無創(chuàng)模型比較研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

4 高永振;基于超聲射頻時間序列的早期肝纖維化檢測及程度識別研究[D];華南理工大學;2015年

5 李旭;γ-谷氨酰轉肽酶（γ-GT）與乙肝表面抗原定量比值對慢性乙型肝炎病毒感染患者纖維化的評價[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

6 陳小霞;EZH2在肝纖維化中的作用及其部分機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

7 謝力駿;2型糖尿病對NAFLD患者肝纖維化進展相關性研究[D];廣西醫(yī)科大學;2015年

8 曾祥華;慢性乙型肝炎肝纖維化的無創(chuàng)診斷與機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

9 馮文強;SIRT1在小鼠肝纖維化中的作用及其相關分子的組學研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

10 張靜雯;間充質干細胞通過調(diào)控枯否細胞M1型和M2型改善肝纖維化的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

，

本文編號：901368