研究背景與研究目的:酒精性肝病是由長期大量飲酒造成的一類代謝性疾病,其主要病變包括脂肪堆積,纖維化和肝硬化等。據(jù)統(tǒng)計,至少60%的肝臟疾病相關(guān)死亡是由于過量飲酒造成的,目前認為氧化應(yīng)激是造成酒精性肝病發(fā)生和發(fā)展的主要原因,抗氧化應(yīng)激被認為是最直接和最有效的酒精性肝病治療策略。我們實驗室前期研究發(fā)現(xiàn),CD38基因缺失的小鼠胚胎成纖維細胞對H₂O₂和缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷具有顯著的保護作用,同時CD38干擾可以改善由心臟脂質(zhì)超載誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷,然而CD38是否可以通過影響氧化應(yīng)激影響酒精在肝損傷中的作用尚無文獻報道。本課題擬在體外制備酒精誘導(dǎo)的肝細胞損傷模型,利用原代CD38基因敲除肝細胞研究其在酒精引起肝細胞氧化應(yīng)激損傷中的作用及其具體機制,從而為酒精性肝病的防治提供新的作用靶點與研究思路。實驗方法:1.肝原代細胞的提取與酒精誘導(dǎo)的肝細胞損傷模型的制備:1)通過在體灌流法分離培養(yǎng)6-8周齡C57BL/6小鼠原代肝細胞;2)梯度濃度酒精處理體外培養(yǎng)的原代肝細胞10小時,用DCFH-DA熒光探針標記細胞活性氧（reactive oxygen ...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 前言
    1.1 酒精引起的肝損傷研究意義
    1.2 酒精吸收與代謝
    1.3 酒精代謝產(chǎn)生氧化應(yīng)激損傷
    1.4 ALDH2 與氧化應(yīng)激
    1.5 CD38 與氧化應(yīng)激
第2章 酒精對CD38 表達的影響及細胞模型的建立
    2.1 引言
    2.2 實驗材料和方法
        2.2.1 實驗材料試劑
        2.2.2 CD38 開展肝細胞特異性敲除小鼠獲取
        2.2.3 原代肝臟細胞分離培養(yǎng)
        2.2.4 蛋白印跡
        2.2.5 RNA的提取
        2.2.6 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.2.7 實時熒光定量PCR
        2.2.8 酒精引起的原代肝細胞損傷模型的制備
        2.2.9 倒置熒光顯微鏡檢測貼壁細胞ROS
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 酒精誘導(dǎo)的原代肝細胞氧化應(yīng)激模型建立
        2.3.2 酒精對原代肝細胞CD38 表達量影響
    2.4 討論
第3章 CD38 基因敲除減輕酒精誘導(dǎo)的原代肝細胞氧化應(yīng)激損傷
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 流式細胞儀檢測細胞ROS
        3.2.2 丙二醛檢測試劑盒檢測培養(yǎng)細胞MDA含量
        3.2.3 BCA法測定細胞蛋白濃度
        3.2.4 線粒體膜電位檢測
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 原代肝細胞CD38 基因敲除效率的鑒定
        3.3.2 CD38 基因敲除減輕酒精誘導(dǎo)ROS損傷
        3.3.3 CD38 基因敲除減輕酒精誘導(dǎo)原代肝細胞的MDA累積
        3.3.4 CD38 基因敲除減輕酒精誘導(dǎo)原代肝細胞的線粒體損傷
    3.4 討論
第4章 CD38 基因敲除通過增加ALDH2 表達減輕酒精誘導(dǎo)的細胞損傷
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 超氧化物歧化酶(SOD2)活性檢測
        4.2.2 Western blot
        4.2.3 RNA的提取
        4.2.4 Real-timePCR
        4.2.5 CD38 基因過表達的原代細胞構(gòu)建
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 CD38 基因敲除抑制SOD2 和促氧化應(yīng)激蛋白NOX2 的表達
        4.3.2 CD38 基因敲除增加原代肝細胞抗氧化應(yīng)激SOD活性
        4.3.3 CD38 基因敲除促進原代肝細胞ALDH2 mRNA表達
        4.3.4 CD38 基因過表達降低原代肝細胞ALDH2mRNA表達
    4.4 討論
        4.4.1 CD38 基因敲除抑制NOX2 表達及提高SOD活性減輕酒精誘導(dǎo)的肝細胞損傷
        4.4.2 CD38 基因敲除促進ALDH2 表達減輕酒精誘導(dǎo)的肝細胞損傷
第5章 結(jié)論
參考文獻
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：4037757