本文關(guān)鍵詞：利用CD11c-DTR小鼠研究腸道巨噬細胞在DSS誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種病因和發(fā)病機理尚不十分清楚的慢性腸道炎癥性疾病。研究發(fā)現(xiàn)活動性UC患者的大腸炎癥中巨噬細胞的數(shù)量明顯增,巨噬細胞還分泌大量的細胞因子及生物活性物質(zhì),在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要的作用。給CD11c-DTR小鼠腹腔注射DT(白喉毒素),可以完全清除腸道巨噬細胞和樹突狀細胞,而巨噬細胞和樹突狀細胞在腸道重新發(fā)育回來存在時間窗口期。DT注射后3天后樹突狀細胞優(yōu)先發(fā)育回來,兩周后巨噬細胞才能在腸道中發(fā)育回來。利用這種方法我們可以在體內(nèi)研究巨噬細胞缺失對DSS(葡聚糖硫酸鈉)誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生怎樣的作用。方法:1流式檢測CD11c-DTR小鼠腹腔注射DT后巨噬細胞和樹突狀細胞在腸道中發(fā)育回歸窗口期流式細胞術(shù)檢測CD11c-DTR小鼠注射DT后不同時間點(1d、3d、1w、2w)大腸固有層巨噬細胞(IA/IE+F4/80+)和樹突狀細胞(CD11c+CD11b+)的數(shù)量和比例的變化情況。2建立C57BL/6小鼠DSS誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎模型據(jù)Cooper等的方法,建立急性DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型:將分子量為5000的DSS溶于蒸餾水,配制成5%的DSS溶液,使C57BL/6小鼠自由飲用7天,建立小鼠急性結(jié)腸炎模型。3檢測巨噬細胞在DSS誘導(dǎo)的C57BL/6小鼠急性結(jié)腸炎中的作用流式檢測DSS誘導(dǎo)的C57BL/6小鼠急性結(jié)腸炎中大腸固有層巨噬細胞(IA/IE+F4/80+)比例和數(shù)量的變化。免疫組化檢測DSS誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎中大腸固有層巨噬細胞(IA/IE+F4/80+)數(shù)量的變化。采用RealTime PCR、ELISA方法,檢測DSS誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎直腸組織相關(guān)細胞因子分泌情況。4檢測CD11c-DTR小鼠DT窗口期(巨噬細胞缺失)DSS誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎免疫病理變化用5%的dss溶液誘導(dǎo)窗口期小鼠(cd11c-dtr小鼠腹腔注射dt后第7~14d)建立小鼠急性結(jié)腸炎模型。流式細胞術(shù)、he染色觀察在腸道巨噬細胞缺失的情況下dss誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎發(fā)生發(fā)展情況。用real-timepcr、elisa為輔助手段,檢測在腸道巨噬細胞缺失的情況下dss誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎直腸組織相關(guān)細胞因子分泌情況。結(jié)果:1cd11c-dtr小鼠在腹腔注射dt巨噬細胞和樹突狀細胞發(fā)育回歸存在窗口期:cd11c-dtr小鼠在腹腔注射dt(200ng/只)1天后,巨噬細胞和樹突狀細胞完全清除;cd11c-dtr小鼠在腹腔注射dt(200ng/只)3天后樹突狀細胞比例有所上升,但并沒有恢復(fù)到正常水平,巨噬細胞仍然處于完全清除狀態(tài);cd11c-dtr小鼠在腹腔注射dt(200ng/只)7天后樹突細胞比例完全恢復(fù)到正常狀態(tài),巨噬細胞仍然處于完全清除狀態(tài);cd11c-dtr小鼠在腹腔注射dt(200ng/只)14天后,樹突細胞比例完全恢復(fù)到正常狀態(tài),巨噬細胞仍然處于完全清除狀態(tài)。2dss誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎模型成功:使c57bl/6小鼠自由飲用5%dss溶液,模型組第3~4天開始出現(xiàn)急性結(jié)腸炎癥狀,體重下降、糞便松散、隱血試驗陽性最早出現(xiàn)于第3天,稀便和血便最早出現(xiàn)于第4天,糞便含水量在第3~4天開始明顯增加,實驗結(jié)束小鼠體重下降約50%左右,較對照組有明顯統(tǒng)計學(xué)差異;第8天取全段結(jié)腸,模型組小鼠的結(jié)腸長度較對照組短,有差異有統(tǒng)計學(xué)差異;取第8天全段結(jié)腸,he染色,全段光鏡下模型組表現(xiàn)為部分上皮脫落,炎癥細胞親潤,上皮內(nèi)杯狀細胞減少,病理學(xué)炎癥評分較對照組有明顯統(tǒng)計學(xué)差異。3dss誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎模型中巨噬細胞數(shù)量明顯增加:流式結(jié)果顯示,c57bl/6小鼠dss誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎模型第7天大腸固有層巨噬細胞(ia/ie+f4/80+)比例和數(shù)量明顯上升,較對照組有明顯差異。免疫組化檢測dss誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎第7天大腸固有層巨噬細胞(ia/ie+f4/80+)數(shù)量明顯上升,較對照組有明顯差異。4腸道巨噬細胞缺失,結(jié)腸炎明顯減輕:cd11c-dtr小鼠腹腔注射dt第7天,dss誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎模型。cd11c-dtr窗口期小鼠模型組較wt(野生型)模型組小鼠臨床癥狀減輕。cd11c-dtr窗口期小鼠模型組較WT(野生型)模型組小鼠病理學(xué)炎癥評分及HE炎癥評分均有明顯統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論:成功找到CD11c-DTR小鼠腹腔注射DT巨噬細胞和樹突狀細胞發(fā)育回歸存在的窗口期,并利用此窗口期研究DSS誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎中巨噬細胞的作用。發(fā)現(xiàn)在DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型中,巨噬細胞缺失會減輕小鼠結(jié)腸炎癥狀態(tài),顯示巨噬細胞在DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型中起著促進炎癥發(fā)生發(fā)展的作用。
【關(guān)鍵詞】：巨噬細胞 炎癥性腸病 CD11c-DTR小鼠 葡聚糖硫酸鈉(DDS) 流式細胞術(shù) HE染色 免疫組化 酶聯(lián)免疫吸附測定
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R574.62
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-22
• 結(jié)果22-26
• 附圖26-33
• 附表33-34
• 討論34-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-38
• 綜述 腸道樹突狀細胞亞群分類進展38-48
• 參考文獻42-48
• 致謝48-49
• 個人簡歷49

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1 王充;利用CD11c-DTR小鼠研究腸道巨噬細胞在DSS誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎中的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號：402533