本文關(guān)鍵詞：UPF1在非酒精性脂肪性肝病中的作用研究

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【摘要】：背景：非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)患病率逐年增高,已成為最常見的慢性肝病之一,NAFLD的發(fā)生發(fā)展機(jī)制目前尚未完全明確。UPF1是無意義編碼的mRNA降解(nonsense-mediated mRNA decay, NMD)中的關(guān)鍵蛋白,已有研究表明UPF1在細(xì)胞DNA復(fù)制及修復(fù)中起重要作用,NMD及DNA的損傷與肝內(nèi)脂質(zhì)代謝及肝細(xì)胞損傷相關(guān),但UPF1在NAFLD發(fā)病機(jī)制中起的作用尚不明確。目的：本研究通過對(duì)L02細(xì)胞及小鼠模型的實(shí)驗(yàn),探討UPF1在NAFLD發(fā)病機(jī)制中起的作用。方法：1.通過給C57BL/6小鼠MCD飲食5周建立NAFLD模型小鼠。將肝臟L02細(xì)胞置于軟脂酸、油酸(兩者1：2混合)的高脂環(huán)境中培養(yǎng)出NAFLD肝細(xì)胞。然后用油紅染色法觀測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂滴,收集細(xì)胞凍液,測(cè)定其中TG含量,評(píng)估建模情況。2.從小鼠肝臟組織中及FFA誘導(dǎo)的L02細(xì)胞中提取RNA,進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,對(duì)合成的UPF1引物進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR,運(yùn)用Western Blot方法檢查UPF1蛋白的變化,比較正常小鼠肝細(xì)胞和NAFLD小鼠、正常L02細(xì)胞和脂變的L02細(xì)胞內(nèi)UPF1及蛋白的變化。3.運(yùn)用siRNA干擾的方法抑制NAFLD細(xì)胞模型中UPF1的表達(dá),檢測(cè)其脂肪變性程度,并進(jìn)一步檢測(cè)UPF1表達(dá)抑制后脂肪酸p氧化基因(PGC1α, PPARα, CPT1α)、ROS等指標(biāo)的變化,探討UPF1在非酒精性脂肪性肝病的發(fā)病中的作用。結(jié)果：1.FFA處理L02細(xì)胞后,UPF1 mRNA及UPF1蛋白表達(dá)下降；MCD飲食處理后模型小鼠UPF1 mRNA及UPF1蛋白表達(dá)下降。2.抑制L02細(xì)胞UPF1表達(dá)后,UPF1 mRNA表達(dá)顯著下降,細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量明顯增加。3.抑制L02細(xì)胞UPF1表達(dá)后,PGC1αmRNA, PPARa mRNA, CPT1αmRNA表達(dá)均下降。4.抑制L02細(xì)胞UPF1表達(dá)后,ROS升高。結(jié)論：UPF1可能在NAFLD的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮一定的抑制作用,UPF1被抑制可能是NAFLD的發(fā)病機(jī)制之一。UPF1被抑制后可能通過引起PGC1α, PPARα, CPT1α的表達(dá)下降,及ROS生成增多來促進(jìn)NAFLD的形成。
【關(guān)鍵詞】：非酒精性脂肪性肝病 NAFLD 上游移碼蛋白 UPF1 PGC1α PPARα CPT1α 活性氧簇 ROS
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 縮略詞表10-12
• 1 引言12-15
• 2 材料與方法15-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料15-17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法17-22
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法22-23
• 3 結(jié)果23-29
• 3.1 NAFLD小鼠模型的建立23-24
• 3.2 NAFLD小鼠肝臟、FFA誘導(dǎo)后L02細(xì)胞UPF1 mRNA水平的變化24-25
• 3.3 NAFLD小鼠肝臟、FFA誘導(dǎo)后L02胞UPF1蛋白水平的變化25-26
• 3.4 抑制UPF1表達(dá)對(duì)FFA誘導(dǎo)的脂變L02胞的影響26-27
• 3.5 抑制UPF1表達(dá)對(duì)脂肪酸β氧化基因的影響27-28
• 3.6 抑制UPF1表達(dá)對(duì)活性氧簇ROS的影響28-29
• 4 討論29-35
• 5 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-43
• 綜述43-67
• 參考文獻(xiàn)52-67
• 作者簡(jiǎn)歷及在學(xué)期間所取得的科研成果67

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號(hào)：760212