本文關(guān)鍵詞：重組人肝活素（HPS）的抗肝損傷活性研究

  更多相關(guān)文章： 急性肝衰竭 肝損傷 肝活素 標(biāo)志物

【摘要】：肝臟是人體內(nèi)重要的功能器官,具有代謝、解毒、免疫、凝血等多種作用;但肝臟易受多種因素刺激,輕則導(dǎo)致肝功能紊亂,重則引起急性肝衰竭,甚至死亡。肝病在我國(guó)一直是一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題,病毒、藥物等導(dǎo)致的嚴(yán)重肝損傷(肝衰竭)都具有起病急、預(yù)后差、病死率高的特點(diǎn),目前臨床上尚缺乏有效的治療手段,研究并找到不僅可以阻止肝細(xì)胞壞死、而且能促進(jìn)肝再生的藥物一直是臨床上面臨的重大課題。Hepassocin(HPS)是一種具有肝臟組織特異性的促有絲分裂因子,通過(guò)自分泌循環(huán)的方式調(diào)節(jié)正常肝細(xì)胞的增殖,對(duì)CCl_4、D-氨基半乳糖(D-galN)誘導(dǎo)的肝損傷具有較好的降酶保肝作用。本課題依據(jù)HPS的生物學(xué)特性,對(duì)HPS開展臨床前抗肝損傷活性研究,包括動(dòng)物模型評(píng)價(jià)和體外評(píng)價(jià)兩部分:在動(dòng)物模型評(píng)價(jià)方面,首先利用CCl_4誘導(dǎo)的肝損傷模型確定HPS的給藥方案即造模前12h,造模后24h、48h、72h給藥,建立給藥譜,在此基礎(chǔ)上研究HPS對(duì)此模型小鼠的保護(hù)作用,我們發(fā)現(xiàn)HPS能提高肝損傷小鼠的存活率,降低ALT、AST水平,HE染色結(jié)果表明HPS能降低肝組織壞死程度,酶聯(lián)免疫吸附(TUNEL)結(jié)果顯示HPS能減少肝細(xì)胞凋亡,增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)結(jié)果表明HPS能促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖。通過(guò)D-galN/LPS誘導(dǎo)的肝損傷模型進(jìn)一步評(píng)價(jià)HPS的活性,發(fā)現(xiàn)HPS同樣可以降低小鼠的死亡率、轉(zhuǎn)氨酶水平、肝組織壞死程度,Real-time PCR法檢測(cè)凋亡及炎癥因子的m RNA水平,CBA法檢測(cè)血清中炎癥因子的表達(dá),證明HPS可降低相關(guān)凋亡及炎癥因子的表達(dá)。此外,本研究還評(píng)價(jià)了HPS對(duì)CCl_4、D-galN誘導(dǎo)大鼠肝損傷、刀豆蛋白A(Con A)誘導(dǎo)小鼠肝損傷的保護(hù)作用。體外評(píng)價(jià)結(jié)果顯示,HPS能促進(jìn)小鼠原代肝細(xì)胞的增殖、降低CCl_4處理對(duì)L02細(xì)胞的損傷。本研究檢測(cè)了不同劑量CCl_4誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷及肝切除模型HPS在小鼠血清中的表達(dá)變化,并比較了HPS的表達(dá)與肝損傷程度的相關(guān)性,發(fā)現(xiàn)隨著CCl_4劑量的增加,小鼠死亡率顯著升高,肝損傷程度增加,HPS在小鼠血清及肝組織中的表達(dá)水平也顯著上調(diào)并與肝損傷程度密切相關(guān);肝切除模型中HPS的血清表達(dá)上調(diào)。綜上所述,HPS具有較好的抗肝損傷活性,其在血清中的水平與肝損傷程度密切相關(guān),因此,HPS可能會(huì)成為特異性治療ALF的有效藥物以及判斷肝損傷程度的血清標(biāo)志物。
【關(guān)鍵詞】：急性肝衰竭 肝損傷 肝活素 標(biāo)志物
【學(xué)位授予單位】：天津大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-25
• 1.1 急性肝衰竭10-16
• 1.2 HPS結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及生物學(xué)功能16-18
• 1.2.1 HPS的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)16-17
• 1.2.2 HPS的生物學(xué)特性及功能17-18
• 1.3 肝損傷模型的損傷機(jī)制及應(yīng)用18-23
• 1.3.1 化學(xué)性肝損傷模型18-20
• 1.3.2 藥物性肝損傷模型20-22
• 1.3.3 免疫性肝損傷模型22
• 1.3.4 肝切除模型22
• 1.3.5 酒精性肝損傷模型22-23
• 1.3.6 其他因素誘導(dǎo)的肝損傷模型23
• 1.4 臨床上檢測(cè)肝功能的指標(biāo)23-24
• 1.5 本課題研究的意義24-25
• 第二章 材料與方法25-36
• 2.1 主要儀器設(shè)備25
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料25-28
• 2.2.1 主要試劑25-26
• 2.2.2 細(xì)胞株26
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物26
• 2.2.4 常用溶液配制26-28
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法28-36
• 2.3.1 常用細(xì)胞培養(yǎng)條件28
• 2.3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝損傷模型28-30
• 2.3.3 肝損傷模型動(dòng)物存活率觀察30
• 2.3.4 血清ALT、AST水平檢測(cè)30-31
• 2.3.5 HE染色及組織學(xué)觀察31
• 2.3.6 TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡31-32
• 2.3.7 PCNA抗體免疫組化檢測(cè)肝細(xì)胞的再生能力32
• 2.3.8 組織RNA的提取與反轉(zhuǎn)錄32
• 2.3.9 Real-time PCR32
• 2.3.10 Caspase 3 活性檢測(cè)32-33
• 2.3.11 CBA法檢測(cè)細(xì)胞因子33
• 2.3.12 酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA)檢測(cè)HPS在血清中的表達(dá)33
• 2.3.13 組織蛋白的提取與定量33-34
• 2.3.14 細(xì)胞總蛋白的提取34
• 2.3.15 小鼠原代肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的分離34
• 2.3.16 MTS法檢測(cè)細(xì)胞增殖34
• 2.3.17 乳酸脫氫酶（LDH）的檢測(cè)34-35
• 2.3.18 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析35-36
• 第三章 結(jié)果與討論36-74
• 3.1 HPS的體內(nèi)抗肝損傷活性研究36-61
• 3.1.1 HPS減輕CCl_4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷36-48
• 3.1.2 HPS減輕CCl_4誘導(dǎo)的大鼠急性肝損傷48-50
• 3.1.3 HPS減輕D-gal N/LPS誘導(dǎo)的小鼠肝損傷50-57
• 3.1.4 HPS減輕D-gal N誘導(dǎo)的大鼠肝損傷57-59
• 3.1.5 HPS降低Con A誘導(dǎo)的免疫性肝損傷小鼠轉(zhuǎn)氨酶水平59-60
• 3.1.6 小結(jié)60-61
• 3.2 HPS的體外活性研究61-67
• 3.2.1 HPS促進(jìn)小鼠原代肝細(xì)胞增殖61-62
• 3.2.2 HPS減輕CCl_4誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷62-65
• 3.2.3 HPS促進(jìn)Hep G2及小鼠原代肝細(xì)胞MAPK/ERK信號(hào)通路活化65-66
• 3.2.4 小結(jié)66-67
• 3.3 HPS是一種新的小鼠急性肝損傷標(biāo)志物67-74
• 3.3.1 肝切除模型中HPS的表達(dá)變化67-68
• 3.3.2 不同劑量CCl_4處理對(duì)小鼠生存狀態(tài)的影響68-69
• 3.3.3 不同劑量CCl_4處理對(duì)小鼠肝功能的影響69-70
• 3.3.4 不同劑量CCl_4處理對(duì)小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響70-71
• 3.3.5 不同劑量CCl_4處理對(duì)小鼠HPS表達(dá)水平的影響71-72
• 3.3.6 小結(jié)72-74
• 第四章 結(jié)論與展望74-75
• 4.1 結(jié)論74
• 4.2 展望74-75
• 參考文獻(xiàn)75-85
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明85-86
• 附錄86-89
• 致謝89-90

