本文關鍵詞：降鈣素基因相關肽（CGRP）與急性胰腺炎的發(fā)生發(fā)展的關系研究

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【摘要】：急性胰腺炎(Acute pancreatitis)是威脅人類健康的重要疾病之一,目前認為除了酶異常分泌或異位激活機制外,還存在復雜的免疫或者神經分泌介導的炎癥反應,而且可能是決定患者預后、減少致死率的關鍵。因此,近年來神經內分泌免疫調控體系在急性胰腺炎發(fā)生發(fā)展過程中的作用備受矚目,其中降鈣素基因相關肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)是重要的免疫調節(jié)肽,是新近發(fā)現的具有負向調節(jié)功能的神經肽,可防止免疫功能過度激活后致炎因子對機體造成的損傷作用,參與維持機體內環(huán)境的穩(wěn)態(tài)平衡。CGRP不但參與急性胰腺炎的疼痛、炎癥等病理過程,而且對神經元還有保護作用。⑴臨床角度大樣本驗證血清CGRP和血清胰蛋白酶的表達量是否與病情相關。應用ELISA法檢測膽源性急性胰腺炎(n=72)、高血脂性急性胰腺炎(n=60)、特發(fā)性急性胰腺炎(n=8)和正常對照(n=60)的血清胰蛋白酶、CGRP等指標,分析其相關性以及與疾病的關聯,同時收集患者的一般臨床資料進行統計。⑵動物水平本實驗采用腹腔一次性注射雨蛙肽的方法制造急性胰腺炎C57BL/6小鼠模型,并應用組織病理、免疫組織化學等技術對降鈣素基因相關肽在急性胰腺炎小鼠胰腺等組織中的表達變化進行分析。皮下注射CGRP,研究急性胰腺炎模型小鼠的胰腺炎癥狀是否減輕;注射商品化的CGRP受體拮抗劑(CGRP8 37),觀察急性胰腺炎炎癥是否加重,從正反兩方面驗證CGRP在急性胰腺炎中的保護作用。方法:本實驗具體設計分2個步驟:一、患者血清CGRP水平與急性胰腺炎的關系以及不同類型急性胰腺炎的一般臨床資料分析(1)急性胰腺炎患者和同期正常對照血清樣本胰蛋白酶和CGRP的測定;(2)分析血清胰蛋白酶和CGRP作為急性胰腺炎篩查標志物的可靠性;(3)探討不同急性胰腺炎類型(膽源性急性胰腺炎、高血脂性急性胰腺炎、特發(fā)性急性胰腺炎)之間一般臨床指標的差異性;(4)分析血清CGRP和胰蛋白酶濃度的相關性。二、應用C57BL/6小鼠模型驗證CGRP在急性胰腺炎發(fā)生發(fā)展過程中的作用(1)采用腹腔一次性注射雨蛙肽的方法制造急性胰腺炎小鼠模型。本實驗中的動物為正常對照組、急性胰腺炎組、CGRP治療組和CGRP受體拮抗劑(CGRP8 37)治療組;(2)檢測正常對照組和急性胰腺炎組小鼠12小時的胰腺組織胰蛋白酶活力、血清淀粉酶活力的表達變化;(3)檢測正常對照組和急性胰腺炎組小鼠24小時的胰腺組織胰蛋白酶活力、血清淀粉酶活力的表達變化;(4)設立正常對照組、急性胰腺炎組、CGRP治療組和CGRP受體拮抗劑(CGRP8 37)治療組,檢測急性胰腺炎發(fā)生24小時之后的血清CGRP、淀粉酶等的表達變化以及胰腺組織的大體病理變化。(5)各急性胰腺炎小鼠模型(包括對照組、模型組、CGRP治療和CGRP8 37治療組)的胰腺組織的CGRP表達情況及其與炎癥浸潤細胞的關系。結果:1.通過單因素分析顯示三組(膽源性、高脂性、特發(fā)性)急性胰腺炎患者除了血脂和糖尿病指標(Hb A1C、GLU和TG)存在差異以外,其他如年齡、性別等一般臨床指標之間均無顯著差異(P≥0.05);2.男性急性胰腺炎患者的血清胰蛋白酶(n=94,75.25±33.62 pg/m L)顯著高于女性患者(n=46,55.23±22.32 pg/m L),p=0.023;有炎性滲出患者的血清胰蛋白酶(85.26±42.33 pg/m L)顯著高于無炎性滲出患者(42.36±18.25 pg/m L),p0.01;另外,血清胰蛋白酶的濃度還和病程病情相關,越嚴重越高;3.