【背景與目的】門脈高壓癥是肝硬化的常見臨床癥狀之一,常見阻塞原因主要為肝竇和竇后阻塞,假小葉的形成使得原有血液循環(huán)通路受阻或改道,壓迫血管,限制血液流量。另外,肝竇和竇后阻塞使得淋巴循環(huán)受阻,與血液交換減少,進(jìn)一步造成壓力增高。這一過(guò)程與肝臟的力學(xué)微環(huán)境密切相關(guān),但其中的力學(xué)生物學(xué)機(jī)制仍不明確。與此同時(shí),肝臟是參與糖代謝的重要臟器,在維持血糖穩(wěn)定中具有重要作用。終末期肝病合并門脈高壓患者中,肝臟對(duì)糖的代謝功能出現(xiàn)障礙,引起血糖紊亂,雖然針對(duì)肝糖代謝紊亂的研究有很多,針對(duì)細(xì)胞外壓力對(duì)于肝糖原代謝的作用描述及作用機(jī)制研究較為少見。因此,在本研究中,我們通過(guò)改造細(xì)胞孵化裝置給予肝細(xì)胞施加細(xì)胞外壓力,從而模擬肝硬化門脈高壓中力學(xué)微環(huán)境,探索不同細(xì)胞外壓力條件下肝細(xì)胞糖代謝的改變模式,從而初步研究細(xì)胞外機(jī)械壓力在肝細(xì)胞糖代謝中的調(diào)控機(jī)制。本研究分為以下三個(gè)部分:(1)探討細(xì)胞外壓力對(duì)于肝細(xì)胞糖代謝的影響;(2)驗(yàn)證細(xì)胞外壓力變化是否通過(guò)影響肝糖原的合成使肝癌細(xì)胞中糖原含量減少;(3)初步分析哪些上游信號(hào)通路參與細(xì)胞外壓力對(duì)于肝細(xì)胞糖代謝的影響�！緦�(shí)驗(yàn)方法】一、不同細(xì)胞外壓力對(duì)于肝細(xì)胞內(nèi)糖原含量的...

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1壓力加載裝置示意圖

其中使用硅膠管、氣體減壓閥連接高壓氮?dú)�，以此由氣體輸入口使高壓氣進(jìn)入壓力容器，氣體排出口處使用三通閥連接氣體沖閥以及測(cè)壓計(jì)。行壓力加載時(shí)將經(jīng)滅菌之后的容器主體放入CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，氣體輸入口使用滅菌硅膠管以“回”固定在培養(yǎng)箱中，CO2培養(yǎng)箱外面連接高壓氮?dú)夤蕖?、壓力加載方法（1....

圖2不同壓力加載后HepG2細(xì)胞PAS染色鏡下圖像

染色區(qū)域面積及染色程度較為類似（見圖2）。為進(jìn)一步明確壓力對(duì)于肝細(xì)胞糖原代謝的影響，我們還使用了HL7702細(xì)胞進(jìn)行同步實(shí)驗(yàn)。HL7702細(xì)胞PAS染色后的光鏡下圖像同HepG2細(xì)胞鏡下圖像表現(xiàn)較為相似。在5mmHg壓力組中，HL7702細(xì)胞染色程度較對(duì)照組....

圖3不同壓力加載后HL7702細(xì)胞PAS染色鏡下圖像

海軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文二、肝細(xì)胞糖原含量檢測(cè)結(jié)果分析為了將HepG2細(xì)胞和HL7702細(xì)胞經(jīng)過(guò)壓力加載后的糖原含量進(jìn)行定量分析，我們利用糖原含量試劑盒處理HepG2細(xì)胞和HL7702細(xì)胞，并使用酶標(biāo)分析儀檢測(cè)。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，當(dāng)細(xì)胞外壓力從0mmHg逐漸增高至....

圖4不同壓力加載后HepG2細(xì)胞和HL7702糖原含量分析結(jié)果（***表示P<0.001）

力學(xué)因素對(duì)肝細(xì)胞糖原代謝的影結(jié)果1.很多研究顯示Gys1、Gsk3β、Agl、G6pc3、Pygl等均能對(duì)肝糖原代產(chǎn)生顯著影響，因此在對(duì)HepG2細(xì)胞進(jìn)行10mmHg壓力加載24小時(shí)后，利用real-timePCR方法檢測(cè)對(duì)肝糖原合成有調(diào)控作用的上述調(diào)控因子的....

本文編號(hào)：3903587