目的 1.初步闡明新生期母愛剝奪(Neonatal Maternal Deprivation, NMD)誘導(dǎo)的成年大鼠內(nèi)臟痛過敏中脊髓背根節(jié)神經(jīng)元上電壓門控性鈉通道表達和功能的變化特征。 2.探討內(nèi)源性硫化氫合酶胱硫醚-β-合成酶(CBS)在慢性內(nèi)臟痛中的作用及其對電壓門控性鈉通道表達和功能調(diào)控的影響。 方法 1.新生鼠從出生后第2天開始到第15天，處理組和母鼠分離，每天分開3個小時，對照組不做處理。運用這種方法誘導(dǎo)大鼠的內(nèi)臟痛過敏模型。運用腹壁撤回評分(AWR score)方法評測NMD大鼠的痛行為反應(yīng)。腹腔注射CBS阻斷劑羧甲基羥胺半鹽酸(AOAA)，同樣運用以上腹壁撤回評分方法評測大鼠的痛行為反應(yīng)，從而檢測H₂S在慢性痛模型中的作用。 2.結(jié)腸管壁注射熒光素(DiI)來標記腸特異性背根神經(jīng)節(jié)(DRG)神經(jīng)元，運用全細胞膜片鉗方法研究大鼠腸相關(guān)神經(jīng)元興奮性及電壓依賴性鈉通道電流的變化特性。 3.運用Western Blotting，免疫組織化學(xué)，Quantitative Real-time PCR的實驗方法檢測大鼠腸相關(guān)DRG神經(jīng)元中NaV1.8，NaV1.9...

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 引言
第二章 材料與方法
    2.1 實驗動物
    2.2 新生期母愛剝奪(NMD)模型建立
        2.2.1 實驗儀器
        2.2.2 造模方法
    2.3 腹壁撤回反射(Abdominal Withdrawal Reflex，AWR) 評分檢測痛閾
        2.3.1 實驗儀器
        2.3.2 實驗方法
        2.3.3 給藥方法
        2.3.4 實驗用藥
    2.4 Western Blotting 檢測蛋白表達
        2.4.1 實驗試劑
        2.4.2 實驗儀器
        2.4.3 實驗方法
    2.5 急性分離 DRG 神經(jīng)元和全細胞膜片鉗實驗
        2.5.1 實驗試劑
        2.5.2 實驗儀器
        2.5.3 熒光染料 DiI 標記腸相關(guān) DRG 神經(jīng)元
        2.5.4 急性分離 DRG 神經(jīng)元
        2.5.5 拉制玻璃微電極
        2.5.6 全細胞膜片鉗記錄
        2.5.7 神經(jīng)元興奮性記錄
    2.6 實時 PCR 方法檢測 NaV1.8 表達變化
        2.6.1 T13–L2 DRG 總 RNA 的提取
        2.6.2 cDNA 的合成
        2.6.3 實時 PCR 檢測 NaV1.8 基因 mRNA 表達
    2.7 CBS 和 NaV1.8 的免疫熒光
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 鈉通道的可塑性在 NMD 誘發(fā)的內(nèi)臟痛過敏中的作用
        3.1.1 NMD 明顯增加大鼠對結(jié)腸擴張的敏感性
        3.1.2 全細胞膜片鉗記錄發(fā)現(xiàn) NMD 使腸相關(guān)的背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元興奮性增加
        3.1.3 NMD 使腸相關(guān)的背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元 TTX 不敏感鈉電流密度顯著增加
        3.1.4 NMD 使腸相關(guān) DRG 神經(jīng)元 TTX-R 鈉通道激活曲線左移
        3.1.5 NMD 顯著縮短 TTX-R 鈉通道的激活時間
        3.1.6 NMD 可以顯著增加腸特異 DRG 神經(jīng)元中 NaV1.8 的表達
    3.2 CBS-H₂S 信號系統(tǒng)在鈉通道可塑性中的調(diào)節(jié)作用
        3.2.1 CBS 受體拮抗劑 AOAA 可以顯著翻轉(zhuǎn) NMD 誘導(dǎo)的內(nèi)臟痛過敏
        3.2.2 AOAA 可以顯著降低 NMD 大鼠腸 DRG 神經(jīng)元中 NaV1.8 的表達
        3.2.3 AOAA 可以顯著降低 NMD 大鼠腸相關(guān) DRG 神經(jīng)元的 TTX-R 鈉通道的電流密度
        3.2.4 CBS 的拮抗劑 AOAA 使 NMD 大鼠 TTX-R 鈉通道的激活曲線右移
        3.2.5 AOAA 可以顯著降低 NMD 大鼠腸相關(guān) DRG 神經(jīng)元的興奮性
        3.2.6 H₂S 的供體 NaHS 可以顯著增加正常大鼠腸相關(guān) DRG 神經(jīng)元的興奮性
        3.2.7 NaHS 可以顯著增加正常大鼠腸相關(guān) DRG 神經(jīng)元的 TTX-R 鈉通道的電流密度
        3.2.8 NaHS 可以使得正常大鼠腸相關(guān) DRG 神經(jīng)元的 TTX-R 鈉通道的激活曲線左移
        3.2.9 PKA 抑制劑 H-89 阻斷 NaHS 引起正常大鼠的鈉電流密度的增加
第四章 討論
參考文獻
綜述
    Reference
攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3926325