本文關(guān)鍵詞：α-亞麻酸和花生四烯酸對HepG2細(xì)胞CYP7A1表達(dá)的影響及Nrf2的調(diào)控

  更多相關(guān)文章： α-亞麻酸 亞油酸 Nrf2 CYP7A1 過表達(dá) 沉默

【摘要】：非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)是一種常見的肝臟慢性疾病,其特點是有少量或沒有飲酒史個體的肝臟細(xì)胞中出現(xiàn)過量甘油三酯(TAG)集聚或脂肪變性。NAFLD在西方國家常發(fā),與肥胖癥,代謝綜合征和2型糖尿病等緊密關(guān)聯(lián),并且成為肝衰竭的主要原因,通過研究發(fā)現(xiàn),多數(shù)需要進(jìn)行肝臟移植治療的病例也都有NAFLD的參與。在NAFLD的疾病進(jìn)程中,脂肪酸的代謝異常會觸發(fā)機體的氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化反應(yīng),進(jìn)而誘發(fā)抗氧化反應(yīng)的中樞調(diào)節(jié)者Nrf2的表達(dá)量明顯增多。核轉(zhuǎn)錄因子Nrf2可以調(diào)控細(xì)胞對抗外來異物和氧化應(yīng)激引起的損傷,是調(diào)節(jié)機體內(nèi)氧化還原平衡的關(guān)鍵核轉(zhuǎn)錄因子。Nrf2作為機體防御機制的關(guān)鍵中樞,可作為治療多種肝臟疾病的藥物作用靶點,如非酒精性脂肪肝炎、肝硬化、急性肝損傷以及肝癌等。同時,作為NAFLD的疾病特征,膽固醇堆積也能加重內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和細(xì)胞凋亡,從而加重NAFLD程度。在肝臟中,膽固醇7α-羥化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)在將膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸中主要作用的經(jīng)典合成途徑中,起到限速酶的作用,催化膽汁酸合成的第一步反應(yīng),從而能夠?qū)⒛懝檀嫁D(zhuǎn)化成7α-羥化膽固醇。本實驗室前期研究結(jié)果表明,高脂誘導(dǎo)的小鼠發(fā)生NAFLD時藥物代謝酶CYP7A1 mRNA的表達(dá)量明顯下降,而Nrf2表達(dá)量升高,且NAFLD模型小鼠肝臟伴隨α-亞麻酸(ALA)和花生四烯酸(AA)的異常升高。為了研究NAFLD疾病進(jìn)程中CYP7A1 mRNA表達(dá)量降低與脂肪酸代謝異常的關(guān)系,以及Nrf2是否調(diào)控CYP7A1的表達(dá),進(jìn)行了本課題的研究:首先構(gòu)建Nrf2的特異性siRNA和過表達(dá)質(zhì)粒,然后將Nrf2的特異性siRNA和過表達(dá)質(zhì)粒通過脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法瞬時轉(zhuǎn)染入HepG2細(xì)胞中,建立HepG2細(xì)胞Nrf2沉默和過表達(dá)模型。在分析ALA和AA兩種脂肪酸誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞對Nrf2和CYP7A1表達(dá)量影響的基礎(chǔ)上,研究ALA和AA誘導(dǎo)對Nrf2沉默和過表達(dá)細(xì)胞CYP7A1的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)量的影響,探討脂肪酸應(yīng)激刺激誘導(dǎo)的CYP7A1的變化與Nrf2的相關(guān)性。采用MTT法確定本試驗中ALA和AA的誘導(dǎo)濃度為0.25mmol/L、0.5mmol/L和1mmol/L。與空白對照組相比,脂肪酸作用誘導(dǎo)后,HepG2細(xì)胞Nrf2 mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)量增加,且成劑量依賴性;采用ALA誘導(dǎo)后,HepG2細(xì)胞CYP7A1mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)量成劑量依賴性升高,而采用AA誘導(dǎo)后,HepG2細(xì)胞CYP7A1mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)量則成劑量依賴性降低。當(dāng)轉(zhuǎn)染si-Nrf2使Nrf2沉默后,ALA和AA誘導(dǎo)CYP7A1 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)量的趨勢與對照組相同,但每個濃度作用下與對照組相比都有所升高,當(dāng)轉(zhuǎn)染Nrf2過表達(dá)質(zhì)粒使Nrf2過表達(dá)后,ALA和AA誘導(dǎo)CYP7A1 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)量的趨勢與對照組相同,但每個濃度作用下與對照組相比卻都有所降低。以上結(jié)果表明,ALA的誘導(dǎo)量與HepG2細(xì)胞CYP7A1的表達(dá)量呈正相關(guān),而AA的誘導(dǎo)量與HepG2細(xì)胞CYP7A1表達(dá)量呈負(fù)相關(guān),Nrf2是調(diào)控ALA和AA誘導(dǎo)CYP7A1表達(dá)的通路之一。
【關(guān)鍵詞】：α-亞麻酸 亞油酸 Nrf2 CYP7A1 過表達(dá) 沉默
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575.5
【目錄】：