血清CGRP在各組間(膽源性、高脂性、特發(fā)性急性胰腺炎)的表達均呈顯著性差異(p0.01),男性患者的血清CGRP(n=94,98.63±25.45 pg/m L)顯著高于女性患者(n=46,70.12±30.56 pg/m L),p=0.029;有炎性滲出患者的血清CGRP(125.32±58.45 pg/m L)顯著高于無炎性滲出患者(65.23±33.20pg/m L),p0.01;另外,血清CGRP的濃度還和急性胰腺炎的評級有關,越嚴重越高;4.急性胰腺炎模型組小鼠的胰腺組織蛋白酶活力顯著高于正常組,其中正常對照的胰蛋白酶活力為5600±1500 U/mgprot、急性胰腺炎模型組(12小時)為7800±1800 U/mgprot和急性胰腺炎模型組(24小時)為9200±650 U/mgprot,急性胰腺炎模型組(12小時)顯著高于正常組(p=0.0152),而且24小時急性胰腺炎模型組也顯著高于12小時急性胰腺炎模型組(p=0.0215),均具有統計學差異,提示雨蛙素致小鼠急性胰腺炎模型建立成功;5.在胰腺病變程度評價中,CGRP干預組(制模前或制模同時)均有胰腺充血、腫脹,但程度明顯較模型組輕。而應用CGRP受體阻滯劑CGRP8-37組的炎癥浸潤情況較模型組更為嚴重,實驗從正反兩方面證實了CGRP在胰腺損傷中的保護作用;6.模型組的血清淀粉酶(AMY)為18580±1952 U/ml顯著高于正常對照組(4985±545 U/ml,p0.01);而在藥物干預研究中,我們發(fā)現制模前注射CGRP和制模同時注射CGRP其血清AMY分別為5012±630 U/ml和6203±596 U/ml,不同干預時間組間不存在顯著性的差異;有趣的是CGRP干預之后,其血清淀粉酶與正常對照之間沒有顯著性差異。而應用CGRP8-37受體阻滯劑組的血清淀粉酶(16590±780 U/ml)顯著高于正常對照和CGRP干預組,而與模型組之間無顯著性差異;7.CGRP受體阻滯劑干預組的血清CGRP水平(中位數13.92 pg/ml)顯著低于CGRP干預組(中位數分別54.71和73.60 pg/ml)和模型組(中位數30.27pg/ml),但和正常對照組(中位數14.37 pg/ml)比較沒有顯著性差異;CGRP干預的時間點對血清CGRP的影響不大;CGRP干預小鼠的血清CGRP濃度顯著高于模型組;這是否和外來CGRP滲入血管有關呢?8.CGRP受體阻滯劑提前干預組的急性胰腺炎小鼠胰腺組織中CGRP呈低表達或弱表達,與正常對照差異不大。而在CGRP治療組中,可見CGRP在匯管區(qū)附近呈強表達,成簇分布。結論:1.急性胰腺炎時血清CGRP明顯增高,說明CGRP在急性胰腺炎的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的作用;2.外源性CGRP能夠改善急性胰腺炎微循環(huán)從而減輕急性胰腺炎病理損害;3.CGRP受體拮抗劑(CGRP8-37)可以加重急性胰腺炎病理性損害。
【關鍵詞】：急性胰腺炎 降鈣素基因相關肽 CGRP 胰蛋白酶
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R576
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-16
• 第一部分 血清胰蛋白酶、降鈣素基因相關肽與急性胰腺炎的關系16-30
• 材料與方法17-21
• 結果21-25
• 討論25-28
• 參考文獻28-30
• 第二部分 急性胰腺炎C57BL/6 小鼠模型的建立及其降鈣素基因相關肽的檢測30-51
• 第一節(jié) 急性胰腺炎C57BL/6 小鼠模型的建立31-39
• 材料與方法31-32
• 實驗方法32-34
• 結果34-38
• 小結38-39
• 第二節(jié) CGRP在急性胰腺炎小鼠模型胰腺組織及其血清中的表達及其CGRP和CGRP_(8-37)干預治療的情況39-49
• 材料與方法39-40
• 實驗方法40-42
• 結果42-48
• 討論48-49
• 參考文獻49-51
• 綜述 急性胰腺炎的研究進展51-62
• 參考文獻58-62
• 致謝62

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