目的:探討miR-31對DSS誘發(fā)結(jié)腸炎小鼠TLR4/NF-κB信號通路和凋亡相關(guān)蛋白的影響。方法:①小鼠結(jié)腸炎實(shí)驗(yàn):用1%葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘發(fā)小鼠潰瘍性結(jié)腸炎(UC)。14只FVB非轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分為control組(n=6),DSS組(n=8),16只FVB miR-31轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分為miR-31過表達(dá)組(n=8),miR-31過表達(dá)+DSS組(n=8),DSS溶于水后通過飲水給予小鼠。DSS組和miR-31+DSS組第一周飲用1%DSS水,第二周飲用正常無菌水,第三周飲用1%DSS水,如此5周后造模完成,之后留取小鼠的結(jié)腸組織,通過Western blot和IHC檢測小鼠結(jié)腸組織NF-κB p65、TLR4、Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá); TUNEL檢測小鼠結(jié)腸組織細(xì)胞凋亡。②細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn):在人結(jié)腸上皮細(xì)胞系HCT 116細(xì)胞中通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)染miR-31 mimic和inhibitor,使miR-31過表達(dá)或敲低,每組均進(jìn)行三次重復(fù),48 h后收取細(xì)胞,通過Western blot檢測NF-κB p65、TLR4蛋白的表達(dá)。結(jié)果:①動物實(shí)驗(yàn)中,與control...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 動物與試劑
    1.2 小鼠DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎模型的建立
    1.3 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
    1.4 Western blot檢測NF-κB p65、TLR4、Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá)
    1.5 免疫組織化學(xué)(IHC)法檢測NF-κB p65、TLR4、Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá)
    1.6 原位末端轉(zhuǎn)移酶(TUNEL)法檢測小鼠結(jié)腸組織細(xì)胞凋亡
    1.7 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 Western blot檢測miR-31對小鼠結(jié)腸組織中NF-κB和TLR4蛋白表達(dá)的影響
    2.2 免疫組織化學(xué)法(IHC)檢測miR-31對小鼠結(jié)腸組織中NF-κB和TLR4蛋白表達(dá)的影響
    2.3 Western blot檢測miR-31對小鼠結(jié)腸組織中Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)的影響
    2.4 免疫組織化學(xué)法(IHC)檢測miR-31對小鼠結(jié)腸組織中Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)的影響
    2.5 TUNEL法檢測miR-31對小鼠結(jié)腸組織細(xì)胞凋亡的影響
    2.6 miR-31對HCT 116細(xì)胞中NF-κB、TLR4蛋白表達(dá)的影響
3 討論



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