• 摘要8-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-19
• 1.1 非酒精性脂肪肝病11-12
• 1.1.1 NAFLD的發(fā)病機制11-12
• 1.1.2 脂肪酸與NAFLD的關(guān)系12
• 1.2 脂肪酸12-14
• 1.2.1 脂肪酸的分類12-13
• 1.2.2 飽和脂肪酸13
• 1.2.3 不飽和脂肪酸13-14
• 1.2.4 NAFLD與脂肪酸14
• 1.3 核轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子14-16
• 1.3.1 Nrf2的結(jié)構(gòu)和功能14-15
• 1.3.2 Nrf2與NAFLD15
• 1.3.3 Nrf2與CYP450酶15-16
• 1.4 CYP7A1研究進(jìn)展16-17
• 1.4.1 CYP7A1概述16
• 1.4.2 膽固醇對CYP7A1的調(diào)節(jié)16-17
• 1.4.3 脂肪酸對CYP7A1的調(diào)節(jié)17
• 1.5 研究目的和意義17-19
• 2 材料和方法19-29
• 2.1 試驗材料19-22
• 2.1.1 試驗細(xì)胞19
• 2.1.2 主要儀器設(shè)備19
• 2.1.3 藥品和試劑19-20
• 2.1.4 溶液配制20-22
• 2.2 試驗方法22-29
• 2.2.1 HepG2細(xì)胞的培養(yǎng)22
• 2.2.2 ALA和AA對HepG2細(xì)胞誘導(dǎo)濃度的選擇22-23
• 2.2.3 瞬時過表達(dá)Nrf2細(xì)胞模型的建立23-24
• 2.2.4 瞬時沉默Nrf2細(xì)胞模型的建立24-25
• 2.2.5 ALA和AA對HepG2細(xì)胞Nrf2和CYP7A1蛋白質(zhì)表達(dá)量的影響25-26
• 2.2.6 ALA和AA對HepG2細(xì)胞Nrf2和CYP7A1 mRNA表達(dá)量的影響26-27
• 2.2.7 ALA和AA對Nrf2基因沉默HepG2細(xì)胞CYP7A1表達(dá)的影響27-28
• 2.2.8 ALA和AA對Nrf2基因過表達(dá)HepG2細(xì)胞CYP7A1表達(dá)的影響28
• 2.2.9 統(tǒng)計學(xué)分析28-29
• 3 結(jié)果29-44
• 3.1 不同濃度的ALA和AA對HepG2細(xì)胞活性的影響29
• 3.2 ALA和AA對HepG2細(xì)胞Nrf2和CYP7A1表達(dá)的影響29-33
• 3.2.1 ALA和AA對HepG2細(xì)胞Nrf2 mRNA表達(dá)量的影響29-30
• 3.2.2 ALA和AA對HepG2細(xì)胞Nrf2蛋白質(zhì)表達(dá)量的影響30-31
• 3.2.3 ALA和AA對HepG2細(xì)胞CYP7A1 mRNA表達(dá)量的影響31-32
• 3.2.4 ALA和AA對HepG2細(xì)胞CYP7A1蛋白質(zhì)表達(dá)量的影響32-33
• 3.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化33-35
• 3.3.1 熒光顯微鏡檢測HepG2細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率33
• 3.3.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染時間對HepG2細(xì)胞Nrf2蛋白質(zhì)表達(dá)量的影響33-34
• 3.3.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染時間對HepG2細(xì)胞Nrf2 mRNA表達(dá)量的影響34-35
• 3.4 siRNA轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化35-38
• 3.4.1 熒光顯微鏡檢測siRNA轉(zhuǎn)染效率35
• 3.4.2 不同siRNA序列對HepG2細(xì)胞Nrf2沉默效率的影響35-36
• 3.4.3 siRNA轉(zhuǎn)染時間對HepG2細(xì)胞Nrf2蛋白質(zhì)表達(dá)量的影響36-37
• 3.4.4 siRNA轉(zhuǎn)染時間對Nrf2 mRNA表達(dá)量的影響37-38
• 3.5 沉默或過表達(dá)Nrf2對HepG2細(xì)胞CYP7A1表達(dá)的影響38-40
• 3.6 ALA和AA誘導(dǎo)對Nrf2沉默或過表達(dá)HepG2細(xì)胞CYP7A1蛋白質(zhì)表達(dá)的影響40-42
• 3.6.1 ALA對Nrf2沉默或過表達(dá)HepG2細(xì)胞CYP7A1蛋白質(zhì)表達(dá)量的影響40-41
• 3.6.2 AA對沉默或過表達(dá)Nrf2的HepG2細(xì)胞CYP7A1蛋白質(zhì)表達(dá)量的影響41-42
• 3.7 ALA和AA對沉默或過表達(dá)Nrf2 HepG2細(xì)胞的CYP7A1 mRNA表達(dá)量的影響42-44
• 3.7.1 ALA對沉默或過表達(dá)Nrf2的CYP7A1 mRNA表達(dá)量的影響42-43
• 3.7.2 AA對沉默和過表達(dá)Nrf2的HepG2細(xì)胞CYP7A1 mRNA表達(dá)量的影響43-44
• 4 討論44-48
• 4.1 細(xì)胞系和脂肪酸種類的選擇44
• 4.2 不同濃度脂肪酸對細(xì)胞活性的影響44-45
• 4.3 ALA和AA對Nrf2表達(dá)的影響45
• 4.4 ALA和AA對CYP7A1表達(dá)的影響45-46
• 4.5 Nrf2基因沉默和過表達(dá)模型的建立46-47
• 4.6 Nrf2沉默和過表達(dá)后ALA和AA對CYP7A1表達(dá)的影響47-48
• 5 結(jié)論48-49
• 致謝49-50
• 參考文獻(xiàn)50-59
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文59

