本文關(guān)鍵詞：相關(guān)miRNA的表達(dá)及其甲基化與異煙肼致大鼠肝損傷的關(guān)系

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【摘要】：目的探討miRNA-122、-192、-193、-125b、-106b表達(dá)及miRNA-122、-125b、-106b甲基化與異煙肼(isoniazid,INH)致大鼠肝損傷的關(guān)系;闡明miRNA-122、-125b、-106b參與INH致肝損傷的發(fā)生機(jī)制。方法將104只SD大鼠隨機(jī)分為空白組(8只)、實(shí)驗(yàn)組(48只)和平行對(duì)照組(48只)。實(shí)驗(yàn)組與平行對(duì)照組各設(shè)3d、7d、10d、14d、21d、28d時(shí)間組,每組8只。實(shí)驗(yàn)組給予異煙肼55 mg·kg-1·d-1連續(xù)灌胃,平行對(duì)照組給予等容積蒸餾水,各時(shí)間點(diǎn)處死各組所有大鼠,保存血漿和肝組織。肝組織經(jīng)HE染色觀察病理改變;測(cè)定血漿ALT、AST活性;RT-PCR檢測(cè)miRNA、mRNA表達(dá);qMSP檢測(cè)miRNA甲基化水平;ELISA分析相關(guān)蛋白含量。結(jié)果1肝組織病理和血漿ALT、AST水平分別在給藥7d、10d發(fā)生明顯改變,提示肝損傷造模成功。2與空白組及平行對(duì)照組比較,隨著給藥時(shí)間延長(zhǎng),大鼠肝組織中miRNA-122、-192、-125b、-106b表達(dá)水平逐漸下降,分別在第14d、14d、21d、21d達(dá)到低谷,而miRNA-193表達(dá)則呈上升趨勢(shì),第21d達(dá)峰值,析因分析顯示,給藥與否和不同給藥時(shí)間組的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且兩因素間存在交互效應(yīng)(均P0.05)。3與空白組及平行對(duì)照組比較,隨著給藥時(shí)間延長(zhǎng),大鼠肝組織中miRNA-122、-125b、-106b甲基化水平呈上升趨勢(shì),給藥與否和不同給藥時(shí)間組的差異也均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且兩因素間也存在交互效應(yīng)(均P0.05)。4miRNA-122的上游pri-miR-122及HNF-4α、C/EBPα基因mRNA于給藥第3d呈現(xiàn)低表達(dá),并隨著給藥時(shí)間而降低,而其下游的Cycling G1、CAT-1基因mRNA及蛋白表達(dá)則隨著給藥時(shí)間延長(zhǎng)而上升(均P0.05),且給藥與否和不同給藥時(shí)間組間存在交互效應(yīng)(均P0.05)。5 miRNA-106b、-125b共同作用的下游MAPK14、STAT3基因mRNA表達(dá)隨著給藥時(shí)間延長(zhǎng)呈高表達(dá),分別在第21d和14d達(dá)峰值。STAT3蛋白與其mRNA、STAT3的磷酸化蛋白p-STAT3以及pSTAT3調(diào)控的下游RORγt mRNA等4個(gè)指標(biāo)的表達(dá)同步上升,但MAPK14表達(dá)卻呈下降趨勢(shì)。同時(shí),RORγt調(diào)控的下游炎癥因子IL-17、IL-6、TNF-α的mRNA和蛋白以及IL-17調(diào)控的CXCL1、MIP-2因子mRNA和蛋白均隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)而呈高表達(dá)。上述因子在給藥與否和不同給藥時(shí)間組間均存在交互效應(yīng)(均P0.05)。6在給藥的第3天,大鼠肝組織中檢出miRNA-122、-192、-125b、-106b表達(dá)水平的顯著改變,明顯早于血漿ALT、AST變化(第10d),且兩類指標(biāo)間存在負(fù)相關(guān)(均P0.05)。7在給藥的第7天,大鼠肝組織中檢出miRNA-122、-125b、-106b甲基化水平的顯著改變,早于血漿ALT、AST變化(第10d),且兩類指標(biāo)間存在正相關(guān)(均P0.05)。結(jié)論1肝組織中miRNA-122、-192、-125b、-106b的低表達(dá)與INH致大鼠肝損傷有關(guān)系。2肝組織中miRNA-122、-125b、-106b啟動(dòng)子區(qū)CpG島的高甲基化與INH致大鼠肝損傷有關(guān)系。3轉(zhuǎn)錄因子HNF-4α、C/EBPα調(diào)控miRNA-122低表達(dá)并進(jìn)一步調(diào)控靶基因Cycling G1、CAT-1參與肝損傷的發(fā)生過(guò)程,而低表達(dá)miRNA-125b、-106b則通過(guò)靶向STAT3調(diào)控炎癥因子IL-17、IL-6、TNFα分泌參與肝損傷的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：異煙肼 肝損傷 miRNA 甲基化
