本文關(guān)鍵詞：利拉魯肽對高糖環(huán)境下大鼠肝星狀細胞增殖的影響及與ERK信號通路關(guān)系研究

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【摘要】：目的:肝纖維化是糖尿病患者眾多合并癥之一。而肝星狀細胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝損傷發(fā)生時生成細胞外基質(zhì)的主要細胞來源,其在肝纖維化形成的過程中處于核心地位。鑒于HSC在肝纖維化的發(fā)病機制中發(fā)揮主導作用,抗纖維化的研究通常將HSC作為靶標。利拉魯肽則是一種新型的降糖藥物,類屬于人胰高糖素樣肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)受體激動劑,相關(guān)研究證明肝星狀細胞上有GLP-1受體的表達。因此我們設計此實驗,探討利拉魯肽對高糖環(huán)境下大鼠肝星狀細胞增殖的影響及與ERK信號通路的關(guān)系。方法:1大鼠肝星狀細胞(HSC-T6)的培養(yǎng):將復蘇的細胞接種至無菌培養(yǎng)瓶中,應用含10%胎牛血清的低糖改良Eagle培養(yǎng)基(dulbecco's modification of Eagle's medium Dulbecco,DMEM)溶液(含葡萄糖5.5mmol/L)作為培養(yǎng)液。將細胞置于體積分數(shù)為5%的CO2飽和濕度,37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2 MTT法確定最適利拉魯肽濃度:HSC分為11組,分別配成以下溶液:含高糖(25.0mmol/L)以及不同濃度的利拉魯肽(0 nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L、300nmol/L、400nmol/L、500nmol/L、600nmol/L、700nmol/L、800nmol/L、900nmol/L),觀察48h,MTT法檢測上述11組細胞的增殖情況。選取細胞增殖抑制率開始升到平臺期的利拉魯肽濃度700nmol/L作為最適宜利拉魯肽濃度。MTT法確定最適ERK抑制劑PD98059濃度:HSC分為7組,分別配成以下溶液:含高糖(25.0mmol/L)以及不同濃度的PD98059(0 umol/L、25umol/L、50umol/L、100umol/L、200umol/L、300umol/L、400umol/L),觀察48h,MTT法檢測上述7組細胞的增殖情況。選取細胞增殖抑制率開始升到平臺期的PD98059濃度200 umol/L為最適宜抑制劑濃度。3分組干預:將大鼠肝星狀細胞隨機分成以下5組。即正常糖對照組(5.5mmol/L)、高糖對照組(25.0mmol/L)、高滲組(5.5mmol/L葡萄糖+19.5mmol/L甘露醇)、高糖+利拉魯肽組(25.0mmol/L高糖+最適利拉魯肽濃度),簡稱利拉魯肽組、高糖+抑制劑組(25.0mmol/L高糖+最適宜PD98059濃度),簡稱抑制劑組。將5組細胞在10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)48小時進行以下操作。4采用ELISA法定量測定大鼠肝星狀細胞培養(yǎng)上清I型膠原含量。5 RT-PCR法檢測大鼠肝星狀細胞ERK mRNA的表達水平。6 Western blot法檢測ERK/p-ERK蛋白表達。7數(shù)據(jù)分析:應用Excell建立數(shù)據(jù)簿,應用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析。所得數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差(x±s)表示,應用單因素方差分析LSD法進行組間對比,P0.05為有顯著意義。結(jié)果:1 MTT法測定最適宜利拉魯肽濃度為700nmol/L,最適宜ERK抑制劑PD98059濃度為200 umol/L;2 I型膠原含量比較:與對照組相比,高滲組I型膠原含量無明顯變化(P0.05),高糖組I型膠原含量明顯增多(P0.05),利拉魯肽組與抑制劑組較高糖組I型膠原含量明顯減少(P0.05),抑制劑組較利拉魯肽組I型膠原含量減少(P0.05);3 ERK mRNA的表達水平比較:與對照組相比,高滲組ERK mRNA表達無明顯變化(P0.05),高糖組ERK mRNA明顯表達增多(P0.05),抑制劑組與利拉魯肽組較高糖組ERK mRNA表達明顯較少(P0.05),抑制劑組少于利拉魯肽組(P0.05);4 ERK表達結(jié)果:與對照組相比,高滲組p-ERK表達無明顯變化(P0.05),高糖組p-ERK明顯表達增多(P0.05),利拉魯肽組與抑制劑組較高糖組p-ERK表達均明顯較少(P0.05),抑制劑組較利拉魯肽組p-ERK表達減少(P0.05)。結(jié)論:1高糖環(huán)境能夠誘導大鼠HSC增殖。2高糖誘導HSC增殖與ERK信號通路相關(guān)。3利拉魯肽能夠通過抑制肝星狀細胞ERK信號通路,來抑制高糖狀態(tài)下大鼠HSC的增殖。
【關(guān)鍵詞】：肝星狀細胞 肝纖維化 利拉魯肽 高糖 ERK通路
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575.2;R587.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-21
• 結(jié)果21-23
• 附圖23-28
• 附表28-30
• 討論30-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻35-38
• 綜述 利拉魯肽對2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病的作用38-45
• 參考文獻42-45
• 致謝45-46
• 個人簡歷46

