發(fā)布時間：2025-01-14 02:28

　　背景和目的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)逐漸成為一種全球慢性肝臟疾病,涵蓋了從單純脂肪變性到非酒精性脂肪性肝炎(NASH),以及進(jìn)展為肝纖維化和肝硬化,甚至肝細(xì)胞癌的一系列病理學(xué)變化。NAFLD是由于肝細(xì)胞內(nèi)過度中性脂質(zhì)沉積引起,主要形式是甘油三酯(TG),而TG以脂滴(LDs)的形式進(jìn)行儲存。LDs在脂肪酸(FA)的運(yùn)輸中起著核心作用。LDs表面的Perilipin 5(Plin 5)在肝臟等氧化組織中高表達(dá),其作為中性脂質(zhì)儲存和水解的主要介質(zhì),控制著體內(nèi)脂質(zhì)平衡,當(dāng)不平衡時就會導(dǎo)致脂肪肝的發(fā)生。有研究表明,過表達(dá)Plin 5能夠促進(jìn)肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的儲存,因此,Plin 5在NAFLD的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。我們前期的體外研究顯示,Plin 5可促進(jìn)LDs形成,抑制肝星狀細(xì)胞(HSCs)的激活,并誘導(dǎo)活化的HSCs凋亡,這為改善脂肪肝提供了新的見解。但體外和體內(nèi)是兩個完全不同的研究系統(tǒng),本實(shí)驗(yàn)以Plin 5-/-小鼠為研究對象,評估Plin5在體內(nèi)對高脂高果糖飲食誘導(dǎo)的NAFLD的影響。方法(1)購買的敲除小鼠是利用CRISPR/Cas9技術(shù)進(jìn)行的Plin5基因敲除。選擇后代雌性P...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．１?Ｐｌｉｎ?５敲除小鼠鑒定策略示意圖??

?材料與方法???２．２．２?ＰＣＲ?擴(kuò)增??２．２．２．１小鼠基因型鑒定引物信息??小鼠基因型鑒定設(shè)計思路如圖２．１所示。??ＦＩ?ＲＩ??－？①ＫＯ?命????—＾―?ＫＯ?ｆｒａｇｍｅｎｔ????Ｆ２?Ｒ２??－？②?ＷＴ?？??—？?Ｐｒｉｍｅｒ?①②?ＰＣ’Ｒ?Ｒｅａｃ....

圖３．１小鼠基因型鑒定??２０??

?＾???結(jié)果??１?Ｐｌｉｎ?５基因敲除小鼠鑒定??購買的Ｆ１代小鼠進(jìn)行飼養(yǎng)繁育，得到的后代進(jìn)行基因型鑒定。圖３．１Ａ為??部分小鼠基因型鑒定結(jié)果：１號、２號和５號小鼠用ＷＴ引物在４６２ｂｐ處有條帶，??用ＫＯ引物在７３７ｂｐ處有條帶，則為雜合子；６號小鼠用ＷＴ引物無條帶，用?....

圖３．２小鼠腹腔注射葡萄糖耐量試驗(yàn)結(jié)果??注：Ａ．小鼠腹腔注射葡萄糖耐量試驗(yàn)（ＩＰＧＴＴ）結(jié)果，分別檢測在Ｏｍｉｎ、１５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、??

?＾???（圖３．２Ｂ）。在小鼠禁食過夜后，首先進(jìn)行空腹血糖檢測，結(jié)果顯示：與ＮＤ組??相比，ＨＦＤ組有增高的趨勢，且ＨＦＤ－Ｐｌｉｎ５＿Ａ組小鼠血糖值更高，但均無統(tǒng)計學(xué)??差異（Ｐ＞０．０５）（圖３．２Ｃ）。在給予葡萄糖刺激１２０ｍｉｎ時，ＮＤ兩組小鼠血糖水??平無統(tǒng)計學(xué)差異（....

圖３．３小鼠肝臟肉眼觀??－－－－Ａ－－Ａ

?＾???４小鼠肝臟肉眼觀??ＮＤ－Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ組和ＮＤ－Ｐｌｉｎ５ｖ？組小鼠肝臟表面光滑、色澤紅潤、肝緣銳利，??未見脂質(zhì)沉積，且兩組未見明顯差異（圖３．３ａ和圖３．３ｃ）。與ＮＤ－Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ組相??比，ＨＦＤ－Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ組小鼠肝臟體積明顯增大，表面布滿黃色斑點(diǎn)....

本文編號：4026268