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 淺野宏;徐綏緒;;中藥抗肝損傷的成分[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;1985年07期

2 劉玉奇;關(guān)于幾種植物抗肝損傷的藥效探討(二)[J];高等函授學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2004年03期

3 張勇;徐彭;謝勇輝;杜文鵬;江飄;姚爭(zhēng)爭(zhēng);李斌;;剛竹屬化學(xué)成分及其抗肝損傷成分研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年31期

4 宋保蘭;;抗肝損傷中藥及其作用機(jī)制研究進(jìn)展[J];大家健康(學(xué)術(shù)版);2014年02期

5 蘇立穩(wěn),方丹,楊繼光;中藥抗肝損傷實(shí)驗(yàn)研究[J];承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1998年04期

6 任宏義;和貴章;李僖如;張玉枝;楊慧敏;高葆真;;疏肝健脾、活血化瘀抗肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J];江西中醫(yī)藥;1992年05期

7 吳素?zé)?高偉敏;;中藥抗肝損傷研究進(jìn)展[J];軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào);2009年02期

8 田生望,肖乾秀,季業(yè)偉,張光華;葉綠素及其衍生物的實(shí)驗(yàn)與臨床研究簡(jiǎn)析[J];中醫(yī)藥學(xué)刊;2004年02期

9 侯杰;張朝輝;侯虎;孫京沙;李八方;;滸苔正丁醇相化學(xué)成分及其抗肝損傷活性研究[J];中國(guó)海洋藥物;2013年05期

10 韓德五;;國(guó)內(nèi)肝炎藥物研究的若干動(dòng)態(tài)[J];醫(yī)衛(wèi)通訊;1977年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 畢明剛;周娟;孫虹;;巖黃連總堿抗肝損傷免疫藥理學(xué)初步研究[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第九次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

2 彭景華;;姜黃素抗肝損傷研究進(jìn)展[A];第十三次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 周明;六味五靈片抗肝損傷的機(jī)制[N];健康報(bào);2009年

2 徐衛(wèi)東　郭天笑 記者 李靜;專攻醫(yī)藥 助力健康[N];吉林日?qǐng)?bào);2010年

3 鄧麗麗;補(bǔ)益良品蜂王漿[N];人民政協(xié)報(bào);2006年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 馮波;龍膽抗肝損傷活性成分的分離、純化及藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 馬艷霞;中藥抗肝損傷理論與實(shí)驗(yàn)研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

2 翟華立;重組人肝活素（HPS）的抗肝損傷活性研究[D];天津大學(xué);2015年

3 林銘X ;抗纖軟肝方抗肝損傷和肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2008年

，

本文編號(hào)：685077