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 邱鵬程;王四旺;王劍波;孫紀(jì)元;王捷頻;畢琳琳;;α-亞麻酸的資源研究及其應(yīng)用前景[J];時珍國醫(yī)國藥;2010年03期

2 尤麗菊;劉國玲;;α-亞麻酸的藥理作用[J];中國社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學(xué)專業(yè));2011年29期

3 ;神奇的α-亞麻酸:擺脫疾病、抗擊衰老 健康過百年 生命有質(zhì)量! “藥物治療”之外的又一條新路[J];老同志之友;2014年02期

4 小鳳;;亞麻酸掀起綠色保健革命[J];中國保健營養(yǎng);2010年05期

5 陶國琴,李晨;α—亞麻酸的保健功效及應(yīng)用[J];食品科學(xué);2000年12期

6 李英霞,武繼彪,鐘方曉;α-亞麻酸的研究進(jìn)展[J];中草藥;2001年07期

7 司全金;;天然保健物質(zhì):α-亞麻酸[J];解放軍保健醫(yī)學(xué)雜志;2006年03期

8 王宏釗;繆珊;孫紀(jì)元;;α-亞麻酸藥理研究進(jìn)展[J];國際藥學(xué)研究雜志;2007年04期

9 朱保忠;李琳;;α-亞麻酸與抗氧化劑聯(lián)用對果蠅壽命及小鼠抗氧化能力的影響[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年07期

10 ;營養(yǎng)短板 健康智慧的物質(zhì)基礎(chǔ)——α-亞麻酸[J];廣西質(zhì)量監(jiān)督導(dǎo)報;2009年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陶國琴;李晨;;α-亞麻酸的保健功效及應(yīng)用[A];未來五十年北京農(nóng)業(yè)與食品業(yè)的發(fā)展研討會論文集[C];2000年

2 陶國琴;李晨;;α-亞麻酸的保健功效及應(yīng)用[A];21世紀(jì)人類食品面臨的新問題學(xué)術(shù)論文集[C];2001年

3 徐章華;邵玉芬;朱國輝;;α-亞麻酸油對大鼠血脂及血液流變性的影響[A];中國營養(yǎng)學(xué)會第七屆全國營養(yǎng)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];1996年

