本文關(guān)鍵詞：降脂益生菌對非酒精性脂肪肝大鼠膽汁酸代謝的影響

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【摘要】：背景和目的:非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)包含了一些列肝臟病理學(xué)變化,從單純性肝細(xì)胞脂肪沉積到非酒精性脂肪性肝炎,甚至可以發(fā)展為肝硬化或者肝細(xì)胞癌。NAFLD特點是過多的中性脂質(zhì)沉積在肝細(xì)胞中,導(dǎo)致脂質(zhì)利用與脂質(zhì)排出失衡。目前,NAFLD是世界上最常見的肝病,可影響到25%-30%人群,尤其是,在超重、肥胖及Ⅱ型糖尿病患者中,NAFLD非常普遍。而且,NAFLD與代謝綜合征的特征密切相關(guān),而表現(xiàn)在肝臟上的這些特征則可增加心臟代謝危險[1-3]。盡管NAFLD發(fā)病的病理生理學(xué)機制很復(fù)雜,并且尚未完全清楚[4],目前多數(shù)研究者認(rèn)為長期高脂飲食(high fat diet,HFD)、腸道菌群紊亂紊亂參與代謝綜合征的發(fā)病。此外,一系列研究已經(jīng)表明腸道菌群與腸-肝軸之間存在著雙向互動即微生物-腸-肝軸,應(yīng)用益生菌干預(yù)則可以減輕肝臟脂肪浸潤。然而,在非酒精性脂肪肝中,腸道微生物如何影響腸-肝軸發(fā)揮作用目前也尚未明確。非酒精性脂肪肝主要通過限制能量攝入、運動以及藥物等方法治療,但效果均不理想。我們前期研究證實,給予高脂飲食大鼠降脂益生菌(DM9054+86066菌株)干預(yù)通過調(diào)節(jié)腸道菌群,可降低大鼠血脂水平,改善肝臟脂肪變性,減輕肝臟炎癥及肝細(xì)胞損傷,并且可以上調(diào)腸道FXR mRNA表達(dá)水平。這表明我們篩選的降脂益生菌可能通過調(diào)控膽汁酸代謝改善動物模型高脂血癥及脂肪肝,但其對膽汁酸代謝的具體影響及機制仍不清楚。因此,本研究通過高脂飲食建立nafld大鼠模型,研究nafld大鼠膽汁酸代謝變化,并探討降脂益生菌如何通過調(diào)節(jié)膽汁酸代謝改善大鼠非酒精性脂肪肝,為開拓nafld的新療法提供理論依據(jù)。材料和方法:spf級雄性sd大鼠21只(體重180g-200g),適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后,隨機選取7只分別分組為對照組,模型組,降脂益生菌干預(yù)組。對照組給予正常飲食,模型組及干預(yù)組給予高脂飲食。對照組及模型組給予生理鹽水灌胃,干預(yù)組給予2×1010cfu益生菌(dm9054及86066各1×1010cfu)灌胃。建模及干預(yù)時間均為20周,每周測體重及飲食量一次。實驗結(jié)束后處死大鼠,留取各組大鼠血清、肝臟、回腸組織及糞便。南京建成試劑盒檢測大鼠血清甘油三酯及膽固醇水平;elisa檢測大鼠血清ck-18m30水平。使用realtimepcr評估了cyp7a1、fxrmrna以及回腸fxr、asbt、fgf15mrna表達(dá)水平。westernblot檢驗肝臟cyp7a1、fxr及回腸asbt蛋白表達(dá)水平。免疫組織化學(xué)法分析肝臟fxr及腸道fxr蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.大鼠一般指標(biāo)變化:與對照組相比,模型組體重明顯增加,血甘油三酯、膽固醇水平升高,血清ck18水平升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);與模型組相比,降脂益生菌干預(yù)后可使大鼠體重減輕,血清甘油三酯、膽固醇及ck18水平降低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。2.病理變化:與對照組相比,模型組肝臟he染色及蘇丹染色可見明顯炎癥細(xì)胞及脂肪浸潤,益生菌干預(yù)后肝臟脂肪浸潤減輕;回腸he染色可見模型組小腸絨毛損傷,而益生菌干預(yù)后可使腸絨毛損傷好轉(zhuǎn)。3.大鼠肝臟cyp7a1表達(dá)水平:與對照組相比,模型組肝臟cyp7a1mrna表達(dá)量明顯降低(p0.05);與模型組相比,干預(yù)組cyp7a1mrna表達(dá)量明顯上升(p0.05);肝臟cyp7a1蛋白表達(dá)結(jié)果與基因表達(dá)水平一致。4.大鼠肝臟fxr表達(dá)水平:與對照組相比,模型組肝臟fxrmrna表達(dá)水平明顯升高(p0.05);與模型組相比,干預(yù)組肝臟fxrmrna表達(dá)水平明顯降低。westernblot及免疫組化結(jié)果與基因表達(dá)水平一致。5.大鼠腸道FXR-FGF15信號通路變化:與對照組相比,模型組腸道FXR,FGF15 mRNA水平降低(P0.05);與模型組相比,干預(yù)組腸道FXR,FGF15 mRNA明顯升高(P0.05)�；啬cFXR免疫組化結(jié)果與基因表達(dá)水平一致。6.大鼠腸道ASBT表達(dá)水平:與對照組相比,模型組小腸ASBT mRNA表達(dá)水平明顯升高(P0.05);與模型組相比,干預(yù)組小腸ASBT mRNA表達(dá)水平明顯降低(P0.05)。Western blot結(jié)果與基因表達(dá)水平一致。結(jié)論:1.長期高脂飲食可造成SD大鼠肝臟脂肪浸潤及肝細(xì)胞損傷,降脂益生菌干預(yù)則可改善脂肪肝;2.在非酒精性脂肪肝大鼠模型中,長期高脂飲食下調(diào)CYP7A1表達(dá)主要通過加重肝細(xì)胞損傷,激活肝臟FXR通路并上調(diào)回腸ASBT來實現(xiàn);降脂益生菌干預(yù)可通過減輕NAFLD大鼠肝細(xì)胞損傷,抑制肝臟FXR表達(dá)并下調(diào)回腸ASBT,最終上調(diào)CYP7A1表達(dá);3.長期高脂飲食可使SD大鼠小腸絨毛損傷,抑制腸道FXR-FGF15信號通路;降脂益生菌則可改善小腸絨毛,激活腸道FXR-FGF15信號通路,從而改善脂肪肝;
【關(guān)鍵詞】：非酒精性脂肪肝 降脂益生菌 膽固醇7α-羥化酶 法尼醇受體 回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運通道
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 中英文縮略詞對照表12-14
• 引言14-16
• 材料與方法16-32
• 結(jié)果32-42
• 討論42-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 綜述 非酒精性脂肪肝的研究進(jìn)展50-69
• 參考文獻(xiàn)60-69
• 個人簡歷及在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文69-70
• 致謝70

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本文編號：573149