腸道是人體內(nèi)最大的消化器官和免疫器官,因此腸道健康對人類正常生活有舉足輕重的影響。炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease,IBD)是指一類發(fā)生于腸道的慢性炎癥,包括潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis,UC)和克羅恩病(Crohn’s disease,CD)兩種主要類型。UC發(fā)病的具體機制目前尚不清楚,目前普遍認為這是一個多因素相互作用而導致的疾病,主要包括微生物、環(huán)境、遺傳、免疫等因素。本論文主要利用小鼠結(jié)腸炎模型,探究ES2A在潰瘍性結(jié)腸炎中的作用機制。我們從醫(yī)院收集了 UC患者和正常人各20例的血漿和腸粘膜組織,分別用ELISA和western blot的方法檢測ES2A的表達,結(jié)果發(fā)現(xiàn)UC患者的ES2A的表達水平分別下調(diào)了 26.5%和55.3%,提示ES2A可能在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病中起作用。我們利用葡聚糖硫酸鈉(Dextran sulphate sodium,DSS)誘導的小鼠結(jié)腸炎模型,探究ES2A在UC中的發(fā)病機制。我們測定了過表達ES2A組、敲降ES2A組和對照組體重變化、疾病活動指數(shù)和結(jié)腸縮短程度等癥狀指標。結(jié)果顯示,在造模第10...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：碩士

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摘要
ABSTRACT
第1章 引言
    1.1 潰瘍性結(jié)腸炎概述
    1.2 潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機制
        1.2.1 遺傳因素
        1.2.2 微生物因素
        1.2.3 腸道上皮屏障
        1.2.4 免疫因素
        1.2.5 潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機制總結(jié)
    1.3 水蛭的吸血策略及彈性蛋白酶的促炎活性
    1.4 本課題的研究內(nèi)容及意義
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 倫理學聲明
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 實驗試劑、耗材
        2.1.4 實驗試劑的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠結(jié)腸炎模型的構(gòu)建方法
        2.2.2 過表達、敲降ES2A病毒的設(shè)計與制備
        2.2.3 石蠟切片及HE染色
        2.2.4 組織蛋白和RNA的提取
        2.2.5 蛋白質(zhì)免疫印跡
        2.2.6 實時熒光定量PCR
        2.2.7 酶聯(lián)免疫吸附測定
        2.2.8 BCA法測定蛋白質(zhì)濃度
        2.2.9 腸系膜淋巴結(jié)和腸道固有層單個核細胞的分選
        2.2.10 流式細胞術(shù)檢測Treg細胞比例
        2.2.11 流式細胞術(shù)檢測Th17細胞比例
        2.2.12 IL-6刺激細胞實驗
        2.2.13 IL-6刺激小鼠實驗
        2.2.14 菲牛蛭粗提物的獲取與HMEI的分離純化
        2.2.15 HMEI的質(zhì)譜鑒定與測序
        2.2.16 酶動力學實驗
        2.2.17 中性粒細胞的分離
        2.2.18 中性粒細胞NET形成實驗
第3章 ES2A與潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)的病理機制研究
    3.1 潰瘍性結(jié)腸炎患者的腸粘膜組織和血漿中ES2A水平下調(diào)
    3.2 ES2A緩解DSS誘導的小鼠體重下降、疾病活動指數(shù)和結(jié)腸縮短
    3.3 ES2A減少DSS誘導小鼠的結(jié)腸組織病學損傷
    3.4 ES2A緩解DSS誘導的小鼠血清和結(jié)腸組織中炎癥因子的升高
    3.5 ES2A增加DSS誘導小鼠結(jié)腸炎過程中Treg細胞比例
    3.6 ES2A減少DSS誘導小鼠結(jié)腸炎過程中Th17細胞比例
    3.7 ES2A抑制TCRα^-/-小鼠自發(fā)性潰瘍性結(jié)腸炎
    3.8 IL-6下調(diào)ES2A的表達
第4章 從菲牛蛭中提取的新型彈性蛋白酶抑制劑的活性研究
    4.1 HMEI的分離與純化
    4.2 HMEI的一級結(jié)構(gòu)
    4.3 HMEI-A抑制中性粒細胞胞外殺菌網(wǎng)絡(luò)的形成
第5章 討論
參考文獻
致謝
在讀期間發(fā)表的學術(shù)論文與取得的其他研究成果



本文編號：3871853