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R52;R575
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-13
• 第1章 實(shí)驗(yàn)研究13-49
• 1.1 材料與方法13-22
• 1.1.1 主要材料13-14
• 1.1.2 動(dòng)物的選擇及分組處理14
• 1.1.3 大鼠標(biāo)本的采集14-15
• 1.1.4 大鼠肝組織病理學(xué)觀察15
• 1.1.5 大鼠肝功能指標(biāo)的檢測(cè)15
• 1.1.6 肝組織miRNA-122、-192、-193、-125b、-106b表達(dá)水平檢測(cè)15-17
• 1.1.7 肝組織miRNA-122、-125b、-106b啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化檢測(cè)..71.1.8 肝組織相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平的檢測(cè)17-19
• 1.1.8 肝組織相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平的檢測(cè)19-21
• 1.1.9 大鼠肝組織相關(guān)基因的蛋白含量檢測(cè)21
• 1.1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析21-22
• 1.2 結(jié)果22-34
• 1.2.1 大鼠肝損傷模型的鑒定22-23
• 1.2.2 肝組織中5種miRNAs表達(dá)與INH致大鼠肝損傷的關(guān)系23-25
• 1.2.3 肝組織中3種miRNAs甲基化與INH致大鼠肝損傷的關(guān)系25-26
• 1.2.4 肝組織中3種miRNAs甲基化水平與其表達(dá)水平的關(guān)系26
• 1.2.5 miRNA-122在異煙肼致大鼠肝損傷中的調(diào)控作用26-29
• 1.2.6 miRNA-125b、-106b在INH致肝損傷大鼠中的調(diào)控作用29-34
• 1.3 討論34-42
• 1.3.1 INH誘導(dǎo)大鼠肝損傷模型35
• 1.3.2 肝組織中5種miRNAs表達(dá)水平與INH致肝損傷有關(guān)系35-36
• 1.3.3 miRNA-122、-125b、-106b甲基化水平與INH致肝損傷有關(guān)系36-37
• 1.3.4 miRNA-122、-125b、-106b甲基化與其表達(dá)存在相關(guān)性37-38
• 1.3.5 miRNA-122參與INH致肝損傷發(fā)生機(jī)制38-39
• 1.3.6 miRNA-125b、106b參與INH致肝損傷發(fā)生機(jī)制39-42
• 1.3.7 不足與展望42
• 參考文獻(xiàn)42-49
• 第2章 綜述 miRNA及DNA甲基化與肝臟疾病的研究進(jìn)展49-59
• 2.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)、生物合成及功能49-50
• 2.1.1 miRNA發(fā)現(xiàn)49
• 2.1.2 miRNA生物合成49
• 2.1.3 miRNA功能49-50
• 2.2 miRNA與肝臟疾病的研究50-52
• 2.2.1 miRNA與病毒性肝炎50
• 2.2.2 miRNA與酒精性、非酒精性脂肪性肝病50-51
• 2.2.3 miRNA與肝纖維化51
• 2.2.4 miRNA與急性肝功能衰竭51
• 2.2.5 miRNA在藥物性肝損傷中的表達(dá)差異51-52
• 2.3 DNA甲基化、調(diào)控基因表達(dá)機(jī)制52-53
• 2.3.1 DNA甲基化52-53
• 2.3.2 DNA甲基化調(diào)控基因表達(dá)機(jī)制53
• 2.4 DNA甲基化與肝臟疾病的研究53-54
• 2.4.1 DNA甲基化與病毒性肝炎53
• 2.4.2 DNA甲基化與酒精性及非酒精性肝病53-54
• 2.4.3 DNA甲基化與藥物性肝損傷54
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 結(jié)論59-60
• 致謝60-61
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介61-62
• 作者簡(jiǎn)介62-63
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集63

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