發(fā)布時(shí)間：2017-08-11 11:31

  本文關(guān)鍵詞：不良狀態(tài)的空腸彎曲菌經(jīng)消化道感染豚鼠致周?chē)窠?jīng)病變

  更多相關(guān)文章： 空腸彎曲菌 微需氧條件 好氧條件 Hartley豚鼠 周?chē)窠?jīng)病

【摘要】：目的:1觀察不良生長(zhǎng)狀態(tài)下的空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni,C.jejuni)能否經(jīng)消化道感染Hartley豚鼠并致周?chē)窠?jīng)病變。2比較兩種不同培養(yǎng)狀態(tài)的空腸彎曲菌感染Hartley豚鼠所致周?chē)窠?jīng)損傷的差異。3通過(guò)更為自然的感染途徑,完善空腸彎曲菌致Hartley豚鼠周?chē)窠?jīng)病的動(dòng)物模型。方法:1菌株來(lái)源:來(lái)源于空腸彎曲菌菌株庫(kù)中的空腸彎曲菌Lulei株。2細(xì)菌復(fù)蘇、培養(yǎng)、鑒定以及制備菌懸液:將保存于-80℃的空腸彎曲菌Lulei株在室溫(25℃)下復(fù)蘇,于42℃微需氧(5%O_2,10%CO_2,85%N_2)氣體培養(yǎng)箱中培養(yǎng),傳至第三代后進(jìn)行細(xì)菌形態(tài)、生化及分子學(xué)鑒定,將其中一半培養(yǎng)基轉(zhuǎn)置于42℃自然氧(21%O_2,1%CO_2,78%N_2)氣體培養(yǎng)箱中,其余培養(yǎng)基培養(yǎng)環(huán)境保持不變。將兩培養(yǎng)箱中的細(xì)菌分別制成兩種菌懸液,濁度均為3×108CFU/ml,準(zhǔn)備為Hartley豚鼠灌胃。3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:32只4周齡SPF級(jí)Hartley豚鼠,隨機(jī)分組為2組實(shí)驗(yàn)組和1組空白對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組根據(jù)細(xì)菌培養(yǎng)環(huán)境的不同分為微需氧組(M組)和自然氧組(N組),每組12只,共24只;空白對(duì)照組(B組)為8只。4灌胃方案:實(shí)驗(yàn)組M組每只Hartley豚鼠予以灌胃微需氧條件下培養(yǎng)的空腸彎曲菌菌懸液2ml(濁度為3×108CFU/ml),實(shí)驗(yàn)組N組Hartley豚鼠每只予以灌胃自然氧條件下培養(yǎng)的空腸彎曲菌菌懸液2ml(濁度為3×108CFU/ml),實(shí)驗(yàn)組每隔2天進(jìn)行一次灌胃,總共7次。對(duì)照組B組不給于任何處理。每次灌胃前全部Hartley豚鼠需禁食12小時(shí)、禁水3小時(shí),灌胃后給予飼料及水。5動(dòng)物觀察:自動(dòng)物入籠后每日對(duì)Hartley豚鼠進(jìn)行觀察,包括豚鼠進(jìn)食、運(yùn)動(dòng)、精神、毛發(fā),是否腹瀉、力弱等,定期測(cè)量體重。使用重復(fù)測(cè)量法分析各組豚鼠的體重變化有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。第一次灌胃后參照Hartley豚鼠EAN模型的癱瘓?jiān)u分標(biāo)準(zhǔn),每天觀察Hartley豚鼠的臨床癥狀。6動(dòng)物解剖及坐骨神經(jīng)染色:末次灌胃后,每隔5天解剖8只豚鼠,每次實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)各選取3只,對(duì)照組隨機(jī)選取2只,解剖共分四次完成。對(duì)Hartley豚鼠進(jìn)行灌注、解剖后取材兩側(cè)坐骨神經(jīng),坐骨神經(jīng)進(jìn)行再處理后行鋨酸、HE染色。7神病理觀察及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì):光學(xué)顯微鏡下觀察HE染色病理結(jié)果。經(jīng)餓酸染色后于體視顯微鏡下對(duì)每只Hartley豚鼠隨機(jī)分離100根坐骨神經(jīng)的神經(jīng)單根纖維,于生物顯微鏡下觀察、病理評(píng)估并記錄病變單根纖維數(shù),計(jì)算每只及每組Hartley豚鼠坐骨神經(jīng)神經(jīng)單根纖維的病變率(病變率=病變根數(shù)/100×100%)。使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)每組神經(jīng)單根纖維病變率結(jié)果進(jìn)行χ2檢驗(yàn),比較各組神經(jīng)單根纖維病變率之間有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果:1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物觀察:1.1臨床癥狀:參照豚鼠EAN模型的癱瘓?jiān)u分標(biāo)準(zhǔn):實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組所有豚鼠評(píng)分均為0級(jí)。對(duì)照組有6只豚鼠發(fā)生明顯毛發(fā)脫失。其余豚鼠未觀察到脫毛、腹瀉、精神萎靡、癱瘓等明顯臨床癥狀。