發(fā)布時(shí)間：2017-09-09 20:23

  本文關(guān)鍵詞：肝肺綜合征患者血清調(diào)節(jié)人LFs肌樣分化及增殖、遷移作用的研究

  更多相關(guān)文章： 人肺成纖維細(xì)胞 肝肺綜合征患者血清 肌樣分化 增殖 遷移

【摘要】：肝肺綜合征(hepatopulmonary syndrome,HPS)是慢性肝病患者所發(fā)生的肺部并發(fā)癥,常伴隨有門肺高壓和肺內(nèi)血管擴(kuò)張導(dǎo)致的嚴(yán)重低氧血癥。肺微血管擴(kuò)張和再生所導(dǎo)致的氣體交換異常是HPS特征性的病理生理改變。HPS常見于肝硬化患者終末期,目前常用動脈血?dú)狻⒃鰪?qiáng)對比超聲心動圖、肺灌注掃描和肺血管造影來確診是否HPS患者肺部存在特征性的肺血管異常。臨床上除肝移植外,現(xiàn)無有效治療肝肺綜合征的方法,因此其嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量和導(dǎo)致高死亡率。前期研究發(fā)現(xiàn):肺血管重建(pulmonary vascular remodeling,PVR)可能是其主要發(fā)病機(jī)制之一。其病理生理進(jìn)程是一個(gè)由多種細(xì)胞共同參與、相互影響的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)共同作用的結(jié)果,非肌性血管部位出現(xiàn)平滑肌樣細(xì)胞、肌性血管中膜和外膜增厚、內(nèi)膜斑塊形成,致使肺PVR發(fā)生;肺動脈平滑肌大量增殖,并從血管中層遷移至血管內(nèi)膜,使整個(gè)肺微血管擴(kuò)張和重建。肌成纖維細(xì)胞(Myofibroblast,MF)是成纖維細(xì)胞的特殊分化類型,其超微結(jié)構(gòu)特征介于成纖維細(xì)胞和PASMCs之間,是屬于PASMCs樣細(xì)胞中的一種。既往研究認(rèn)為PASMCs從中膜遷移到內(nèi)膜大量增殖,其細(xì)胞表型也由高分化的收縮型轉(zhuǎn)換為未分化的合成型,PVR的病理變化是血管內(nèi)膜PASMCs大量堆積所致。然而越來越多的研究發(fā)現(xiàn)外膜成纖維細(xì)胞、成纖維母細(xì)胞在低氧等刺激因素作用下,活化形成MFs,因此我們推測活化的MFs可能遷移至內(nèi)膜并大量增殖,直接參與PVR內(nèi)膜大量堆積PASMCs的形成。但是,具體的機(jī)制尚不清楚。前期我們已經(jīng)做了關(guān)于肝肺綜合征患血清對SD大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)增殖、遷移及表型轉(zhuǎn)換的影響的相關(guān)研究,其結(jié)果是肝肺綜合征患者血清可促進(jìn)PASMCs向合成表型的轉(zhuǎn)換,并增強(qiáng)其增殖、遷移能力。由此推測:HPS血清中的細(xì)胞因子釋放,進(jìn)入血液循環(huán)后達(dá)到肺臟,刺激血管外膜LFs(Lungfibroblast.LFs),使LFs增殖遷移和發(fā)生肌樣分化,最終導(dǎo)致肺血管的病理性重建和HPS的發(fā)生發(fā)展。本課題通過體外培養(yǎng)成人LFs,模擬生理?xiàng)l件下HPS患者血清對人LFs肌樣分化,增殖及遷移變化的影響,探索LFs在HPS患者血管重建中所起到的作用,從而為HPS的防治提供新的靶點(diǎn)。研究內(nèi)容:1、培養(yǎng)及鑒定人肺原代LFs,原代LFs培養(yǎng)3-4天后傳代,運(yùn)用光鏡、免疫熒光染色法進(jìn)行鑒定。2、肝肺綜合征患者血清的收集,按照入選標(biāo)準(zhǔn)篩選合格的HPS患者與健康對照組,并且按要求抽取少量外周血液提取血清。3、分別用正常和肝肺綜合征患者血清刺激人LFs,免疫組化檢測細(xì)胞SM-α-actin的表達(dá)情況。4、分別用正常和肝肺綜合征患者血清刺激人LFs,Western blot檢測其SM-MHC和SM-α-actin蛋白的變化情況。5、分別用正常和肝肺綜合征患者血清刺激人LFs,用3H-Td R和transwell法檢測各組LFs的增殖和遷移能力。研究結(jié)果:1、在倒置顯微鏡下觀察原代培養(yǎng)的人LFs,細(xì)胞呈長梭形和針狀形態(tài)為主,貼壁生長,細(xì)胞間界限清楚,立體折光率高,彼此間連接成網(wǎng)狀。通過波形蛋白vimentin免疫熒光染色鑒定為LFs。2、肝肺綜合征患者血清的收集,-80度凍存待用。3、免疫組化法結(jié)果,與正常血清處理組比較,肝肺綜合征患者血清組培養(yǎng)細(xì)胞呈長梭形,核呈桿狀或橢圓狀,細(xì)胞胞漿有大量棕黃色顆粒沉積。正常者的血清刺激細(xì)胞在倒置顯微鏡下單層貼壁生長,狀如梭形或三角形,胞核清晰,胞漿豐富,SM-α-actin免疫化學(xué)染色胞內(nèi)未見明顯的棕黃色沉淀。4、western bolt檢測顯示:實(shí)驗(yàn)組SM-α-actin、SM-MHC蛋白表達(dá)上調(diào),尤其在48h(T2)和72h(T3)時(shí)間點(diǎn),肝肺綜合征血清刺激SM-α-actin、SM-MHC蛋白表達(dá)明顯增加,呈時(shí)間依賴的遞增趨勢(P0.05),而正常血清組無明顯變化。5、3H-Td R檢測和transwell檢測,與對照組相比,體外實(shí)驗(yàn)中,HPS血清使人肺2代LF的遷移、增殖能力增強(qiáng),尤其是在48h和72h。結(jié)論:1、肝肺綜合征患者血清促進(jìn)人LFs體外發(fā)生肌樣分化。2、肝肺綜合征患者血清促進(jìn)人LFs增殖、遷移能力增加。
【關(guān)鍵詞】：人肺成纖維細(xì)胞 肝肺綜合征患者血清 肌樣分化 增殖 遷移
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575;R563
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 肝肺綜合征患者血清調(diào)節(jié)人LFs肌樣分化作用的研究13-36
• 2.1 成人LFs的培養(yǎng)和鑒定14-20
• 2.1.1 材料和方法14-16
• 2.1.2 結(jié)果16-18
• 2.1.3 討論18-19
• 2.1.4 小結(jié)19-20
• 2.2 肝肺綜合征患者血清對人肺LFs肌樣分化的影響20-31
• 2.2.1 材料和方法20-28
• 2.2.2 結(jié)果28-30
• 2.2.3 討論30-31
• 2.2.4 小結(jié)31
• 2.3 肝肺綜合征患者血清對人LFs增值、遷移的影響31-36
• 2.3.1 材料和方法31-33
• 2.3.2 結(jié)果33-35
• 2.3.3 討論35
• 2.3.4 小結(jié)35-36
• 全文討論36-38
• 全文總結(jié)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 文獻(xiàn)綜述 成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的相關(guān)信號通路的研究進(jìn)展45-54
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果54-55
• 致謝55

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本文編號：822578