發(fā)布時(shí)間：2024-02-02 11:13

　　背景隨著人類生活方式的轉(zhuǎn)變,非酒精性脂肪肝病(NAFLD)成為危害人類健康的主要疾病之一,目前尚缺乏特異性的治療藥物。研究表明,NAFLD的惡化與肝臟免疫環(huán)境的紊亂有關(guān),而iNKT細(xì)胞作為免疫調(diào)節(jié)的中心細(xì)胞,在NAFLD中的確切作用及機(jī)制仍不明確。因此,本課題旨在探究iNKT細(xì)胞對(duì)非酒精性脂肪肝病的調(diào)控作用及相關(guān)機(jī)制,為以iNKT細(xì)胞為靶點(diǎn)的NAFLD的免疫學(xué)防治提供新的治療策略。方法高脂飲食(HFD)和蛋氨酸/膽堿缺陷飲食(MCD)分別喂養(yǎng)C57BL/6J建立NAFL和NASH模型,腹腔注射α-Galcer進(jìn)行干預(yù)。同時(shí)采用免疫磁珠分選技術(shù)(MACS)分離純化脾臟iNKT2細(xì)胞,過繼輸入NASH小鼠體內(nèi)。通過小鼠外觀、體重、血液生化指標(biāo)(TG、TCH、HDL、LDL、ALT、AST)、肝臟指數(shù)、肝臟組織H&E染色觀察干預(yù)效果;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肝臟和外周血iNKT細(xì)胞及其亞群(iNKT1/iNKT2);Western Blot檢測(cè)肝臟組織SREBP-1c,PPAR-α,NF-κB等相關(guān)蛋白表達(dá)水平,體外觀察IL-4對(duì)HepG2細(xì)胞脂肪變性模型的干預(yù)效果,探究α-Galcer和過繼...

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 研究問題的提出
    1.2 研究的目的與意義
    1.3 國內(nèi)外研究綜述
        1.3.1 非酒精性脂肪肝病
        1.3.2 NAFLD的脂質(zhì)代謝機(jī)制
        1.3.3 NAFLD的免疫學(xué)機(jī)制
        1.3.4 Invariant Nature Kill T Cells—iNKT細(xì)胞
        1.3.5 NKT細(xì)胞與非酒精性脂肪肝病
    1.4 思路和方法
    1.5 研究內(nèi)容
        1.5.1 NAFL和 NASH模型小鼠的建立及α-GalCer干預(yù)效果研究
        1.5.2 α-GalCer對(duì) NAFL和 NASH模型小鼠免疫狀態(tài)影響研究
        1.5.3 iNKT細(xì)胞調(diào)控肝臟脂質(zhì)代謝和炎癥的機(jī)制研究
        1.5.4 iNKT2 細(xì)胞過繼輸注調(diào)控NASH的研究
        1.5.5 iNKT2 細(xì)胞是否通過分泌IL-4 直接調(diào)節(jié)NAFLD
    1.6 創(chuàng)新點(diǎn)
第二章 NAFLD模型小鼠的建立及α-GalCer干預(yù)效果研究
    2.1 序言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.3 主要儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 動(dòng)物模型建立及處理
        2.3.2 葡萄糖耐量(GTT)及胰島素抵抗(ITT)檢測(cè)
        2.3.3 血清生化指標(biāo)分析
        2.3.4 肝臟指數(shù)
        2.3.5 肝臟組織H&E染色
        2.3.6 肝臟組織學(xué)評(píng)分
        2.3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 NAFL小鼠體重升高,NASH小鼠體重降低。
        2.4.2 NAFL和 NASH小鼠均未產(chǎn)生葡萄糖耐受和胰島素抵抗
        2.4.3 外周血生化指標(biāo)變化
        2.4.4 肝臟外觀及肝臟指數(shù)變化
        2.4.5 肝臟H&E染色及組織學(xué)評(píng)分
        2.4.6 肝臟脂質(zhì)沉積和炎性狀況評(píng)價(jià)
    2.5 討論
第三章 α-GalCer調(diào)節(jié)NAFLD模型小鼠的免疫狀態(tài)的研究
    3.1 序言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.3 主要儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 外周血的采集和肝臟淋巴細(xì)胞懸液的制備
        3.3.2 小鼠外周血iNKT細(xì)胞頻率檢測(cè)
        3.3.3 小鼠肝臟iNKT細(xì)胞頻率檢測(cè)
        3.3.4 小鼠肝臟iNKT1/2 細(xì)胞頻率的檢測(cè)
        3.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 α-GalCer干預(yù)的NASH小鼠外周血iNKT細(xì)胞頻率升高
        3.4.2 α-GalCer干預(yù)的NAFL小鼠肝臟iNKT細(xì)胞頻率升高,NASH小鼠肝臟iNKT細(xì)胞頻率降低
        3.4.3 α-GalCer干預(yù)的NAFL小鼠肝臟以iNKT2 亞群為主,NASH小鼠肝臟以iNKT1亞群為主
    3.5 討論
第四章 iNKT細(xì)胞調(diào)控肝臟脂質(zhì)代謝和炎癥的機(jī)制研究
    4.1 序言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.3 主要儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 肝臟組織采集與處理
        4.3.2 Western Blot分析小鼠肝臟PPAR-α、SREBP-1c、NF-κB蛋白的表達(dá)水平
        4.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 α-GalCer下調(diào)NAFL小鼠肝臟SREBP-1c蛋白表達(dá)和上調(diào)PPAR-α蛋白表達(dá)
        4.4.2 α-GalCer降低NASH小鼠肝臟SREBP-1c蛋白表達(dá)和抑制NF-κB蛋白的磷酸化
    4.5 討論
第五章 iNKT2 細(xì)胞過繼輸注調(diào)控NASH的研究
    5.1 序言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.2.3 主要儀器
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 iNKT2 細(xì)胞分離純化
        5.3.2 iNKT2 細(xì)胞過繼輸注
        5.3.3 外周血生化指標(biāo)檢測(cè)
        5.3.4 肝臟組織H&E染色及脂質(zhì)和炎性評(píng)分
        5.3.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)iNKT細(xì)胞頻率及亞群
        5.3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.4.1 腹腔注射α-GalCer的小鼠脾臟分離純化得到大量iNKT2 細(xì)胞
        5.4.2 iNKT2 細(xì)胞過繼輸注對(duì)NASH小鼠體重?zé)o明顯影響
        5.4.3 iNKT2 細(xì)胞過繼輸注對(duì)NASH小鼠生化指標(biāo)無影響
        5.4.4 iNKT2 細(xì)胞過繼輸注對(duì)肝臟脂質(zhì)沉積和炎癥無改善作用
        5.4.5 iNKT2 細(xì)胞過繼輸注小鼠外周血iNKT細(xì)胞頻率無變化
        5.4.6 iNKT2 細(xì)胞過繼輸注小鼠的肝臟iNKT及 iNKT1 細(xì)胞頻率升高
    5.5 討論
第六章 IL-4對(duì)HepG2 細(xì)胞脂肪變性的干預(yù)研究
    6.1 序言
    6.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        6.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        6.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        6.2.3 主要儀器
    6.3 實(shí)驗(yàn)方法
        6.3.1 HepG2 細(xì)胞的培養(yǎng)
        6.3.2 油酸鈉(OA)和棕櫚酸鈉(PA)的溶解
        6.3.3 HepG2 細(xì)胞變性模型的建立及IL-4 處理
        6.3.4 油紅O染色
    6.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    6.5 討論
結(jié)論
研究不足與展望
參考文獻(xiàn)
附表
致謝
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果



本文編號(hào)：3892566