目的:1.探討脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(Adipose Tissue-derived Mesenchymal Stem Cells,ADMSC)在體外分離、培養(yǎng)和純化的方法,并根據(jù)其表型進(jìn)行鑒定,更好的提供間充質(zhì)干細(xì)胞的來(lái)源。2.建立大鼠小腸缺血再灌注損傷動(dòng)物模型并對(duì)其進(jìn)行評(píng)估。3.探討脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)小腸缺血再灌注損傷的修復(fù)作用及機(jī)制。方法:1.取雄性SD大鼠腹股溝區(qū)的脂肪組織;進(jìn)行分離、培養(yǎng)、純化ADMSC(貼壁培養(yǎng)法),脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)到70%-80%時(shí)進(jìn)而傳代;第一次傳代獲得的ADMSC為第一代(P1),使用P3-P5進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。2.建立雄性SD大鼠小腸缺血再灌注損傷動(dòng)物模型:SD大鼠禁食12小時(shí)后,2%戊巴比妥(2mg/kg)腹腔注射麻醉SD大鼠(200-250克)后,腹部皮膚消毒并打開(kāi)腹腔,分離出腸系膜上動(dòng)脈,使用無(wú)損傷小血管夾夾閉之60分鐘后移除血管夾,縫合腹壁,建立SD大鼠小腸缺血再灌注損傷動(dòng)物模型并對(duì)其進(jìn)行評(píng)估。3.采用ADMSC腹腔注射處理,觀察對(duì)小腸缺血再灌注損傷的修復(fù)作用及調(diào)控的機(jī)制;結(jié)果:1.將脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成功分離、培養(yǎng)、純化后,24小時(shí)后利用倒置相差顯微...

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略語(yǔ)／符號(hào)說(shuō)明
前言
第一部分 大鼠ADMSC的分離培養(yǎng)、鑒定及小腸缺血再灌注損傷模型
    材料與方法
        1 主要試劑和儀器
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 主要試劑
            1.3 常用溶液配制
            1.4 需要儀器
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.2 ADMSC的保存和復(fù)蘇
            2.3 ADMSC的標(biāo)記及鑒定
            2.4 小腸缺血再灌注損傷模型建立
            2.5 小腸缺血再灌損傷的評(píng)估
        3 統(tǒng)計(jì)分析
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1 ADMSC的形態(tài)學(xué)觀察
        2 ADMSC的流式細(xì)胞的鑒定
        3 小腸缺血再灌損傷的模型的變化和確認(rèn)
        4 小腸再灌注損傷損傷模型的免疫組化的確認(rèn)
    討論
第二部分 ADMSC對(duì)腸缺血再灌注損傷的修復(fù)作用和機(jī)制
    材料與方法
        1 主要試劑和儀器
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 主要試劑
            1.3 常用溶液配制
            1.4 需要儀器
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.2 ADMSC的保存和復(fù)蘇
            2.3 ADMSC的標(biāo)記及鑒定
            2.4 小腸缺血再灌注損傷模型建立及分組
            2.5 小腸缺血再灌損傷的評(píng)估
            2.6 組織病理學(xué)(HE)分析
            2.7 組織免疫熒光分析
            2.8 ADMSC腹腔內(nèi)移植
            2.9 免疫組織化學(xué)染色法(immunohistochemistry,IHC)
            2.10 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)
        3 統(tǒng)計(jì)分析
    結(jié)果
        1 移植ADMSC在小腸缺血再灌注損傷的病變區(qū)表達(dá)
        2 ADMSC減輕腸缺血再灌注損傷
        3 病理評(píng)估顯示ADMSC促進(jìn)愈合
        4 ADMSC減少腸缺血再灌注損傷中IL-6 炎癥因子表達(dá)
        5 ADMSC促進(jìn)腸缺血再灌注損傷中血管再生及與COX2-PGE2通路相關(guān)
        6 ADMSC促進(jìn)小腸缺血再灌注損傷COX2 表達(dá)
    討論
全文結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3871980