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張敏;葉茂;于靜;;利拉魯肽的分子結(jié)構(gòu)及其藥理作用[J];湖北民族學院學報(醫(yī)學版);2011年01期

2 陳忻;翟所迪;;利拉魯肽用于治療2型糖尿病臨床研究現(xiàn)狀[J];中國藥學雜志;2011年21期

3 王偉夫;胡欣;;利拉魯肽的臨床研究進展[J];中國醫(yī)院藥學雜志;2012年24期

4 夏景義;;利拉魯肽治療肥胖2型糖尿病12例療效分析[J];吉林醫(yī)學;2013年04期

5 陳群峰;王永祥;;利拉魯肽臨床研究進展[J];世界臨床藥物;2013年05期

6 張貴山;高春斌;楊秀紅;王文欣;;利拉魯肽治療新診斷肥胖2型糖尿病療效分析[J];河北醫(yī)藥;2013年18期

7 宋儀利;劉昌盛;;利拉魯肽治療2型糖尿病臨床觀察[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2013年33期

8 母義明;;將試驗結(jié)果轉(zhuǎn)化為臨床實踐指導——利拉魯肽全球研究的薈萃分析[J];中國糖尿病雜志;2011年05期

9 陸靜爾;任躍忠;龔維坤;賴靜波;王蘇華;龐林榮;;利拉魯肽治療新診斷2型糖尿病患者臨床療效的觀察[J];中國糖尿病雜志;2014年04期

10 李長玉;;一種新型的降糖藥——利拉魯肽[J];求醫(yī)問藥;2011年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 D.RUSSELL-JONES;G.SESTI;A.GARBER;B.ZINMAN;K.JENSEN;AFALAHATI;S.COLAGIURI;;無論是否出現(xiàn)胃腸道副反應,利拉魯肽均能降低患者的體重[A];中華醫(yī)學會第十次全國內(nèi)分泌學學術(shù)會議論文匯編[C];2011年

2 程嵐;曠勁松;;利拉魯肽臨床療效觀察[A];中華醫(yī)學會第十一次全國內(nèi)分泌學學術(shù)會議論文匯編[C];2012年

3 劉松巖;冷錦紅;高天舒;于世家;;利拉魯肽治療2型糖尿病患者的臨床研究[A];中華醫(yī)學會第十一次全國內(nèi)分泌學學術(shù)會議論文匯編[C];2012年

4 劉飛;張秀彬;曠勁松;;利拉魯肽治療肥胖2型糖尿病患者臨床觀察[A];中華醫(yī)學會第十二次全國內(nèi)分泌學學術(shù)會議論文匯編[C];2013年

5 時學秀;閆丹丹;任彥紅;黃婷;栗夏蓮;;利拉魯肽致心慌1例分析并文獻復習[A];中華醫(yī)學會第十二次全國內(nèi)分泌學學術(shù)會議論文匯編[C];2013年

6 楊淑萍;韓晟;史錄文;;利拉魯肽和其它降糖藥治療中國2型糖尿病患者的成本分析[A];2013年中國藥學會藥事管理專業(yè)委員會年會暨“醫(yī)藥安全與科學發(fā)展”學術(shù)論壇論文集（下冊）[C];2013年

7 秦潔;苗芳;張紅霞;馬嬋娟;柳潔;;2型糖尿病患者應用利拉魯肽的臨床療效及安全性[A];中華醫(yī)學會糖尿病學分會第十六次全國學術(shù)會議論文集[C];2012年

8 張萍;司敏;;利拉魯肽單藥治療早發(fā)2型糖尿病肥胖患者療效觀察[A];中華醫(yī)學會第十二次全國內(nèi)分泌學學術(shù)會議論文匯編[C];2013年

