本文關鍵詞：肝增殖模型中肝卵圓細胞增殖規(guī)律的初步研究

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【摘要】：目的:初步探討肝增殖模型中Hoc增殖的規(guī)律和肝臟組織中TGFβ、ALK-1、ALK-5表達的變化及其與Hoc增殖規(guī)律之間存在的聯(lián)系。方法:將F344大鼠采用隨機數(shù)字表法分成假手術組(腹部正中切口不做任何處理,縫合腹腔)、肝切除組(PH組:肝2/3切除,術后灌胃50%食用酒精)、2-乙酰氨基芴組(2-AAF/PH組:肝2/3切除,術后灌胃2-乙酰氨基芴),然后再分別按照時間點隨機分為3個亞組,共計9組,分別為:假手術組7d、14d、21d(n=18);肝切除組7d、14d、21d(n=18);2-乙酰氨基芴組7d、14d、21d(n=18)。各組按照設置的時間點取肝臟組織。蘇木素-伊紅染色觀察肝臟組織細胞的病理學改變;應用免疫組織化學法鑒定Hoc。RT-PCR、Western-blot分別檢測各組肝臟組織中7d、14d、21d時TGFβ、ALK-1、ALK-5的m RNA及蛋白水平的表達。結果:HE染色:假手術組術后可見大鼠肝小葉清晰,排列整齊,肝細胞結構正常;PH組術后可見肝細胞水腫,結構也逐漸發(fā)生改變,少數(shù)的肝細胞呈現(xiàn)點狀壞死;2-AAF/PH組術后在肝匯管區(qū)周圍可見成簇或者散在分布的細胞,呈卵圓形,體積小,約為正常肝細胞的1/3,細胞核深染,胞質(zhì)較少。免疫組織化學結果顯示:假手術組各時間點很難見到EPCAM和Thy-1陽性細胞(肝卵圓細胞);PH組在術后7d可見少量的Hoc;術后14d可見陽性細胞向肝內(nèi)遷移,術后21d僅見很少量Hoc;2-AAF/PH組術后7d、14d可見與PH組相似結果,但Hoc明顯增多且術后21d依然可見多量的Hoc.RT-PCR、Western-blot檢測結果:TGFβm RNA和蛋白的表達水平,PH組和2-AAF/PH組高于假手術組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),PH組高于2-AAF/PH組差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01),假手術組三時間點表達的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),PH組和2-AAF/PH組三時間點表達差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);ALK-5m RNA和蛋白的表達水平,PH組和2-AAF/PH組高于假手術組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),2-AAF/PH組高于PH組,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01),假手術組三時間點表達的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),PH組和2-AAF/PH組三時間點表達差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。ALK-1m RNA和蛋白的表達水平,PH組和2-AAF/PH組高于假手術組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),PH組高于2-AAF/PH組差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),假手術組三時間點表達的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),PH組和2-AAF/PH組三時間點表達差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。結論:1.利用肝2/3切除和術后灌胃抑制肝細胞增殖的2-乙酰氨基芴成功構建了肝增殖微環(huán)境下的肝卵圓細胞增殖模型;肝卵圓細胞EPCAM和Thy-1表達陽性。2.TGFβ及其受體的表達和Hoc增殖都呈現(xiàn)動態(tài)趨勢;Hoc增殖趨勢與TGFβ、ALK-1表達的動態(tài)趨勢不同步和ALK-5動態(tài)表達趨勢同步,提示TGFβ在Hoc增殖的調(diào)控機制中的作用可能具有多樣性。
【關鍵詞】：肝卵圓細胞 轉(zhuǎn)化生長因子β 激活素受體樣激酶激活1 激活素受體樣激酶5 動物模型
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575;R-332
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 英文縮略語表9-10
• 前言10-12
• 第一部分 肝卵圓細胞增殖模型的構建12-14
• 材料與方法12-14
• 1.1 實驗動物及分組12
• 1.2 主要儀器設備及試劑12-13
• 1.3 模型構建13-14
• 第二部分：肝增殖模型中肝卵圓細胞增殖規(guī)律研究的體內(nèi)實驗14-26
• 材料與方法14-26
• 1.1 實驗材料14-17
• 1.2 實驗檢測方法和步驟17-24
• 1.3 技術路線圖24-25
• 1.4 統(tǒng)計分析25-26
• 結果26-37
• 2.1 顯微鏡觀察Hoc的形態(tài)和表面標志物的表達26-29
• 2.2 Real-timePCR檢測肝臟組織中TGFβ、ALK-5、ALK-1 的mRNA的表達29-33
• 2.3 Western-blot檢測肝臟組織中TGFβ、ALK-5、ALK-1 蛋白的表達33-37
• 討論37-40
• 3.1 肝卵圓細胞增殖模型構建和Hoc表面標志物的鑒定37-38
• 3.2 TGFβ、ALK-5、ALK-1 的動態(tài)表達與肝卵圓細胞增殖的聯(lián)系38-40
• 結論40-41
• 1. 利用肝 2/3 切除和術后灌胃抑制肝細胞增殖的 2-乙酰氨基芴成功構建了肝增殖微環(huán)境下的肝卵圓細胞增殖模型。40
• 2. EPCAM和Thy-1 在Hoc表達陽性，可以作為鑒定Hoc標志物。40
• 3. 在肝卵圓細胞增殖模型中，，TGFβ及其受體的表達和Hoc增殖都呈現(xiàn)動態(tài)趨勢40-41
• 參考文獻41-45
• 綜述45-54
• 參考文獻51-54
• 致謝54-55
• 作者簡介55-56
• 石河子大學碩士研究生學位論文導師評閱表56

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