研究目的: 慢性胰腺炎患者由于反復(fù)的炎癥刺激,致胰島β細(xì)胞損傷逐漸加重,β細(xì)胞數(shù)目明顯減少,胰島功能顯著下降;同時(shí)長期高糖毒性作用亦可引起胰腺炎的反復(fù)發(fā)作,進(jìn)一步加速胰島β細(xì)胞凋亡,從而最終發(fā)展為繼發(fā)性糖尿病。因此,控制高血糖是慢性胰腺炎后期治療的一個(gè)重要環(huán)節(jié),而目前的治療方法尚存在諸多弊端。傳統(tǒng)的體外胰島素注射治療,由于與胰島素分泌的生理模式不符,易致血糖波動(dòng)而引起相關(guān)并發(fā)癥。細(xì)胞移植治療雖為研究熱點(diǎn),但胰島β細(xì)胞分離與儲(chǔ)存技術(shù)難度較大、代價(jià)昂貴,因此尋找新的移植細(xì)胞來源是該方法亟需解決的關(guān)鍵難題。本課題應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體將調(diào)節(jié)胰島素分泌的葡萄糖傳感器——葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-2(glucose transporter-2, GLUT-2)基因轉(zhuǎn)染于INS-1細(xì)胞,使INS-1細(xì)胞的胰島素分泌更接近于生理?xiàng)l件,從而建成新型的“胰島代理細(xì)胞”系,為細(xì)胞移植治療提供新的、易供的移植細(xì)胞來源。 研究背景: 1、INS-1細(xì)胞源于輻射誘導(dǎo)的胰島β細(xì)胞瘤,胰島素含量為8μg/106細(xì)胞,超過80代仍可穩(wěn)定表達(dá),其胰島素含量與原代培養(yǎng)的胰島β細(xì)胞相似,同時(shí)該細(xì)胞自身無分泌胰高血糖素與生長抑素,更有助于...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-2質(zhì)粒pLXSN圖譜

Figure2-1MapofpcB7/GLUT2圖2-1質(zhì)粒pcB7/GLUT2圖譜載體pLXSN：購自美國Clontech公司。其多克隆位點(diǎn)有LTR啟動(dòng)子、新霉素抗性基因Neo及氨芐青抗性

圖2-3pLXSN的包裝

組質(zhì)粒酶切鑒定：抽提取的pL-GLUT2-SN質(zhì)粒用E應(yīng)體系如下)。在37℃水浴反應(yīng)3h，予3μL電泳加膠電泳，紫外燈下觀察電泳結(jié)果拍照記錄。粒EcoRIBamHIBufferddH2O0.2μL0.2μL1μL4.6μL組質(zhì)粒的測(cè)序鑒定：由大連寶生....

圖2-4瞬時(shí)與穩(wěn)定的pLXSN轉(zhuǎn)導(dǎo)

Figure2-4OverviewoftransientandstablepLXSNtransfection圖2-4瞬時(shí)與穩(wěn)定的pLXSN轉(zhuǎn)導(dǎo)裝細(xì)胞PA317培養(yǎng)FBS的RPMI1640培養(yǎng)基，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)L；A：4×10-7....

圖2-6：GLUT-2序列比對(duì)結(jié)果

M1：λ-HindⅢ；M2：DL2000；1：pL-GLUT2-SN/EcoRⅠ+BamHⅠFigure2-5：RestrictionendonucleaseanalysisofpL-GLUT2-SN圖2-5：pL-GLUT2-SN酶切鑒定1.2pL-G....

本文編號(hào)：3913570