發(fā)布時(shí)間：2024-02-02 19:08

　　乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)一直以來(lái)就威脅著全人類的健康,核苷(酸)類似物作為抗HBV感染的主要藥物,在抑制病毒方面取得了不錯(cuò)的成果。但隨著用藥時(shí)間延長(zhǎng),HBV都會(huì)在不同程度上表現(xiàn)出耐藥,嚴(yán)重制約后續(xù)藥物的選擇及其療效,那么,早期監(jiān)測(cè)耐藥就顯得至關(guān)重要。目前,多數(shù)HBV耐藥突變檢測(cè)技術(shù)限于實(shí)驗(yàn)研究,只有直接測(cè)序法,熒光定量PCR和線性探針分析法三種檢測(cè)技術(shù)用于臨床耐藥分析。相對(duì)其他兩種技術(shù)而言,基于反向雜交原理的線性探針分析法簡(jiǎn)便,快速,可以實(shí)現(xiàn)多位點(diǎn)檢測(cè),具有廣闊的應(yīng)用前景。拉米夫定,阿德福韋和恩替卡韋是最早應(yīng)用于臨床乙型肝炎治療的藥物,本研究就是利用反向雜交原理,建立一種同時(shí)檢測(cè)HBV對(duì)這三種藥物耐藥的方法。為了優(yōu)化反應(yīng)條件,本研究還構(gòu)建了HBV耐藥標(biāo)準(zhǔn)株。隨后,對(duì)已建立的反向雜交體系進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)和臨床評(píng)估。 目的:構(gòu)建HBV耐藥標(biāo)準(zhǔn)株,利用野生和耐藥標(biāo)準(zhǔn)株建立一種特異、靈敏地檢測(cè)HBV對(duì)三種核苷(酸)類似物耐藥的方法,并對(duì)確立的檢測(cè)體系進(jìn)行評(píng)估以便了解其可行性。 方法:1.以擴(kuò)增得到的267bp的突變片段(rt169T, rt173L, rt18...

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1HBV耐藥標(biāo)準(zhǔn)株構(gòu)建示意圖

圖1-1HBV耐藥標(biāo)準(zhǔn)株構(gòu)建示意圖Fig.1-1SchematicdiagramofconstructionofHBVdrug-resistantstandardstrain.Note:Onlyattenresistantcodonpositi....

圖1-3HBV耐藥株消化前和消化后的電泳圖譜

圖1-4HBV耐藥標(biāo)準(zhǔn)株與野生標(biāo)準(zhǔn)株的序列比對(duì)結(jié)果Fig.1-4AlignmentresultofHBVwild-typeanddrug-resistantstandardstrain.SequenceW:HBVwild-typestandar....

圖1-4HBV耐藥標(biāo)準(zhǔn)株與野生標(biāo)準(zhǔn)株的序列比對(duì)結(jié)果

物通過(guò)作用于HBVDNA聚合酶發(fā)揮抗病毒作用為四個(gè)功能域，其中逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)（reversetransc的關(guān)鍵區(qū)域，拉米夫定，阿德福韋和恩替卡韋耐別為：rtM204V/I[4],rtL180M和rtV173L/G[22,23]15S[25]；rtI169T，rtT184....

圖2-1反向雜交原理的示意圖

后復(fù)性帶來(lái)的影響。研究發(fā)現(xiàn)，正向引物與反向引物的比例為1000：1，100：1，10：1和1：1時(shí)，PCR產(chǎn)物的雜交信號(hào)強(qiáng)度基本一致，說(shuō)明不對(duì)稱PCR確實(shí)提高了有效鏈的比例，但對(duì)特異性的改善不明顯。3.增加地高辛的標(biāo)記數(shù)目1)在PCR過(guò)程中摻入d-UTP：....

本文編號(hào)：3893016