9 STEPHEN C.BAIN;JOCHEN SEUFERT;ANNE BLOCH THOMSEN;SABINA FURBER;DAVID D'ALESSIO;;利拉魯肽+二甲雙胍治療2型糖尿病在糖尿病進展過程中轉(zhuǎn)換或早期使用的臨床受益[A];中華醫(yī)學會第十一次全國內(nèi)分泌學學術(shù)會議論文匯編[C];2012年

10 張利莉;楊剛毅;李伶;;利拉魯肽改善肝臟脂質(zhì)沉積及慢性低度炎癥的分子機制研究[A];中華醫(yī)學會糖尿病學分會第十六次全國學術(shù)會議論文集[C];2012年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 劉全洲　實習生 擁青;拉魯濕地管理將依新規(guī)執(zhí)行[N];拉薩晚報;2010年

2 本報記者 田延輝;拉魯濕地自然保護區(qū)總體規(guī)劃通過評審[N];西藏日報;2000年

3 記者 尼瑪潘多;韓啟德隗福臨等考察區(qū)藏醫(yī)院藏藥廠拉魯濕地[N];西藏日報;2006年

4 記者 益西加措 馮驥;熱地視察拉魯濕地國家級自然保護區(qū)[N];西藏日報;2008年

5 聞哲;5000萬元保護拉薩拉魯濕地[N];人民日報海外版;2008年

6 ;拉魯濕地“供氧”拉薩[N];中國礦業(yè)報;2002年

7 本報記者 王立;打通拉魯濕地的“經(jīng)脈”[N];西藏日報;2010年

8 本報記者 曉勇 白瑪;綠草如茵 群鳥翱翔[N];西藏日報;2009年

9 記者 王小濤 實習生 藍智康;拉魯社區(qū)支持教育事業(yè)發(fā)展[N];拉薩晚報;2011年

10 記者 次仁卓瑪;市委召開專題會議研究拉魯濕地規(guī)劃設計情況[N];拉薩晚報;2012年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 趙昕;高糖誘導腎小管上皮細胞自噬激活以及GLP-1類似物利拉魯肽對其調(diào)節(jié)作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

2 李萌;胰高血糖素樣肽-1類似物發(fā)揮神經(jīng)保護作用及其機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2016年

3 袁磊;十二指腸輸注利拉魯肽對肝糖代謝的影響與“腸—腦—肝軸”機制[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

4 顧文元;利拉魯肽對人乳腺癌MCF-7細胞增殖、凋亡的影響及其機制研究[D];天津醫(yī)科大學;2016年

5 白蓮;利拉魯肽對2型糖尿病非酒精性脂肪肝的作用及機制研究[D];天津醫(yī)科大學;2014年

6 陽柳雪;利拉魯肽對Ⅲ型腺苷酸環(huán)化酶表達的影響及其在胰島素抵抗和肥胖中的作用[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

7 帕力萬;利拉魯肽對糖尿病大鼠腸道菌群的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

8 王佳;自噬在利拉魯肽保護胰島β細胞及對ApoE~(-/-)小鼠糖脂代謝影響的研究[D];第二軍醫(yī)大學;2013年

9 郭南京;利拉魯肽對糖尿病前期OLETF大鼠糖脂代謝的作用及相關(guān)機制[D];南方醫(yī)科大學;2012年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 高燕;短期利拉魯肽治療與強化胰島素治療對初發(fā)2型糖尿病患者胰島β細胞功能影響的研究[D];泰山醫(yī)學院;2014年

2 張麗娜;GLP-1受體在大鼠肝星狀細胞的表達及利拉魯肽對高糖條件下大鼠肝星狀細胞增殖的作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

3 劉思思;利拉魯肽臨床實踐研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

4 石志平;利拉魯肽降低2型糖尿病非酒精性脂肪肝大鼠肝臟磷酸化JNK的蛋白表達[D];河北醫(yī)科大學;2015年

5 李寧;利拉魯肽對離體大鼠胸主動脈環(huán)的舒張作用及其機制研究[D];山西醫(yī)科大學;2015年

6 滕曉煥;利拉魯肽對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護作用的研究[D];山西醫(yī)科大學;2015年

7 陳瑾;利拉魯肽抑制mTOR表達延緩糖尿病腎損傷的機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2015年

8 李意;利拉魯肽對胰島素控制血糖欠佳的2型糖尿病患者心血管危險因素的影響[D];南方醫(yī)科大學;2015年

9 劉霞;利拉魯肽聯(lián)合胰島素泵治療非初診2型糖尿病的臨床療效觀察[D];延安大學;2015年

10 劉春雨;利拉魯肽治療早期2型糖尿病腎病的療效分析及機制探討[D];大連醫(yī)科大學;2015年

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本文編號：527921