1.2體重變化:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組豚鼠均出現(xiàn)體重上下浮動(dòng)現(xiàn)象。用重復(fù)測(cè)量法對(duì)各組豚鼠體重進(jìn)行比較,采用雙側(cè)性檢驗(yàn),可得各組之間體重變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2坐骨神經(jīng)染色觀察:2.1餓酸染色對(duì)照組豚鼠神經(jīng)可觀察到神經(jīng)單根纖維形態(tài)均勻,髓鞘表面光滑,郎飛氏結(jié)結(jié)構(gòu)正常,偶見(jiàn)髓鞘皺縮;實(shí)驗(yàn)組每只豚鼠神經(jīng)中均可見(jiàn)神經(jīng)損傷,可觀察到神經(jīng)單根纖維粗細(xì)不等,郎飛氏結(jié)結(jié)構(gòu)不同程度缺損,結(jié)旁區(qū)髓鞘脫失、皺縮呈鋸齒狀,髓鞘內(nèi)有片狀或卵圓狀沉積物,偶見(jiàn)華勒樣變性。2.2 HE染色實(shí)驗(yàn)組豚鼠神經(jīng)可觀察到神經(jīng)單根纖維髓鞘脫失,軸索不連續(xù)、斷裂。對(duì)照組豚鼠神經(jīng)可觀察到神經(jīng)單根纖維粗細(xì)均勻,髓鞘光滑,軸索完整。3神經(jīng)病變率統(tǒng)計(jì)結(jié)果:所有數(shù)據(jù)使用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)三組神經(jīng)單根纖維病變率結(jié)果進(jìn)行χ2檢驗(yàn),雙側(cè)性檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。得出:P0.05(χ2=217.697,P=0.000),拒絕H0,接受H1,認(rèn)為三組間病變率不全相等,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。為進(jìn)行兩組間的病變率差異比較,采用χ2分割法,檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05,校正后α′=0.0125。各實(shí)驗(yàn)組與同一對(duì)照組的比較可見(jiàn):M組與B組比較,得出P0.0125(χ2=219.273,P=0.000),拒絕H0,接受H1,認(rèn)為M組與B組病變率不同,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;N組與B組比較,得出P0.0125(χ2=168.772,P=0.000),拒絕H0,接受H1,認(rèn)為N組與B組病變率不同,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組之間的病變率比較可見(jiàn):M組與N組比較,得出P0.0125(χ2=6.579,P=0.010),拒絕H0,接受H1,認(rèn)為M組與N組病變率不同,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義�？傻贸鋈M坐骨神經(jīng)病變率從高到低為:M組N組B組,且三組之間病變率比較存在差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1非最佳培養(yǎng)條件(42℃,21%O_2,1%CO_2,78%N_2)下空腸彎曲菌菌株庫(kù)中的Lulei株仍能誘發(fā)Hartley豚鼠發(fā)生周?chē)窠?jīng)病變。2微需氧條件(42℃,5%O_2,10%CO_2,85%N_2)下和好氧條件(42℃,21%O_2,1%CO_2,78%N_2)下培養(yǎng)的空腸彎曲菌Lulei株均可導(dǎo)致豚鼠周?chē)窠?jīng)發(fā)生病變,即實(shí)驗(yàn)組所有豚鼠均發(fā)生了周?chē)窠?jīng)病變,但每只豚鼠神經(jīng)病變率不一樣。3微需氧條件下培養(yǎng)的Lulei株較好氧條件下所致豚鼠發(fā)生周?chē)窠?jīng)病變率高。
【關(guān)鍵詞】：空腸彎曲菌 微需氧條件 好氧條件 Hartley豚鼠 周?chē)窠?jīng)病
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R747.9;R57
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫(xiě)11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-24
• 結(jié)果24-27
• 附圖27-34
• 附表34-36
• 討論36-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-44
• 綜述 空腸彎曲菌在不良環(huán)境下的生存機(jī)制探討44-53
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 致謝53-54
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷54

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本文編號(hào)：655883