4 劉峰;瞿育綺;王正武;;α-亞麻酸的微乳化研究[A];中國化學(xué)會第十一屆膠體與界面化學(xué)會議論文摘要集[C];2007年

5 鄧乾春;禹曉;黃鳳洪;黃慶德;楊金娥;;不同α-亞麻酸含量油脂降脂活性研究[A];達(dá)能營養(yǎng)中心第十三屆學(xué)術(shù)研討會“膳食脂肪與健康”論文集[C];2010年

6 夏虹;;α-亞麻酸與中國孕產(chǎn)婦專用營養(yǎng)包 阿法林 潤康的臨床應(yīng)用[A];第13屆全國臨床營養(yǎng)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2011年

7 李辰;范海陸;邸多隆;;營養(yǎng)保健雞蛋中α-亞麻酸含量的測定[A];“食品加工與安全”學(xué)術(shù)研討會暨2010年廣東省食品學(xué)會年會論文集[C];2010年

8 韓娜;趙建邦;宋平順;;氣相色譜法測定火麻仁中亞油酸、α-亞麻酸的含量[A];西北地區(qū)第六屆色譜學(xué)術(shù)報告會甘肅省第十一屆色譜年會論文集[C];2010年

9 曾光;劉許強;劉勇;;α-亞麻酸微液滴與臭氧非均相反應(yīng)動力學(xué)的紅外光譜研究[A];中國化學(xué)會第29屆學(xué)術(shù)年會摘要集——第29分會：公共安全化學(xué)[C];2014年

10 董蔚;趙陽;王勐騁;夏光敏;;小麥漸滲系耐鹽重要基因作用機制研究[A];2013全國植物生物學(xué)大會論文集[C];2013年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 本報記者 梁慶華 邱德生;食品中強化α-亞麻酸成為一種趨勢[N];中國食品報;2011年

2 本報記者 梁慶華 余春槐 通訊員 趙慶;α-亞麻酸的主要功能及其市場前景[N];中國食品報;2011年

3 記者　何建昆;一擔(dān)坊 引領(lǐng)食用油健康新產(chǎn)業(yè)[N];科技日報;2007年

4 本報記者 盧素仙;揭開人類大腦記憶結(jié)構(gòu)之謎[N];科技日報;2008年

5 重慶市優(yōu)勝科技發(fā)展有限公司 潘存霞;α-亞麻酸是強化動物防御機制的首選[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2013年

6 韓昊;第四代增強記憶產(chǎn)品在首都問世[N];科技日報;2008年

7 本報記者 雷震宇;大慶“血管清道夫”媲美歐洲制造[N];大慶日報;2011年

8 ;α-亞麻酸與人類生命健康[N];上海中醫(yī)藥報;2008年

9 上海嘉園生物科技營養(yǎng)師 亞一;α-亞麻酸與孕婦嬰幼兒保�。ㄖ澹N];上海中醫(yī)藥報;2008年

10 上海嘉園生物科技營養(yǎng)師 亞一;用α-亞麻酸防止“老年性癡呆”[N];上海中醫(yī)藥報;2008年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 石苗茜;α-亞麻酸改善高血壓胰島素抵抗大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的作用和機制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉旭;紫蘇α-亞麻酸的提純工藝及其軟膠囊產(chǎn)品的開發(fā)與保藏[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 姜瑤;芍藥種子中α-亞麻酸生物合成相關(guān)基因的克隆與表達(dá)[D];揚州大學(xué);2015年

3 王曉輝;紫蘇化學(xué)成分和抗腫瘤的研究[D];吉林大學(xué);2016年

4 于歡歡;蘇麻油中α-亞麻酸的純化及其保健型鴨肉醬的研制[D];貴州大學(xué);2015年

5 張金銘;α-亞麻酸和花生四烯酸對HepG2細(xì)胞CYP7A1表達(dá)的影響及Nrf2的調(diào)控[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 朱保忠;α-亞麻酸及其復(fù)合劑抗氧化及延長壽命作用的評價[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

7 陳穎娣;超臨界CO_2萃取α-亞麻酸及相平衡研究[D];武漢工程大學(xué);2010年

8 劉艷豐;富含α-亞麻酸的偏甘油酯的酶法制備及其理化性質(zhì)研究[D];華南理工大學(xué);2012年

9 陳亮;核桃油、紫蘇油、α-亞麻酸、亞油酸對大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響研究[D];武漢工業(yè)學(xué)院;2010年

10 周薇;α-亞麻酸對瘤胃微生物生物氫化中間產(chǎn)物的影響[D];延邊大學(xué);2014年

，

本文編號：608906